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  • 寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗

    Jabobs等 ( 1988)介紹了在含季銨鹽緩沖液中雜交的方法與原理。下述為該法的簡單變通方案。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)上冊,作者:黃培堂。試劑、試劑盒寡核苷酸雜交液寡核苷酸預雜交液SSC 或 SSPETEAC1 洗滌液TMAC1或 TEAClTMAC1 洗滌液核酸和寡核苷酸放射性標記的寡核苷酸探針儀器、耗材雜交裝置振蕩培養器實驗步驟材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。寡核苷酸雜交液6XSSC(或 6XSSPE)0.05mol/L 磷酸鈉(pH6.8)1 mmol/LEDTA(pH8.0)5XDenhardt’s 液100ug/ml 變性、斷裂的鮭精 DNA(Pharmacia 公司或按第 6 章的方案 10 所述制備)100 mg/ml 硫酸右族糖酐(見箄 16 章信息欄 DEAE-右旋糖酐)寡核苷酸預雜交液6XSSC(或 6XSSPE)0.05mol/L 磷酸鈉(pH6.8)1 mmol/L EDTA(pH......閱讀全文

    寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗

    Jabobs等 ( 1988)介紹了在含季銨鹽緩沖液中雜交的方法與原理。下述為該法的簡單變通方案。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)上冊,作者:黃培堂。試劑、試劑盒寡核苷酸雜交液寡核苷酸預雜交液SSC 或 SSPETEAC1 洗滌液TMAC1或 TEAClTMAC1 洗滌液核酸和寡核苷酸放射性標

    寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗

    ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 寡核苷酸雜交液 寡核苷酸預雜交液 SSC 或 SSPE TEAC1 洗滌液 TMAC1或 TEACl TMAC1 洗滌液

    寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗

    試劑、試劑盒 寡核苷酸雜交液寡核苷酸預雜交液SSC 或 SSPETEAC1 洗滌液TMAC1或 TEAClTMAC1 洗滌液核酸和寡核苷酸放射性標記的寡核苷酸探針儀器、耗材 雜交裝置振蕩培養器實驗步驟 材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。寡核苷酸雜交液6XSSC(或 6XSSPE)0.05mol/

    DNA片段探針的應用實驗——水溶液中雜交

    實驗材料DNA試劑、試劑盒雜交液洗膜液儀器、耗材培養箱實驗步驟1. ?除了于65℃在雜交液Ⅰ中溫育的條件外,預雜交按甲酰胺法進行。?2. ?按甲酰胺法制備探針并用2 ml 雜交液Ⅰ稀釋。3. ?濾膜在65℃雜交過夜,然后移去雜交液,用低嚴緊性洗膜液Ⅰ洗膜2次。4. ?用高嚴緊性洗膜液Ⅰ在65℃迅速洗

    DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學

    一、DNA探針的應用  雖然一般認為DNA探針敏感度不如cRNA探針,但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。  在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探針基本相同,所不同的是:(1)雜交時需先在高溫80~95℃短時處理,使DNA探針及細胞內靶DNA變性,解離成單鏈,迅置于冰上冷卻。然

    雜交探針的檢測實驗

    實驗步驟 1. ?暗室中,以42~45℃水浴,溫育盛有4盎司(113.3 g)Kodak NTB-2放射自顯影膠乳瓶30 min。同時,在500 ml 三角瓶中預熱等體積的水至相同溫度。 2. ?膠乳熔化后,緩慢沿三角瓶壁(以一角度)倒入瓶中

    雜交探針的檢測實驗

    1. ?將載玻片以膠帶固定于硬紙板或廢膠片上。2. ?將Du Pont Cronex 成像膠片(MRF 34 Clear) 輕壓在玻片上4℃曝光。3. ?當用這種膠片時,應注意以膠片的膠乳面正對樣品。

    雜交探針的檢測實驗1

    放射自顯影膠片用于檢測與細胞學樣品進行雜交的32P或35S-標記探針,并可應用于在大的器官或組織進行的實驗,欲獲得單細胞水平結果,需要用乳膠放射自顯影。實驗步驟1. ?將載玻片以膠帶固定于硬紙板或廢膠片上。2. ?將Du Pont Cronex 成像膠片(MRF 34 Clear) 輕壓在玻片上4℃

