幾種標記實驗的特點
RAPD利用 10 個堿基的一個或幾個隨機引物非定點地擴增 DNA 片段，一般一個引物可擴增 6-12 條 DNA 片段，利用凝膠電泳分開擴增的片段，從而進行基因多態性研究。 RAPD 是一種能快速進行基因多態性研究的技術，并且由于不涉及印跡雜交、放射性自顯影等技術，因此簡便易行。SSR 真核生物的基因組中散布著大量的串聯重復序列，其中， 2-4 個 bp 的微衛星序列 (Microsatellite 或叫簡單序列重復 SSR:Simple Sequence Repeats) 具有高度多態性。 微衛星在結構上的最大特點是兩端序列較保守， SSR 引物根據與微衛星重復序兩端的特定短序列設計，用來擴增重復序列本身，從而揭示微衛星的多態性。 SSR 是檢測多態性的一種有效方法。微衛星（ SSR ）是廣泛分布于真核生物基因組中的短串聯重復序列（ 1 － 7bp ）， SSR 實驗一般檢測到的是一個單一的多等位基因位點；是共顯性遺傳，可鑒......閱讀全文
32－P－標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞） 基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞） SDS煮沸法裂解細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
靶蛋白的放射標記實驗
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸標記哺乳動物細胞 酵母和細菌蛋白質的代謝放射標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
氨基酸代謝標記實驗
暫未評分點評實驗，有機會獲丁當獎勵?+收藏氨基酸代謝標記實驗標簽：氨基酸 代謝 標記精編分子生物學實驗指南第五版 第十章代謝標記技術用于研究蛋白質的生物合成、加工、細胞內運輸、分泌、降解和物理化學特性。內容來源于《精編分子生物學實驗指南（第五版）》? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
靶蛋白的放射標記實驗
實驗材料 細胞儀器、耗材 培養基實驗步驟 1. 制備活躍生長著的細胞。從單層培養細胞（約鋪滿 75% 表面積）中吸去培養基。用預熱至 37℃ 的無血清培養基沖洗兩次（培養基中應該不含蛋氨酸和半胱氨酸）。對于懸浮培養細胞，通過 400 g 離心 5 分鐘收集細胞。用頂熱至 37℃ 的無蛋氨
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
RNA抽提和標記實驗
實驗方法原理 實驗材料 從組織培養收獲的細胞在組織培養中的細胞凍存的整個組織試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖液（PBS）TRIzol 試劑乙醇乙酸鈉EDTA NaOHTris-ClTE 緩沖液固定化的 oligo-dT 引物儀器、耗材 組織勻漿器熱循環儀熒光掃描儀實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材
單個神經細胞標記實驗
實驗方法原理本例所用技術和結果引自Bishop和King(1982)，在該文獻中也可找到更詳細的技術指導（也可參考Kitai and Bishop 1981)。實驗材料貓的小腦 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
氨基酸代謝標記實驗
實驗方法原理 在含有放射性標記氨基酸的培養基中，短期培養細胞（800 Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質水解產物試劑、試劑盒 PBS(冷凍)37℃ 脈沖標記培養基儀器、耗材 配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器實驗步驟 1. 室溫融化 [35S] 標記甲硫氨酸，并用預熱的（37℃）脈沖標記培養基制
膠體金標記實驗步驟
1、蛋白質的處理：膠體金標記蛋白的制備膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質的等電點時，則會聚集而失去結合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強度、蛋白質的分子量等都影響膠體金與蛋白質的結合。（1）待標記蛋白溶液
靶蛋白的放射標記實驗
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸標記哺乳動物細胞酵母和細菌蛋白質的代謝放射標記實驗材料細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?儀器、耗材培養基 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
32－P－標記裂解培養細胞實驗
實驗方法原理 實驗材料 待標記的培養細胞試劑、試劑盒 37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材 樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性
靶細胞殺傷實驗：AnnexiV標記法
正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的釋放。將效應細胞與靶細胞充分共育后，用PE結合的效應細胞特異性單克隆抗體（如CD
實驗動物分組和標記編號方法
一、分組（一）?? 分組原則實驗動物分組應嚴格按照隨機分組的原則進行，使每只動物都有同等機會被分配到各個實驗組中去，盡量避免人為因素對實驗造成的影響。（二）?? 建立對照組實驗動物分組時應特別注意建立對照組。對照組可分自身對照組和平行對照組。1．自身對照組自身對照是把實驗動物本身在動物實驗前、后兩階
