抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
基本方案 實驗方法原理 實驗材料 融合后的候選雜交瘤細胞系 BSA 交聯的同種磷酸肽 BSA 交聯的同種非磷酸肽 BSA 交聯的非同種磷酸酪氨酸肽 BSA 交聯的同源磷酸肽 試劑、試劑盒 篩選稀釋液 陰性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫前血清） 陽性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫后血清） 儀器......閱讀全文
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 融合后的候選雜交瘤細胞系BSA 交聯的同種磷酸肽BSA 交聯的同種非磷酸肽BSA 交聯的非同種磷酸酪氨酸肽BSA 交聯的同源磷酸肽試劑、試劑盒 篩選稀釋液陰性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫前血清）陽性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫后血清）儀器、耗材 HT 培養基96
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
實驗材料融合后的候選雜交瘤細胞系BSA 交聯的同種磷酸肽BSA 交聯的同種非磷酸肽BSA 交聯的非同種磷酸酪氨酸肽BSA 交聯的同源磷酸肽試劑、試劑盒篩選稀釋液陰性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫前血清）陽性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫后血清）儀器、耗材HT 培養基96 孔聚苯乙烯組織培養板
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 融合后的候選雜交瘤細胞系 BSA 交聯
抗磷酸肽的多克隆抗體制備實驗
實驗材料用磷酸肽-BSA 交聯物免疫過的兔的粗制血清試劑、試劑盒PBS／疊氮化物MgCl2儀器、耗材分光光度計透析袋填裝有 BSA-瓊脂糖親和介質的柱子填裝有磷酸酪氨酸親和介質的柱子填裝有同種非磷酸肽親和介質的柱子填裝有同源的磷酸肽親和介質的柱子填裝有陽性-篩選的磷酸肽親和介質的柱子實驗步驟1. 將
抗磷酸肽的多克隆抗體制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 用磷酸肽-BSA 交聯物免疫過的兔的粗制血清試劑、試劑盒 PBS／疊氮化物MgCl2儀器、耗材 分光光度計透析袋填裝有 BSA-瓊脂糖親和介質的柱子填裝有磷酸酪氨酸親和介質的柱子填裝有同種非磷酸肽親和介質的柱子填裝有同源的磷酸肽親和介質的柱子填裝有陽性-篩選的磷酸肽親和介質的
抗海藻糖酶單克隆抗體的制備
通過腹腔注射加佐劑的重組蛋白或合成的多肽來免疫8周齡的雌性小鼠BALB/c，第一次免疫問隔兩周后，每周連續注射3-4次。最后一次注射后3-4天殺死小鼠，用改良的Kohler和Milstein方法將脾細胞與B細胞瘤株P3-X63-Ag8融合。細胞融合產生8種雜交瘤克隆株：KM2275、KM2276、K
單克隆抗體的制備實驗
單克隆抗體的制備實驗可以用于：（1）將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體；（2）該技術是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。實驗方法原理單克隆抗體技術(monoclo
單克隆抗體上清制備實驗——大量制備
實驗材料目的雜交瘤試劑、試劑盒完全 DMEM-10 培養液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）儀器、耗材250 ml 無菌錐形離心管轉瓶培養裝置850 cm2 旋轉培養瓶175 cm2 組織培養瓶實驗步驟1. 重復基本方案 1 步驟 1，并按 1:10 分傳到終體積為 1
單克隆抗體上清的制備實驗
實驗材料 雜交瘤試劑、試劑盒 完全培養基儀器、耗材 培養箱轉子離心機實驗步驟 1. ?將雜文瘤置于一個盛有完全DMEM-10培養基的175 cm2組織培養瓶中，置37 ℃CO2培養箱中，直至生長旺盛適于分傳。2. ?按1：10的比例將細胞分傳到一個新的175 cm2的培養瓶中，加入完全DMEM-10
單克隆抗體的腹水制備實驗
實驗材料雜交瘤細胞試劑、試劑盒完全DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS儀器、耗材注射針頭離心管轉子離心機實驗步驟1. ?用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細胞。?2. ?在175 cm2培養瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培養液，進
單克隆抗體的腹水制備實驗
