制備電泳實驗
實驗方法原理 嚴格來說洗脫不能達到制備的目的,它只能得到微克到毫克級的樣品。通常是用其他方法分離的粗樣品通過某種電泳方法進一步分離純化后,再用擴散洗脫或電泳洗脫收集純樣品,繼而用作其他分析的需要。實驗材料 凝膠切片儀器、耗材 解剖刀勻漿器實驗步驟 1. 擴散洗脫擴散洗脫是用解剖刀或勻漿器將凝膠切片搗碎,以增加凝膠的表面積,然后用大約 3 倍體積的合適的緩沖液浸泡。如果蛋白對溫度不敏感,則可在 37℃ 或更高溫度下保溫,以改善洗脫的效果。對大體積的緩沖液雖然能得到良好的產率,但洗脫后樣品稀釋倍數太大,難以回收。洗脫后的凝膠碎片可簡單地用離心方法除去。2. 電泳洗脫電泳洗脫通常是用一定的裝置從某種電泳分離后的凝膠中電泳洗脫蛋白質,并分別移入小室中再收集。不管是擴散洗脫還是電泳洗脫,電極緩沖液和洗脫緩沖液的 pH,離子強度,凝膠的濃度和厚度,電壓梯度,收集物質的量,洗脫緩沖液的體積和操作溫度都影響洗脫效果。......閱讀全文
制備電泳實驗
實驗方法原理 嚴格來說洗脫不能達到制備的目的,它只能得到微克到毫克級的樣品。通常是用其他方法分離的粗樣品通過某種電泳方法進一步分離純化后,再用擴散洗脫或電泳洗脫收集純樣品,繼而用作其他分析的需要。實驗材料 凝膠切片儀器、耗材 解剖刀勻漿器實驗步驟 1. 擴散洗脫擴散洗脫是用解剖刀或勻漿器將凝膠切片搗
制備電泳實驗
洗脫 連續電泳 等電聚焦制備電泳 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 嚴格來說洗脫不能達到制備的目的,它只能得到微克到毫克級的樣品。通常是用其他方法分離的粗樣品
制備電泳實驗——連續電泳
儀器、耗材聚丙烯酰胺凝膠電泳瓊脂糖電泳實驗步驟1. 連續洗脫電泳使用連續洗脫的聚丙烯酰胺凝膠電泳或瓊脂糖電泳能制備微克到毫克級的多肽,蛋白或核酸。裝置可以是各種各樣的。有的是把樣品直接加在固體凝膠的表面,分子經過電泳分離后,由流動的緩沖液洗脫,純化后的分子被濃縮,并由蠕動泵和部分收集器收集。2. 連
制備電泳實驗——等電聚焦制備電泳
實驗方法原理等電聚焦制備電泳是一種非變性制備技術。由于等電聚焦電泳技術的特點,因而是一種理想的制備方法。試劑、試劑盒電極液兩性電解質Ultrodex實驗步驟一、液體介質垂直柱狀蔗糖密度梯度等電聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制備和分析目的的等電聚焦方法。載體兩性電解質在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
制備電泳實驗——洗脫
蛋白質的分離純化是研究其結構、特性和功能的基礎,諸如一級結構、溶液構象、晶體結構、免疫功能和生物機理等研究都必須用一定量并具有活性的純樣品作為研究材料。本實驗來源「蛋白質電泳實驗技術」主編:郭堯君。實驗方法原理嚴格來說洗脫不能達到制備的目的,它只能得到微克到毫克級的樣品。通常是用其他方法分離的粗樣品
微量制備毛細管電泳實驗
實驗方法原理 實驗材料 多肽:ACTH 4-10試劑、試劑盒 血管緊縮素I和血管緊縮素II 0.05 mmol/L 和 0.25 mmol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.30 存儲于 4℃)0.1 mol/L 氫氧化鈉儀器、耗材 75 μm 內徑的融合硅毛細管柱CE 儀器錐形微量瓶實驗步驟 1. 低壓
微量制備毛細管電泳實驗
多次分離 單次分離 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 多肽:ACTH 4-10
微量制備毛細管電泳實驗——多次分離
實驗材料多肽:ACTH 4-10試劑、試劑盒血管緊縮素I和血管緊縮素II0.05 mmol/L 和 0.25 mmol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.30 存儲于 4℃)0.1 mol/L 氫氧化鈉儀器、耗材75 μm 內徑的融合硅毛細管柱CE 儀器錐形微量瓶實驗步驟1. 低壓下(0.5 lb/in2
用制備凝膠電泳純化寡核苷酸實驗
試劑、試劑盒 丙烯酰胺雙丙烯酰胺尿素過硫酸銨 NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互補寡核苷酸仲丁醇(2-丁醇)二乙醚 NaOAcMgCl2 乙醇TBE 甲酰胺加樣緩沖液 TE儀器、耗材 SpeedVac 旋轉濃縮儀實驗步驟 材料與設備丙烯酰胺雙丙烯酰胺尿素過硫酸銨(10%;w/v)N,
微量制備毛細管電泳實驗——單次分離
實驗材料多肽:ACTH 4-10試劑、試劑盒4:1(V/V)0.5 mol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.50)/乙烯乙二醇0.1 mol/L 氫氧化鈉儀器、耗材150 μm 內徑的融合硅毛細管柱CE 儀器錐形微量瓶實驗步驟1. 制備多肽混合物和預處理柱子(見多次分離步驟 1 和 2)。2. 在 0.
