• <table id="caaaa"><source id="caaaa"></source></table>
  • <td id="caaaa"><rt id="caaaa"></rt></td>
  • <table id="caaaa"></table><noscript id="caaaa"><kbd id="caaaa"></kbd></noscript>
    <td id="caaaa"><option id="caaaa"></option></td>
  • <noscript id="caaaa"></noscript>
  • <td id="caaaa"><option id="caaaa"></option></td>
    <td id="caaaa"></td>

  • 高地辛標記的DNA探針制備實驗

    實驗材料 DNA試劑、試劑盒 dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱實驗步驟 1. 建立一個標準100 μl 反應體系,用10 μl,10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液,DNA酶Ⅰ酶量不變,15℃溫育2 h。2. 取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. 繼續反應直到獲得大小合適的DNA探針。 4. 加入2 μl 0.5mol/l EDTA和1 μl 10%SDS,68℃加熱10 min 以終止反應。5. 用G-50離心柱分離探針。 6. 用比色法或化學發光法測定地高辛標記的探針。7. 用堿性磷酸酶偶聯的抗地高辛抗體代替鏈親和素-堿性磷酸酶交聯物。8. 利用地高辛標記的標唯DNA或是標好的地高辛探針作為對照檢測地高辛摻入效率。......閱讀全文

    高地辛標記的DNA探針制備實驗

    實驗材料 DNA試劑、試劑盒 dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱實驗步驟 1. ?建立一個標準100 μl 反應體系,用10 μl,10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液,DNA酶Ⅰ酶量不變,15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直

    高地辛標記的DNA探針制備實驗

    基本方法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒

    高地辛標記的DNA探針制備實驗——基本方法

    實驗材料DNA試劑、試劑盒dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?建立一個標準100 μl 反應體系,用10 μl,10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液,DNA酶Ⅰ酶量不變,15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直到獲得大

    DNA探針的標記實驗

    探針標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測,必須將雜交鏈中的一

    DNA探針的標記實驗

    實驗方法原理?分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測,必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的進行標記,這條鏈就稱為核酸探針。因此,核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。放射性同位素標記是最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法。

    DNA探針的標記實驗

    核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下可按堿基互補原則形成雙鏈,此雜交過程是高度特異的。核酸探針根據核酸的性質,可分為DNA和RNA探針;根據標記物不同,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻

    DNA-酶-I-足跡探針的制備實驗

    試劑、試劑盒 TE牛腸堿性磷酸酶緩沖液 T4 多核苷酸激酶緩沖液TBE 加樣緩沖液TBE質粒 DNA合適的限制酶粉 氯仿氯仿 異戊醇(3-甲基-1-丁醇)乙醇牛腸堿性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸銨 乙酸鈉丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED儀器、耗材 SpeedVac 旋轉濃縮器

    DNA-酶-I-足跡探針的制備實驗

    DNA 酶 I 足跡探針的制備實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 牛腸堿性磷酸酶緩沖液 T4 多核苷

    DNA-酶-I-足跡探針的制備實驗

    試劑、試劑盒TE牛腸堿性磷酸酶緩沖液T4 多核苷酸激酶緩沖液TBE 加樣緩沖液TBE質粒 DNA合適的限制酶粉 氯仿氯仿 異戊醇(3-甲基-1-丁醇)乙醇牛腸堿性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸銨乙酸鈉丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED儀器、耗材SpeedVac 旋轉濃縮器實驗步驟

    Northern雜交操作步驟和DNA探針的制備與標記(2)

    (4) 將1 ~ 2 μl RNA 上樣緩沖液加到乙二醛化的RNA 樣品中,然后馬上把RNA樣品加到凝膠加樣孔中,留著兩邊最外面的兩個孔不要加樣。將RNA 相對分子質量標準參照物加到最外面的孔中。(5) 以5V/cm 的電壓進行電泳,直到溴酚藍遷移大約8 cm。(6) 將凝膠放在保鮮膜上,在紫外燈下

    Northern雜交操作步驟和DNA探針的制備與標記(1)

    一.原理Northern 雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計其豐度的實驗方法,可以從大量的RNA樣本同時獲得這些信息。其基本步驟包括:1. 完整mRNA的分離2. 根據RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RNA進行分離3. 將RNA 轉移到固相支持物上,在轉移的過程中,要保持RNA 在凝膠中的相

