單克隆抗體上清的制備實驗
實驗材料 雜交瘤試劑、試劑盒 完全培養基儀器、耗材 培養箱轉子離心機實驗步驟 1. 將雜文瘤置于一個盛有完全DMEM-10培養基的175 cm2組織培養瓶中，置37 ℃CO2培養箱中，直至生長旺盛適于分傳。2. 按1：10的比例將細胞分傳到一個新的175 cm2的培養瓶中，加入完全DMEM-10培養液到總液量為100 ml，并置CO2培養箱中直至細胞過度生長，此時溶液變酸（變黃色），細胞死亡（約5天）。 3. 將培養瓶中的內容物轉移到無菌的50 ml 的錐形離心管中，室溫下1 500 g 離心10 min，收集上清，棄沉淀。4. 用ELISA法或用流式細胞儀檢測MAb上清的滴度。5. 將上清無菌保存，在4℃時通常可穩定地存放數周至數月；在-20℃時可存放數月至數年；-70℃時可永久保存。分裝成數份凍存，盡量避免反復凍融。......閱讀全文
單克隆抗體上清制備實驗
與多克隆抗血清相比，采用單克隆抗體（MAb）的最主要的優勢就是有可能得到大量的特異性單克隆抗體可供應用。MAb 制劑通常包括雜交瘤上清、由接種了雜交瘤的小鼠制備的腹水，以及純化的 MAb。雜交瘤上清容易制備，特別是用于制備大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的濃度則相對較低。為得到純化的制劑，可
單克隆抗體上清制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 目的雜交瘤試劑、試劑盒 完全 DMEM-10 培養液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）儀器、耗材 50 ml 無菌錐形離心管175 cm2 組織培養瓶實驗步驟 1. 將雜交瘤置于一個盛有完全 DMEM-10 培養基的 175 cm2 組織培養瓶中
單克隆抗體上清的制備實驗——單抗上清大量制備
實驗材料抗體試劑、試劑盒DMEM-10乙醇儀器、耗材離心機培養瓶轉子實驗步驟1. ?重復基本方案1步驟1，按1：10分傳到終體積100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。?2. ?準備傳代細胞時，應將175 cm2培養瓶中的內容物（100 ml）轉移到—個850 cm2旋轉培養瓶中，另加15
單克隆抗體上清的制備實驗
實驗材料 雜交瘤試劑、試劑盒 完全培養基儀器、耗材 培養箱轉子離心機實驗步驟 1. ?將雜文瘤置于一個盛有完全DMEM-10培養基的175 cm2組織培養瓶中，置37 ℃CO2培養箱中，直至生長旺盛適于分傳。2. ?按1：10的比例將細胞分傳到一個新的175 cm2的培養瓶中，加入完全DMEM-10
單克隆抗體上清制備實驗——大量制備
實驗材料目的雜交瘤試劑、試劑盒完全 DMEM-10 培養液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）儀器、耗材250 ml 無菌錐形離心管轉瓶培養裝置850 cm2 旋轉培養瓶175 cm2 組織培養瓶實驗步驟1. 重復基本方案 1 步驟 1，并按 1:10 分傳到終體積為 1
單克隆抗體上清的制備實驗2
實驗材料抗體試劑、試劑盒PBS儀器、耗材離心機離心管實驗步驟1. ?同備擇方案1中大規模制備MAb上清的步驟1~4，但等細胞長到合適的密度時就應收獲細胞，或者是在細胞生長的平臺期收獲。?2. ?將細胞倒入無菌的250 ml 錐形離心管中，于4℃ 250 g 離心15 min，棄上清。?3. ?置細胞
單克隆抗體上清的制備實驗1
實驗材料雜交瘤試劑、試劑盒完全培養基儀器、耗材培養箱轉子離心機實驗步驟1. ?將雜文瘤置于一個盛有完全DMEM-10培養基的175 cm2組織培養瓶中，置37 ℃CO2培養箱中，直至生長旺盛適于分傳。2. ?按1：10的比例將細胞分傳到一個新的175 cm2的培養瓶中，加入完全DMEM-10培養液到
單克隆抗體培養上清與腹水的制備—上清的制備
實驗步驟材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)雜 交 瘤（單 元 1.3)V DMEM-IO 完全培養基175 cm2?組織培養用細頸瓶50m l 塑料錐底離心管，無菌Beckman 離心機和 TH-4 轉 子（或同等設備）1.將雜交瘤細胞移入含有 DMEM-IO 完全培養基的 175 cm2?培
單克隆抗體培養上清與腹水的制備——上清的大規模制備
實驗步驟附 加 材 料（其他材料見基本方案 1)含有 5?10 mmol/L HEPES 的 DMEM 完全培養基和 DMEM-IO 完 全 培 養 基（附錄1) ， pH 為 7. 2?7.47 0 % (VAO 乙醇FBS1 0 % (m A O 疊氮鈉，可選的850 cm2?滾筒式培養瓶和滾筒
單克隆抗體上清制備實驗——大量制備雜交瘤或細胞系
實驗步驟1. 同備擇方案 1 中大規模制備 MAb 上清的步驟 1～4，但等細胞長到合適的密度時就應收獲細胞，或者是在細胞生長的平臺期收獲。2. 將細胞倒入無菌的 250 ml 錐形離心管中，于 4℃ 250 g 離心 15 min, 棄上清，置細胞沉淀于冰上。3. 將 10 瓶細胞沉淀用 4℃ 的
單克隆抗體培養上清與腹水的制備