用制備凝膠電泳純化寡核苷酸實驗
試劑、試劑盒丙烯酰胺雙丙烯酰胺尿素過硫酸銨NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互補寡核苷酸仲丁醇(2-丁醇)二乙醚NaOAcMgCl2乙醇TBE甲酰胺加樣緩沖液TE儀器、耗材SpeedVac 旋轉濃縮儀實驗步驟材料與設備丙烯酰胺雙丙烯酰胺尿素過硫酸銨(10%;w/v)N,N,N'
用制備凝膠電泳純化寡核苷酸實驗
用制備凝膠電泳純化寡核苷酸實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 丙烯酰胺 雙丙烯酰胺 尿素
溶膠的制備及電泳
可以減少溶液間的擴散現象,使界面保持清晰。電導大的輔助液,離子濃度大,離子進入溶膠,容易引起溶膠凝聚,還降低溶膠內部的電場強度,降低電泳速度。
免疫電泳實驗_電泳
試劑、試劑盒Tris-巴比妥緩沖液貯液電極緩沖液瓊脂糖溶液實驗步驟電泳時溫度可控制在 10~15℃,同前述電泳的方法一樣,先在冷卻板上鋪一層煤油,再鋪膠。電極芯與凝膠的邊緣接觸 5~10 mm,并保持平行,電泳時的電場強度約為 20 V/cm。
DNA測序電泳的樣品制備
當在預電泳時,即可進行樣品的制備,將反應完畢的樣品在沸水浴中加熱1~3分鐘,立即置于冰上即可。如果樣品長時間不用,則應重新處理。可使用4~6%聚丙烯酰胺凝膠,膠厚0.4 mm。厚度小于0.4 mm的膠可能導致信號太弱。加樣時不必吸去上層覆蓋的礦物油,但要小心地吸取礦物油下的藍色樣品。
火箭電泳實驗
實驗方法原理在電場作用下,抗原在含定量抗體的瓊脂介質中泳動,二者比例在合適時在較短時間內形成狀似火箭或錐形的沉淀線,而此沉淀線的高度常與抗原量成正比關系,因此本法可以測定樣品中抗原的含量。實驗材料待檢血清試劑、試劑盒巴比妥緩沖液瓊脂粉儀器、耗材微量進樣器打孔器玻璃板電泳儀實驗步驟1. ?抗體瓊脂板的
火箭電泳實驗
實驗方法原理 在電場作用下,抗原在含定量抗體的瓊脂介質中泳動,二者比例在合適時在較短時間內形成狀似火箭或錐形的沉淀線,而此沉淀線的高度常與抗原量成正比關系,因此本法可以測定樣品中抗原的含量。實驗材料 待檢血清試劑、試劑盒 巴比妥緩沖液瓊脂粉儀器、耗材 微量進樣器打孔器玻璃板電泳儀實驗步驟 1. ?抗
火箭電泳實驗
火箭電泳實際是一種定量免疫電泳。其原理為:在電場作用下,抗原在含定量抗體的瓊脂介質中泳動,二者比例在合適時在較短時間內形成狀似火箭或錐形的沉淀線,而此沉淀線的高度常與抗原量成正比關系,因此本法可以測定樣品中抗原的含量。一、材料1. 診斷血清(抗體):抗人IgG或IgA免疫血清。2. 待檢血清(抗原)
核酸電泳實驗
瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的標準方法。該技術操作簡便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度離心法)所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶EB(德元國際Cat# LY5009)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外
關于核酸電泳—瓊脂糖凝膠電泳凝膠的制備和電泳介紹
(1) 瓊脂糖凝膠電泳凝膠的制備和電泳—用透明膠將玻璃板或電泳裝置所配備的塑料盤的邊緣圈封,制成膠模,置水平工作臺上; (2) 瓊脂糖凝膠電泳凝膠的制備和電泳—稱取適量瓊脂糖,置電泳緩沖液中,加熱使瓊脂糖溶解; (3) 瓊脂糖凝膠電泳凝膠的制備和電泳—待溶液冷至60℃,加入10mg/ml E
免疫電泳實驗_免疫電泳