    DNA探針的制備方法

    基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別

    “DNA探針”的制備過程

    基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別

    PCR擴增制備帶標記探針

    實驗概要用標記脫氧單核苷酸部分代替PCR反應體系中的脫氧核苷酸(一般是帶標記的dUTP代替dTTP),經PCR擴增后標記基團隨機攙入擴增產物-DNA探針中。這樣使探針濃度高,可檢測標記基團量多,靈敏度高,與缺口平移法制備探針相比,具有方便簡捷的特點,并且由于具高靈敏度因此在檢測低豐度,低拷貝數的目的

    地高辛配基隨機標記DNA探針

      1.標記DNA探針   每次標準的反應可標記10ng至3μg線性的DNA,也可標記更大量的DNA,但所有的成分和體積要相應增加。   (1)DNA探針熱變性,煮沸10min,迅速冷卻于冰/乙醇中5min以上,待用。   (2)取Eppendorf管(1.5ml)置于冰上,加下列及試劑:

    末端標記DNA探針技術

    現以Klenow片段標記3'末端為例說明末端標記的方法。1、材料:待標記的雙鏈含凹缺3'末端的DNA。2、設備:高速臺式離心機,水浴鍋等。3、試劑:(1)3種不含標記的dNTP各為200mmol/L。(2)合適的限制酶。(3)[α-32P] dNTP:3000Ci/mmol, 10m

    雙鏈DNA探針標記法

      分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。  雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。  1.切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連

    DNA探針標記常用試劑的配制

      (1)10 ×缺口平移緩沖液:200mmol/l Tris-HCl,pH7.4含50mmol/L MgCl2;100mmol/Lβ-巰基乙醇、1mg/ml BSA。   (2)缺口平移反應終止液:200mmol/L NaCl;10mmol/l Tris-HCl,pH7.4; 11mmol/L

    末端標記法介紹DNA探針的標記方法

    末端標記法不是將DNA進行全長標記,只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針,因為攜帶的標記分子較少,所以標記比活性不高。

    雙鏈DNA探針標記法介紹

    分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。1.?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的

    雙鏈DNA探針標記法的介紹

      分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。  雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。  切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到

    核酸探針標記的實驗過程

    ?實驗原理分子生物研究中,zui常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可

    核酸探針標記的實驗過程

    實驗原理分子生物研究中,zui常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將

    核酸探針標記的實驗過程

    實驗原理分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將

    常用DAN探針制備的方法介紹轉錄標記

    轉錄標記(transcription labeling)是利用啟動子(oromoter)結合 RNA 聚合酶啟動轉錄的特性設計的一種標記方法。Melotn(1984)等將目的 DNA 片段克隆到含 SP 啟動子的載體上,目的基因位于啟動子下游,加上 RNA 聚合酶,轉錄合成了 RNA 探針。與切口平

    常用DAN探針制備的方法介紹PCR-標記

    PCR 技術是1985年 KarryMullis 等首先創建的可在體外迅速、大量地擴增一定長度的核苷酸序列的技術。PCR問世以來已廣泛應用于分子生物學研究和疾病診斷中。此技術還應用于核酸探針的制備。Girgsi 等(1988)應用 PCR 從多序列制備了 DNA 探針。Shcow-aletr 和 S

    DNA探針的非同位素標記

    實驗方法原理進行Southern雜交分析時應標記不帶載體的插入片段作為探針,常用的標記方法耗時很長,它包括將質粒或λDNA經限制性內切酶酶解后分離插入片段,用切口平移法或隨機引物標記法進行標記。相比之下,采用PCR聚合酶鏈式反應法標記探針有幾個優點,只需極少量的質粒DNA(50ng)作模板即可擴增出

    隨機引物法介紹DNA探針的標記方法

    變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段,作為引物,當后者與單鏈DNA多個部位互補結合后,按堿基互補原則不斷在其3'-OH端添加同位素標記的單核苷酸,這樣也可以獲得放射性比活性很高的DNA探針。

    DNA探針的非同位素標記

    實驗方法原理 進行Southern雜交分析時應標記不帶載體的插入片段作為探針,常用的標記方法耗時很長,它包括將質粒或λDNA經限制性內切酶酶解后分離插入片段,用切口平移法或隨機引物標記法進行標記。相比之下,采用PCR聚合酶鏈式反應法標記探針有幾個優點,只需極少量的質粒DNA(50ng)作模板即可擴增

    利用聚合酶鏈反應制備放射性標記的DNA探針

    實驗材料?耐熱的 DNA 聚合酶模板 DNA試劑、試劑盒?乙酸銨擴增緩沖液氯仿乙醇TEdCTPdNTP 溶液儀器、耗材?屏障吸頭微量離心管正向置換進樣器Sephadex G-50 離心柱熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨(10 mol/L)10X 擴增緩沖液用于乙醇沉淀放射性標記探針

    人体艺术视频