單克隆抗體培養上清與腹水的制備

材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)

雜 交 瘤（單 元 1.3)

V DMEM-IO 完全培養基

175 cm₂ 組織培養用細頸瓶

50m l 塑料錐底離心管，無菌

Beckman 離心機和 TH-4 轉 子（或同等設備）

1.將雜交瘤細胞移入含有 DMEM-IO 完全培養基的 175 cm² 培養瓶中。培養至生長旺盛和準備細胞分瓶時取用（細胞密度應達到 IXlO⁶?2 X 10⁶ 個細胞/ml)。避免細胞生
長密度過高導致死亡。

2.以 1 :1 0 的比例分出部分細胞至另一個 175 cm² 培養瓶中。加 入 DMEM-IO 完全培養基 至 總 體 積 100 ml，培養至細胞過度生長，培 養 基 呈 黃 色（酸性），出現死亡細胞(大約 5d)。或者，將 高 密 度 細 胞（IXlO⁶?2 X 10⁶ 個細胞/ ml) 隨新鮮培養基轉入培養瓶，培 養 2?3d 直到出現死亡細胞。

3.將 培 養 瓶 內 容 物 轉 入 50m l 錐底離 心 管 。室 溫 下 ， 1500 g 離 心 lOmin。取 上 清 ，棄沉淀。

4.用適當的方法檢測上清液中 M Ab 的滴度。

5.無菌環境儲存培養上清；通 常 4°C 中可以儲存數周到數月，一 20°C 中可以儲存至數年 ，在一 70°C 可以永久儲存。可將培養上清等分為多個單位儲存，盡量減少解凍和重新冰凍的次數。