實驗材料待檢抗原試劑、試劑盒抗體瓊脂巴比妥緩沖液儀器、耗材電泳儀載物玻片打孔器玻璃鑄型微量進樣器實驗步驟1. ?取載物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%瓊脂凝膠,制成2毫米厚的瓊脂板。2. ?按圖位置,在瓊脂板未凝固時,放入抗血清槽鑄型,注意勿使鑄型全部浸入瓊脂中,待凝固時再打孔。3.
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗——制備多塊梯度膠
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TEMED丙烯酰胺儀器、耗材離心管電泳儀實驗步驟1. ?如灌制均一濃度凝膠一樣在多板凝膠灌制裝置中組裝好微型膠夾層。?2. ?如圖一、安裝好30 ml 梯度發生器、磁力攪拌器、蠕動泵(可選用)和聚乙烯Tygon管,梯度發生器的輸出端連接于制膠室下方的輸入口。圖一3. ?配制
制備克隆實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP -巰基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 連接緩沖液 T4DNA 連接酶 平末
制備克隆實驗
試劑、試劑盒ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱水浴箱實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇(可選擇)IPTG(100 mmol/L
血清制備實驗
實驗材料 血儀器、耗材 低溫離心機4℃冰箱試管–80℃低溫儲藏箱實驗步驟 1. 取血后,37℃下,讓血液凝固1 到2 小時(不加抗凝劑);2. 4℃冰箱過夜(讓血塊固縮);3. 當血清自然析出后, 4℃,3000 轉/分,離心10 分鐘,分離血清,棄去不溶物;4. 將血清移至一干凈試管,并分裝成小份
制備克隆實驗
試劑、試劑盒?ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材?FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱 水浴箱實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇(可選擇)IPTG(100 mm
血清制備實驗
抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。高效價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。實驗材料血儀器、耗材低溫離心機4℃冰箱試管–80℃低溫儲藏箱實驗步驟1. 取血后,37℃下,讓血液凝固1 到2 小時(不加抗凝劑);2. 4℃冰箱過夜(讓
血清制備實驗
血清制備實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 血 儀器、耗材
sdspage凝膠電泳怎么制備
SDS-PAGE電泳可用于分離蛋白質和核苷酸,這里綜述了SDS-PAGE實驗原理、試劑和器材、以及實驗操作步驟。一.實驗原理:SDS-PAGE是對蛋白質進行量化,比較及特性鑒定的一種經濟、快速、而且可重復的方法。該法是依據混合蛋白的分子量不同來進行分離的。SDS是一種去垢劑,可與蛋白質的疏水部分相結
免疫電泳實驗
試劑、試劑盒 Tris-巴比妥緩沖液貯液電極緩沖液瓊脂糖溶液實驗步驟 1. Tris-巴比妥緩沖液貯液2.24 g 二乙基巴比妥酸,4.43 g Tris,0.053 g 乳酸鈣,0.065 g 疊氮鈉,用雙蒸水溶解后,在容量瓶中定容至 100 ml。2. 電極緩沖液用雙蒸水稀釋 4 倍。3. 1%