cRNA探針在原位雜交組織化學
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針的信號強。除此之外，在溶液中產生的cRNA-mRNA雜交體比相應的cDNA-mRNA雜交體穩定，但在原位雜交中是否如此尚未證明。cRNA探針不足之處在于有時比DNA探針粘性強（stickier）。可與組織產生較高的非特異性結合，但此缺陷可在雜交后漂洗液中加用酶漂洗來解決。最近，Wolf等（1987）建議插入確定長度的寡核苷酸至載體內產生cRNA分子，這種cRBA分子稱為“寡核苷酸核酸探針”（oligoribo－probes）已被成功的用于原位雜交實驗。圖20-2 示cDNA轉錄為cRNA，可標記以不同的標記物，然后與細胞中的mRNA......閱讀全文
cRNA探針在原位雜交組織化學
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針
DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學
一、DNA探針的應用 雖然一般認為DNA探針敏感度不如cRNA探針，但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。 在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探針基本相同，所不同的是：（1）雜交時需先在高溫80～95℃短時處理，使DNA探針及細胞內靶DNA變性，解離成單鏈，迅置于冰上冷卻。然
地高辛標記cRNA探針實驗方法
1．組織前處理在組織制片中以冷凍切片（厚10～30μm）最佳。切片貼在預先清潔，高溫處理并涂以粘附劑載玻片上，先在37℃預干燥4h，然后置于37℃烤箱中過夜。經過上述處理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存數月之久，有報告可保存數年之久的。但仍以新鮮制片為好。如為石蠟包埋切片，應脫
原位雜交組織化學實驗技術1
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質
在原位雜交中－為什么rna可以和dna雜交
因為堿基互補配對啊。RNA不光和DNA雜交，還可以和RNA雜交。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內RNA表達的一種原位雜交技術。其基本原理是：在細胞或組織結構保持不變的條件下，用標記的已知的RNA核苷酸片段，按核酸雜交
原位雜交技術的原理和特點
原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞
原位雜交的基本定義
原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。 使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。 RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等
原位雜交的基本定義
原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞
原位雜交的基本定義
原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。 原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探
DNA探針原位雜交
1、4—6微米切片,用防脫片膠（多聚賴氨酸）處理過的玻片貼附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鮮二甲苯脫蠟,10minX2（趁熱脫蠟） 4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空氣干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸餾水稀釋,濃度為25μg/ml）,37℃消化1
原位雜交組織化學概述
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
常見RNA探針的技術特點
cRNA探針：是以cDNA為模板，通過體外轉錄而獲得的。因為它是一種單鏈探針，因此也避免了應用雙鏈cDNA探針做雜交反應時存在的兩條之間的復性問題。cRNA與RNA之間形成的雜交體要比cDNA-RNA雜交體穩定。cRNA-RNA之間形成的雜交體不受RNA酶的影響。因此雜交反應后可用RNA酶處理，以除
常見RNA探針及其特點
常見RNA探針及其特點：RNA探針是指帶有標記的能與組織內相對應的核苷酸序列互補結合的一段單鏈cDNA或cRNA分子。根據在RNA雜交中所使用的探針依其來源可分為三種：即特異性cDNA、cRNA探針和人工合成寡核苷酸探針。?cRNA探針：是以cDNA為模板，通過體外轉錄而獲得的。因為它是一種單鏈探針
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交組織化學實驗技術3
（四）雜交后處理（post hybridisation treatment） 雜交后處理包括系列不同濃度，不同溫度的鹽溶液的漂洗。在原位雜交組織化學的實驗程序中，這也是一個重要的環節 。特別因為大多數的原位雜交實驗是在低嚴格度條件下進行的，非特異性的探針片段粘附在組織切片上，從而增強了背景染色。R
原位雜交組織化學實驗技術4