地高辛標記cRNA探針實驗方法
1．組織前處理在組織制片中以冷凍切片（厚10～30μm）最佳。切片貼在預先清潔，高溫處理并涂以粘附劑載玻片上，先在37℃預干燥4h，然后置于37℃烤箱中過夜。經過上述處理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存數月之久，有報告可保存數年之久的。但仍以新鮮制片為好。如為石蠟包埋切片，應脫
用[32P]磷酸標記細胞實驗_標記懸浮培養的HeLa細胞
實驗材料細胞試劑、試劑盒磷酸儀器、耗材無磷酸培養基實驗步驟1. 培養細胞至對數期，600 g 離心 5 分鐘。2. 棄上清，用無磷酸培養基懸浮細胞。3. 培養細胞 3~4 小時以耗盡它們的磷酸儲備。4. 再次離心，棄上清，用無磷酸培養基懸浮，加?32P 磷酸鹽至 20 μCi/ml 培養液，培養 1
氨基酸代謝標記實驗_備擇方案－3－長期細胞標記
實驗方法原理長期標記意味著對細胞進行 6～32 h 持續的代謝標記。該方法特別適用于研究合成速度相對較慢的蛋白質或研究成熟的標記蛋白而不是生物合成的前體。穩定狀態的標記是長期標記的一種形式，在此過程細胞和放射性標記的氨基酸一起孵育直至放射性標記蛋白的合成和降解速率相當。如果蛋白質復合體中的亞基的初級
引物設計和末端標記實驗
對 SSCP 解析能力和局限性的系統分析揭示靈敏度和片段長度有顯著的相關性。當DNA 長度為 150~200bp 時，突變的檢出率最高。本方案應用了高專一性的放射性同位素，并且包含一個純化步驟用于去除未利用的核苷酸，從而降低了整個反應的放射能量。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，
抗原標記蛋白復合體純化實驗
實驗方法原理 首先通過逆轉錄病毒介導的轉基因（用于組成型表達）或四環素調控的系統（用于可誘導表達）建立表達抗原決定簇標記的蛋白復合體亞基的穩定細胞系。然后用抗原決定簇特異的單克隆抗體偶聯的小珠進行免疫親和純化，以沉降抗原決定簇標記的多亞基蛋白復合體。最后在中性 pH 或生理條件下洗脫回收，即可用
引物設計和末端標記實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 激酶緩沖液 MgCl2 二硫蘇糖醇 牛血清白蛋白 ddH20 TE 緩沖液 EDTA 聚核苷
高地辛標記的DNA探針制備實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱實驗步驟 1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直
電鏡下雙/多重免疫標記實驗
電鏡下的雙重免疫標記染色不是靠顏色區分，而是靠標記物的不同電子密度或顆粒的不同大小來區別不同抗原，有別于光鏡下的雙重免疫標記方法。多采用雙重免疫金標記，其最大優點是高電子密度、分辨率高、抗原定位精確、顆粒大小可人工控制、標記試劑易制備。但也存在一些不足，如非特異吸附干擾大（背景）、對所用試劑質量要求
非標記抗體免疫電鏡實驗——經典法
不標記抗體法通過系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。用于（1）抗體觀察（2）免疫學研究。實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有
高地辛標記的DNA探針制備實驗
基本方法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
抗原標記蛋白復合體純化實驗
組成型表達FLAG標記 條件性表達FLAG標記 變化起始材料和洗脫條件 用P11離子交換層析柱 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 首先通過逆轉錄病毒
用[32P]磷酸標記細胞實驗
標記單層培養細胞 標記懸浮培養的HeLa細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 HeLa 細胞
用[32P]磷酸標記細胞實驗
實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 FCS磷酸鹽儀器、耗材 無磷酸培養基實驗步驟 1. 在含 10% FCS 的培養基中單層培養 HeLa 細胞至鋪滿 50% 左右。2. 倒掉完全培養基，加入新鮮的無磷酸培養基，培養 3~4 小時以耗盡胞內的磷酸儲備。3. 換新鮮的無磷酸培養基，并加 32P 磷酸
靶蛋白的放射標記實驗2
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸標記哺乳動物細胞實驗材料細胞儀器、耗材培養基實驗步驟1. 制備活躍生長著的細胞。從單層培養細胞（約鋪滿 75% 表面積）中吸去培養基。用預熱至 37℃ 的無血清培養基沖洗兩次（培養基中應該不含蛋氨酸和半胱氨酸）。對于懸浮培養細胞，通過 400 g 離心 5 分鐘
引物設計和末端標記實驗
試劑、試劑盒 激酶緩沖液MgCl2二硫蘇糖醇牛血清白蛋白ddH20TE 緩沖液EDTA聚核苷酸激酶引物放射性化合物儀器、耗材 放射性化合物離心機和轉子丙烯酸防護板離心管架廢棄物容器蓋革計數器QuickSpin 柱實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑5X 激酶緩沖液0.25mol/LTris-H
用[32P]磷酸標記細胞實驗
標記單層培養細胞標記懸浮培養的HeLa細胞實驗材料HeLa 細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒FCS ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?