實驗材料 雜交瘤細胞試劑、試劑盒 完全DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS儀器、耗材 注射針頭離心管轉子離心機實驗步驟 1. ?用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細胞。?2. ?在175 cm2培養瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培
單克隆抗體上清制備實驗
與多克隆抗血清相比，采用單克隆抗體（MAb）的最主要的優勢就是有可能得到大量的特異性單克隆抗體可供應用。MAb 制劑通常包括雜交瘤上清、由接種了雜交瘤的小鼠制備的腹水，以及純化的 MAb。雜交瘤上清容易制備，特別是用于制備大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的濃度則相對較低。為得到純化的制劑，可
單克隆抗體上清制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 目的雜交瘤試劑、試劑盒 完全 DMEM-10 培養液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）儀器、耗材 50 ml 無菌錐形離心管175 cm2 組織培養瓶實驗步驟 1. 將雜交瘤置于一個盛有完全 DMEM-10 培養基的 175 cm2 組織培養瓶中
單克隆抗體腹水制備實驗
實驗方法原理 高滴度的單克隆抗體的制備可以通過在小鼠的腹腔內接種能產生 MAb 的雜交瘤細胞，從而產生腹水來獲得。腹水可收集幾次，經熱滅活、滴定后儲存。實驗材料 裸鼠（6～8 周齡 無特定病原體／注射了鼠鼠雜交瘤細胞的同系宿主）目的雜交瘤試劑、試劑盒 完全DMEM-10培養液（含10mmol／L H
單克隆抗體上清的制備實驗2
實驗材料抗體試劑、試劑盒PBS儀器、耗材離心機離心管實驗步驟1. ?同備擇方案1中大規模制備MAb上清的步驟1~4，但等細胞長到合適的密度時就應收獲細胞，或者是在細胞生長的平臺期收獲。?2. ?將細胞倒入無菌的250 ml 錐形離心管中，于4℃ 250 g 離心15 min，棄上清。?3. ?置細胞
單克隆抗體上清的制備實驗1
實驗材料雜交瘤試劑、試劑盒完全培養基儀器、耗材培養箱轉子離心機實驗步驟1. ?將雜文瘤置于一個盛有完全DMEM-10培養基的175 cm2組織培養瓶中，置37 ℃CO2培養箱中，直至生長旺盛適于分傳。2. ?按1：10的比例將細胞分傳到一個新的175 cm2的培養瓶中，加入完全DMEM-10培養液到
抗肽抗體的制備實驗
提高免疫原性肽的抗血清，是最簡單的方法，獲得非隔離的蛋白質的抗體，例如，對來自DNA序列信息的推定蛋白質序列。 這種方法也是有用的，當隔離的抗原是困難或費時，或當抗原是一個大的蛋白家族的成員。實驗步驟： ?將10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉
單克隆抗體上清的制備實驗——單抗上清大量制備
實驗材料抗體試劑、試劑盒DMEM-10乙醇儀器、耗材離心機培養瓶轉子實驗步驟1. ?重復基本方案1步驟1，按1：10分傳到終體積100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。?2. ?準備傳代細胞時，應將175 cm2培養瓶中的內容物（100 ml）轉移到—個850 cm2旋轉培養瓶中，另加15
抗肽抗體的制備實驗1
實驗材料抗體試劑、試劑盒磷酸鈉緩沖液MBS二甲基酰胺EDTAPBS儀器、耗材分光光度計離心機實驗步驟1. ?將10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液中，置于一個2 ml 的玻璃試管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室溫下溫和攪拌30 min。?2. ?加
抗肽抗體的制備實驗2
實驗材料抗體試劑、試劑盒磷酸鈉緩沖液MBS二甲基酰胺EDTAPBS儀器、耗材分光光度計離心機實驗步驟1. ?將10 mg 的血藍蛋白溶于2 ml pH10的硼酸緩沖液中，置于15 ml 的玻璃試管中，溫和振搖。2. ?加10 μmol 的合成肽。3. ?緩慢加入1 ml 的0.3%戊二醛溶液，于室溫
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加
單克隆抗體的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩
單克隆抗體的制備
實驗方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加以擴增、冷凍和
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物選擇免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備原理
單克隆抗體技術原理如下：由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