材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)雜 交 瘤（單 元 1.3)V DMEM-IO 完全培養基175 cm2?組織培養用細頸瓶50m l 塑料錐底離心管，無菌Beckman 離心機和 TH-4 轉 子（或同等設備）1.將雜交瘤細胞移入含有 DMEM-IO 完全培養基的 175 cm2?培養瓶中。
單克隆抗體的制備實驗
單克隆抗體的制備實驗可以用于：（1）將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體；（2）該技術是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。實驗方法原理單克隆抗體技術(monoclo
單克隆抗體培養上清與腹水的制備——雜交瘤的大規模制備
實驗步驟附 加 材 料（其 他 材 料 見備選方案 1 )PBS, 4°C1.增 殖 雜 交 瘤（見備選方案 1 ，步 驟 1?4)，但與之前不同的是，當細胞生長密度適中或處于穩定生長期時停止培養。根據所需細胞數量配置多個 175 cm2 培 養 瓶（每個培養瓶可盛 2. 4L 培養基，每毫升培養基
單克隆抗體的腹水制備實驗
實驗材料雜交瘤細胞試劑、試劑盒完全DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS儀器、耗材注射針頭離心管轉子離心機實驗步驟1. ?用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細胞。?2. ?在175 cm2培養瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培養液，進
單克隆抗體的腹水制備實驗
實驗材料 雜交瘤細胞試劑、試劑盒 完全DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS儀器、耗材 注射針頭離心管轉子離心機實驗步驟 1. ?用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細胞。?2. ?在175 cm2培養瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培
單克隆抗體腹水制備實驗
實驗方法原理 高滴度的單克隆抗體的制備可以通過在小鼠的腹腔內接種能產生 MAb 的雜交瘤細胞，從而產生腹水來獲得。腹水可收集幾次，經熱滅活、滴定后儲存。實驗材料 裸鼠（6～8 周齡 無特定病原體／注射了鼠鼠雜交瘤細胞的同系宿主）目的雜交瘤試劑、試劑盒 完全DMEM-10培養液（含10mmol／L H
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加
單克隆抗體的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩
單克隆抗體的制備
實驗方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加以擴增、冷凍和
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 融合后的候選雜交瘤細胞系BSA 交聯的同種磷酸肽BSA 交聯的同種非磷酸肽BSA 交聯的非同種磷酸酪氨酸肽BSA 交聯的同源磷酸肽試劑、試劑盒 篩選稀釋液陰性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫前血清）陽性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫后血清）儀器、耗材 HT 培養基96
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
實驗材料融合后的候選雜交瘤細胞系BSA 交聯的同種磷酸肽BSA 交聯的同種非磷酸肽BSA 交聯的非同種磷酸酪氨酸肽BSA 交聯的同源磷酸肽試劑、試劑盒篩選稀釋液陰性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫前血清）陽性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫后血清）儀器、耗材HT 培養基96 孔聚苯乙烯組織培養板
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 融合后的候選雜交瘤細胞系 BSA 交聯
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物選擇免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備原理
單克隆抗體技術原理如下：由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
單克隆抗體的制備步驟
1、免疫動物的選擇：免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2、細胞融合：采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同