二、生物素標記cRNA探針在原位雜交組織化學中的應用 （一）光敏生物素標記cRNA探針的應用 以線性質粒DNA為模板合成未加標記物的cRNA探針，使其最終濃度為0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再與等體積的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦鹵素燈下，距離光源20c
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交組織化學實驗技術5
（8）熒光顯示： ①生物素標記DNA探針的熒光顯示。 1）應用PBS含5%無脂干奶（5μl每張蓋片），也可用1%牛血清白蛋白（BSA）-PBS覆蓋孵育5min室溫，以封閉非特異性結合部位。 2）移除多余液體，加抗生素-FITC（5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA，5μl/cm2）。在濕
原位雜交組織化學實驗技術2
DNA合成儀的誕生使制造寡核苷酸探針成為可能，與上述探針不同的是寡核苷酸探針不是克隆性DNA探針，它是由DNA合成儀依照所需雜交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便，價格低廉的優點，也可進行放射性與非放射性標記，但其特異性不如克隆性探針強，亦不如其雜交信號高。 原位雜交組織化學技術在近20年的發展
原位雜交組織化學雜交體檢測
? ?雜交體檢測又稱雜交體顯示，是指通過一定方法使雜交反應形成的雜交體（雜交信號）成為在顯微鏡下可識別的產物。對原位雜交反應信號進行顯示的方法因探針標記物不同而異。?? ?（一）放射性核素標記探針的檢測??? *個原位雜交實驗（1969年）以’H作為核酸探針的標記物，雜交信號用放射自顯影術檢測。隨著
原位雜交組織化學實驗技術6
二、快速原位雜交細胞化學技術 原位雜交免疫細胞化學技術存在的難點之一是實驗手續繁瑣，實驗周期長。國外Liesi等（1986）和國內學者何彬等應用光敏生物素-鏈親合素（Biotin-streptavidin）膠體金系統進行原位雜交，得到了快速滿意的結果，全部實驗可在數小時內完成。 作用把含某種多肽
原位雜交組織化學雜交前處理
雜交前處理的目的在于提高組織通透性。增加靶核酸的可及性以及防止RNA或DNA探針與組織細胞或載玻片之間的非特異性結合，從而增強雜交信號，降低背景。雜交前處理的具體方法和步驟因所采用的固定劑、組織標本以及探針不同而異。用溫和的非交聯固定劑固定的細胞培養標本和冰凍切片，不需經特殊的雜交前處理，一般均能獲
核酸探針標記及原位雜交
一、核酸探針標記核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否
核酸探針標記及原位雜交
一、核酸探針標記 核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。 核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大
原位雜交組織化學實驗要求及步驟
一、基本要求1. 組織取材：組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養細胞最好在30 min 內固定。2. 固定目的是：（1）保持細胞結構；（2）最大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；（3）使探針易于進入細胞或組織。最常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑（如戊二醛）不同
原位雜交組織化學常用試劑及處理
一、雜交前準備 （一）DEPC水是經DEPC處理過的滅菌蒸餾水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可滅活各種蛋白質，是RNA酶的強抑制劑。原位雜交在雜交及其以前的各步處理中，所有液體試劑都應經DEPC處理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待處理水（蒸餾
熒光原位雜交探針和熒光探針有什么區別
熒光原位雜交探針和熒光探針有什么區別 熒光原位雜交技術問世于70年代后期，其曾多用于染色體異常的研究，近年來隨著FISH所應用的探針鐘類的不斷增多，特別是全Cosmid探針及染色體原位抑制雜交技術的出現，使FISH技術不僅在細胞遺傳學方面，而且還廣泛應用于腫瘤學研究，如基因診斷基因定位等 。原
核酸探針標記及原位雜交2
（二）隨機引物合成法 隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合，在Klenow酶的作用下，合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常，產物平均長度為400～600個，可以獲得大量的有效探針。反應時對模板的要求不嚴格，用微量制備的質
DNA探針原位雜交的相關介紹
1、4—6微米切片，用防脫片膠（多聚賴氨酸）處理過的玻片貼附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鮮二甲苯脫蠟，10minX2（趁熱脫蠟） 4、100%乙醇5minX2次，不用浸水，直接空氣干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸餾水稀釋，濃度為25μg/ml），37℃消化1
核酸探針標記及原位雜交1
一、核酸探針標記核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否