    雜交探針的檢測實驗2

    實驗材料膠乳試劑、試劑盒顯影劑儀器、耗材浸泡盒水浴鍋玻片架實驗步驟1. ?在42℃~45℃水浴溶化小份稀釋的膠乳10 min,將膠乳倒入或吸入潔凈的玻片包裝盒中(浸泡盒)。?2. ?將玻片緩慢并輕柔地浸入浸泡盒中,緩慢取出并垂直放置在試管架上或將玻片置于干燥器中2 h,使其干燥。3. ?將充分干燥的

    雜交探針的檢測實驗3

    實驗步驟1. ?暗室中,以42~45℃水浴,溫育盛有4盎司(113.3 g)Kodak NTB-2放射自顯影膠乳瓶30 min。同時,在500 ml 三角瓶中預熱等體積的水至相同溫度。2. ?膠乳熔化后,緩慢沿三角瓶壁(以一角度)倒入瓶中并混勻(輕旋1~2次,防止氣泡產生)。?3. ?分裝膠乳于尼龍

    使用合成核苷酸作探針實驗——在綠化四甲胺中(TMAC)雜交

    實驗材料寡核苷酸試劑、試劑盒LBSDSEDTATMAC儀器、耗材水浴鍋離心機培養箱尼龍膜實驗步驟1. ?按“在氯化鈉/檸檬酸鈉中雜交”介紹的方法處理已影印細菌菌落的濾膜。2. ?按下列方法制備帶擴增噬斑的濾膜(1)從文庫中以漸減密度〔15 000~8 000噬斑 / 150 mm 平板)的方式將噬菌

    緩沖溶液在實驗中的作用

    緩沖液是一種能在加入少量酸或堿時抵抗pH改變的溶液.PH緩沖系統對維持生物的正常pH值,正常生理環境起重要作用.多數細胞僅能在很窄的pH范圍內進行活動,而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化.在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們時蛋白質、重碳酸鹽緩沖體系.每種緩沖體系所占的分量在各類

    寡核苷酸探針的簡介

      基因探針,即核酸探針,是一段帶有檢測標記,且順序已知的,與目的基因互補的核酸序列(DNA或RNA)。基因探針通過分子雜交與目的基因結合,產生雜交信號,能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據雜交原理,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件:①應是單鏈,若為雙鏈,必須先行變性處理。②應帶有容

    雜交探針的概念

    雜交探針是一小段單鏈DNA片段(十幾到幾百個堿基),用于檢測與其互補的核酸序列。

    使用合成核苷酸作探針實驗——在氯化鈉/檸檬酸鈉中雜交

    基因探針(probe)又稱“寡核苷酸探針”,簡稱“探針”,就是一段與目的基因或DNA互補的特異核苷酸序列,它可以包括整個基因,也可以僅僅是/基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之轉錄而來的RNA。實驗材料核苷酸試劑、試劑盒SSC焦磷酸鈉SDS儀器、耗材培養箱水浴鍋實驗步驟1. ?制備雙份的轉印

    寡核苷酸探針的制備方法

    寡核苷酸探針是人工合成的,與已知基因DNA互補的,長度可從十幾到幾十個核苷酸的片段。如僅知蛋白質的氨基酸順序量,也可以按氨基酸的密碼推導出核苷酸序列,并用化學方法合成。

    寡核苷酸探針的來源介紹

      DNA探針根據其來源有3種:一種來自基因組中有關的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe);另一種是從相應的基因轉錄獲得了mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe)。與基因組探針不同的是,cDNA探針不含有內含子序列。此外,還可在體外人工合成堿基數不

    寡核苷酸探針的用途介紹

    寡核苷酸探針還有一個重要用途。在用于檢測單個堿基差異時尚可采用一種稱為寡核苷酸限制(oligonucleotiderestriction)的技術。該技術只有在突變點位于某一限制性內切酶識別位點時才有效。例如,鐮刀狀紅細胞貧血是因β珠蛋白基因的第6個寡碼子由GAG變成GTG,從而導致所編碼氨基酸由酪氨

    寡核苷酸探針技術介紹

    利用寡核苷酸探針可檢測到靶基因上單個核苷酸的點突變。常用的寡核苷酸探針主要有兩種:單一已知序列的寡核苷酸探針和許多簡并性寡核苷酸探針組成的寡核苷酸探針庫。單一已知序列寡核苷酸探針能與它們的目的序列準確配對,可以準確地設計雜交條件,以保證探針只與目的序列雜交而不與序列相近的非完全配對序列雜交,對于一些

