單克隆抗體培養上清與腹水的制備——雜交瘤的大規模制備

附 加 材 料（其 他 材 料 見備選方案 1 )

PBS, 4°C

1.增 殖 雜 交 瘤（見備選方案 1 ，步 驟 1?4)，但與之前不同的是，當細胞生長密度適中或處于穩定生長期時停止培養。根據所需細胞數量配置多個 175 cm2 培 養 瓶（每個培養瓶可盛 2. 4L 培養基，每毫升培養基可生產數量級為 IO₆ 的細胞）。將每個培養瓶作為獨立的單位進行培養。肉眼觀察培養基顏色和混濁度，并每天對每個培養瓶進行細胞計數和成活率檢測，及時停止細胞培養，以免細胞過度增殖。

2.將細胞倒入無菌的 250 ml 錐底離心管， 4°C ， 250 g 離 心 15 min，棄上清。每個離心管可 連 續 2 次離心細胞。

3.將細胞沉淀置于冰面上。每 10 個沉淀合并入一個離心管，用 250 ml 4°C PBS 重懸細胞 。 4°C ， 250 g 離 心 15 min，棄上清。重復上述步驟，并進一步將多個離心管的沉淀移入一個離心管。洗 滌 3 次 ，進一步處 理 細 胞（如細胞裂解、核素標記等）。也可以3 次洗滌較小的細胞沉淀物后進一步處理細胞。