微量制備毛細管電泳實驗

多肽：ACTH 4-10

血管緊縮素I和血管緊縮素II 0.05 mmol／L 和 0.25 mmol／L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.30 存儲于 4℃) 0.1 mol／L 氫氧化鈉

75 μm 內徑的融合硅毛細管柱 CE 儀器 錐形微量瓶

1. 低壓下（0.5 lb/in²）用以下溶液沖洗預處理毛細管：

10 倍柱體積的 0.1 mol/L NaOH

10 倍柱體積的水

4 倍柱體積的 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 2.30。

柱存儲于 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 2.30。

2. 將各 0.2 mg 的 ACTH4-10、血管緊縮素 I 和血管緊縮素 II 溶于 1 ml 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 2.30（終濃度 = 0.6 mg 多肽/ml）制備多肽混合物。凍存 100 μl 每管混合物于 -20℃。

3. 在 0.5 lb/in²，10 s 內用低壓注射上樣 10～20 nl 多肽混合物。

4. 使用以下條件分離多肽混合物：

電解質：0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 2.30

探測波長：200 nm

溫度：25℃

電壓：25 kV

分部大小：每收集管 3 min

5. 用一系列的含 10 μl 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 2.30 的微量錐形瓶替換標準的出口池（正極）。收集 3 min 的組分于每一個瓶子以利于了解分離的長度。

6. 重復注射和分離（步驟 3～5）4 次，合并來自相應的組分號碼的內容物。

7. 用以前闡述的分析分離法監視多肽內容的組分（見解析多肽分離實驗）。

多次收集方法要有效，多肽的洗脫時間必須具有重復性。以下的方法使用P/ACE5000毛細管電泳儀器進行多肽混合物的分離。