    雜交信號的放大實驗——地高辛標記探針的信號

    實驗材料雜交信號試劑、試劑盒地高辛SSCBSA熒光素儀器、耗材加濕盒水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?用地高辛標記的探針與切片雜交并洗片(見“熒光原位雜交實驗”基本方案步驟1~6)。?2. ?加50 μl 10 μg/ml?的羊抗地高辛抗體Fab片段于玻片上,蓋以22 mm2?大小的Parafilm 膜,

    合成的寡核苷酸探針的優點

    合成的寡核苷酸探針具有一些獨特的優點:一.由于鏈短,其序列復雜度低,分子量小,所以和等量靶位點完全雜交的時間比克隆探針短,如20nt的寡核苷酸探針在濃度為100ng/ml,靶序列為1~100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L時,達到最大程度的雜交只需10min,而用2kb的克

    合成的寡核苷酸探針的優點

    合成的寡核苷酸探針具有一些獨特的優點:一.由于鏈短,其序列復雜度低,分子量小,所以和等量靶位點完全雜交的時間比克隆探針短,如20nt的寡核苷酸探針在濃度為100ng/ml,靶序列為1~100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L時,達到最大程度的雜交只需10min,而用2kb的克

    合成的寡核苷酸探針的優點

    合成的寡核苷酸探針具有一些獨特的優點:一.由于鏈短,其序列復雜度低,分子量小,所以和等量靶位點完全雜交的時間比克隆探針短,如20nt的寡核苷酸探針在濃度為100ng/ml,靶序列為1~100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L時,達到最大程度的雜交只需10min,而用2kb的克

    cRNA探針在原位雜交組織化學

    Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交(見Cox et al 1984),核酸探針為單鏈的RNA分子,產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆(圖20-2)。由于它是單鏈的,不像雙鏈的DNA探針,在溶液中不會再退火(reanneal),因此,較大百分比的探針可參與雜交反應,較cDNA探針

    合成寡核苷酸探針的技術步驟

    首先使支持物羥基化,并用光敏保護基團將其保護起來。每次選取擇適當的蔽光膜(mask)使需要聚合的部位透光,其它部們不透光。這樣,光通過蔽光膜照射到支持物上,受光部位的羥基解保護。因為合成所用的單體分子一端按傳統固相合成方法活化,另一端受光敏保護基的保護,所以發生偶聯的部位反應后仍舊帶有光敏保護基團。

    關于寡核苷酸探針的標記介紹

      為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統  、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。

    用檢測和驅動-DNA-探針進行差異雜交實驗

    ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 洗滌緩沖液 SDS SSC Blocking 溶液 經過剪切的鮭魚精 DNA探針

    用檢測和驅動-DNA-探針進行差異雜交實驗

    下面 4 個探針用于差異篩選雜交。1. 檢測者特異性消減探針(正向消減探針)。2. 驅動者特異性消減探針(反向消減探針)。3. 從檢測者 mRNA(或檢測者基因組 DNA) 直接合成的 cDNA 探針。4. 從驅動者 mRNA(或驅動者基因組 DNA) 直接合成的 cDNA 探針。本實驗來源于 PC

    用檢測和驅動-DNA-探針進行差異雜交實驗

    試劑、試劑盒 洗滌緩沖液SDSSSCBlocking 溶液經過剪切的鮭魚精 DNA探針儀器、耗材 沸水浴雜交爐實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑高嚴格性洗滌緩沖液(0.2XSSC,5 g/LSDS),預熱到 68°C(可選,見第 9 步)低嚴格性洗滌緩沖液(2XSSC,5 g/LSDS),預

    核酸分子雜交探針的介紹

      若雜交的目的是識別靶DNA中的特異核苷酸序列,這需要牽涉到另一項核酸操作的基本技術─探針(probe)的制備。探針是指帶有某些標記物(如放射性同位素32P,熒光物質異硫氰酸熒光素等)的特異性核酸序列片段。若我們設法使一個核酸序列帶上32P,那么它與靶序列互補形成的雜交雙鏈,就會帶有放射性。以適當

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