DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學
一、DNA探針的應用 雖然一般認為DNA探針敏感度不如cRNA探針，但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。 在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探針基本相同，所不同的是：（1）雜交時需先在高溫80～95℃短時處理，使DNA探針及細胞內靶DNA變性，解離成單鏈，迅置于冰上冷卻。然后置于37℃～42℃雜交過夜。（2）RNA酶的溶液的沖洗不能減低背景，因此，在操作步驟中省略此步。 （一）地高辛-堿性磷酸酶（Dig -AKP）標記DNA探針在石蠟包埋切片檢測病毒DNA中的應用 1．組織前處理 （1）固定：組織以10%中性福爾馬林液或Bouins液固定，常規石蠟包埋，切片厚4～6μm，粘附于涂有粘附劑的玻片上，入烤箱60～80℃6～8h，使切片更緊貼玻片。 （2）脫蠟：二甲苯10min ×2，自100%乙醇，90%，70%，50%，30%各5min。入PBS（含5mmol/l MgCl2,pH7.3～7.4）......閱讀全文
DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學
一、DNA探針的應用 雖然一般認為DNA探針敏感度不如cRNA探針，但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。 在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探針基本相同，所不同的是：（1）雜交時需先在高溫80～95℃短時處理，使DNA探針及細胞內靶DNA變性，解離成單鏈，迅置于冰上冷卻。然
cRNA探針在原位雜交組織化學
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針
DNA探針原位雜交
1、4—6微米切片,用防脫片膠（多聚賴氨酸）處理過的玻片貼附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鮮二甲苯脫蠟,10minX2（趁熱脫蠟） 4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空氣干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸餾水稀釋,濃度為25μg/ml）,37℃消化1
DNA探針原位雜交的相關介紹
1、4—6微米切片，用防脫片膠（多聚賴氨酸）處理過的玻片貼附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鮮二甲苯脫蠟，10minX2（趁熱脫蠟） 4、100%乙醇5minX2次，不用浸水，直接空氣干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸餾水稀釋，濃度為25μg/ml），37℃消化1
原位雜交技術的原理和特點
原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞
原位雜交的基本定義
原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。 使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。 RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等
原位雜交的基本定義
原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞
核酸探針標記及原位雜交
一、核酸探針標記核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否
核酸探針標記及原位雜交
一、核酸探針標記 核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。 核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大
原位雜交的基本定義
原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。 原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探
原位雜交組織化學實驗技術1
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質
在原位雜交中－為什么rna可以和dna雜交
因為堿基互補配對啊。RNA不光和DNA雜交，還可以和RNA雜交。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內RNA表達的一種原位雜交技術。其基本原理是：在細胞或組織結構保持不變的條件下，用標記的已知的RNA核苷酸片段，按核酸雜交
核酸探針標記及原位雜交2
（二）隨機引物合成法 隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合，在Klenow酶的作用下，合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常，產物平均長度為400～600個，可以獲得大量的有效探針。反應時對模板的要求不嚴格，用微量制備的質
核酸探針標記及原位雜交1
一、核酸探針標記核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否
核酸探針標記及原位雜交4
(三)試劑配制配制溶液過程中均需戴手套，液體配制均用超凈水，所用瓶子均經160℃烘烤4h，主要目的是去除RNA酶。1.DEPC水 將DEPC按1‰濃度加入超凈水中，充分混合后靜置過夜，15~20min高壓消毒，之后室溫避塵存放。2.0.1mol PBS pH 7.4A液：0.1mol NaH2PO4
核酸探針標記及原位雜交3
3.注意事項（1）避光下準備反應體系：由于光敏生物素醋酸鹽對光敏感，應避免光照。在分裝試劑及核酸與光敏生物素混合時應在暗室安全燈下操作。（2）核酸純度：由于光敏生物素能與任何有機物反應，因此用做標記探針的核酸要高度純化。用作標記探針的核酸最好不用Tris溶液溶解，Tris中所含氨基會干擾標記。（3）
原位雜交組織化學實驗要求及步驟
一、基本要求1. 組織取材：組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養細胞最好在30 min 內固定。2. 固定目的是：（1）保持細胞結構；（2）最大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；（3）使探針易于進入細胞或組織。最常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑（如戊二醛）不同
原位雜交組織化學常用試劑及處理
一、雜交前準備 （一）DEPC水是經DEPC處理過的滅菌蒸餾水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可滅活各種蛋白質，是RNA酶的強抑制劑。原位雜交在雜交及其以前的各步處理中，所有液體試劑都應經DEPC處理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待處理水（蒸餾
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗
試劑、試劑盒 寡核苷酸雜交液寡核苷酸預雜交液SSC 或 SSPETEAC1 洗滌液TMAC1或 TEAClTMAC1 洗滌液核酸和寡核苷酸放射性標記的寡核苷酸探針儀器、耗材 雜交裝置振蕩培養器實驗步驟 材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。寡核苷酸雜交液6XSSC(或 6XSSPE)0.05mol/
寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗
Jabobs等 （ 1988）介紹了在含季銨鹽緩沖液中雜交的方法與原理。下述為該法的簡單變通方案。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。試劑、試劑盒寡核苷酸雜交液寡核苷酸預雜交液SSC 或 SSPETEAC1 洗滌液TMAC1或 TEAClTMAC1 洗滌液核酸和寡核苷酸放射性標
寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 寡核苷酸雜交液 寡核苷酸預雜交液 SSC 或 SSPE TEAC1 洗滌液 TMAC1或 TEACl TMAC1 洗滌液
原位雜交組織化學實驗技術6
二、快速原位雜交細胞化學技術 原位雜交免疫細胞化學技術存在的難點之一是實驗手續繁瑣，實驗周期長。國外Liesi等（1986）和國內學者何彬等應用光敏生物素-鏈親合素（Biotin-streptavidin）膠體金系統進行原位雜交，得到了快速滿意的結果，全部實驗可在數小時內完成。 作用把含某種多肽
原位雜交組織化學概述
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交組織化學常用試劑及處理2
九、原位雜交信號顯示 目前應用原位雜交方法中，信號的顯示主要有放射自顯影，酶底物及免疫金銀等方法，在此歸納有關的主要試劑。 1．A-B顯影液 稱取上述試劑，按配方分別溶于50ml ddH2O中，于顯影前，在室溫將兩者（A液及B液）按1：1混合，稍加搖動促進混合，即可將貼有切片標本的切片放入顯影
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
寡核苷酸探針的簡介
基因探針，即核酸探針，是一段帶有檢測標記，且順序已知的，與目的基因互補的核酸序列(DNA或RNA)。基因探針通過分子雜交與目的基因結合，產生雜交信號，能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據雜交原理，作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件：①應是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理。②應帶有容
寡核苷酸探針技術介紹
利用寡核苷酸探針可檢測到靶基因上單個核苷酸的點突變。常用的寡核苷酸探針主要有兩種:單一已知序列的寡核苷酸探針和許多簡并性寡核苷酸探針組成的寡核苷酸探針庫。單一已知序列寡核苷酸探針能與它們的目的序列準確配對,可以準確地設計雜交條件,以保證探針只與目的序列雜交而不與序列相近的非完全配對序列雜交,對于一些
原位雜交實驗原理與方法
一、目的本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。二、原理原位雜交組化（簡稱原位雜交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）屬于分子雜交的一種，是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交，再應用標記物相關的檢測系統，在核
原位雜交實驗原理與方法
一、目的 本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。 二、原理 原位雜交組化（簡稱原位雜交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）屬于分子雜交的一種，是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交，再應用標記物相關