探針的非放射性標記技術2
一；儀器：同上 二：試劑：ECL標記盒，其余同上 三：操作：1：將待標記的DNA稀釋至10ng/ml 2：將上述DNA在100℃5分鐘，冰浴5分鐘 3：離心后加入10ulECL標記混合物，混合均勻 4：加10ul戊二醛溶液混勻，37℃20分鐘，此反應液可直接用于雜交也可在50％甘油中－20℃保存。 4：PCR擴增制備帶標記探針 用標記脫氧單核苷酸部分代替PCR反應體系中的脫氧核苷酸（一般是帶標記的dUTP代替dTTP），經PCR擴增后標記基團隨機攙入擴增產物－DNA探針中。這樣使探針濃度高，可檢測標記基團量多，靈敏度高，與缺口平移法制備探針相比，具有方便簡捷的特點，并且由于具高靈敏度因此在檢測低豐度，低拷貝數的目的片斷時，尤其有效。一般可用來進行攙入的帶標記基團可以為同位素標記基團、臭化脫氧尿苷標記基團、也可為其他非放標記基團如生物素、地高辛等。下面以生物素和......閱讀全文
探針的非放射性標記技術2
一；儀器：同上 二：試劑：ECL標記盒，其余同上 三：操作：1：將待標記的DNA稀釋至10ng/ml 2：將上述DNA在100℃5分鐘，冰浴5分鐘 3：離心后加入10ulECL標記混合物，混合均勻 4：加10ul戊二醛溶液混勻，37℃20分鐘，此反應
探針的非放射性標記技術1
核酸探針是指能與特定核酸序列發生特異性互補的寡核苷酸鏈。核酸探針有雙鏈DNA探針、單鏈DNA 探針、RNA探針和寡核苷酸探針。特異性探針來源于目的核酸的酶切片斷、dd-PCR等差異顯示中出現的差異片斷、AFLP、RFLP、RAPD、SSR、CFLP等標記實驗中出現的特異性基因標記片斷。可以通過人
非放射性地高辛標記DNA探針法
實驗概要掌握非放射性地高辛標記DNA探針法。??實驗原理以往人們是用放射性同位素來標記探針DNA。近年來，非同位素標記方法發展很快，已有取代同位素標記法的趨勢。地高辛配基隨機標記DNA探針法，是較為成功的一種非同位素標記方法（Saiki等，1985）。其原理是：用化學方法把類固醇類半抗原地高辛分子連
非放射性標記探針的雙重標記原位雜交
?? ? 如果用不同的標記物標記不同的核酸探針，只要互相不影響各自的雜交反應，檢測系統也不相互干擾，雜交信號易于分辨，原則上均能用于雙重或多重標記原位雜交。應用非放射性標記探針的雙重標記原位雜交。可克服放射性核素標記探針的分辨率低、時間長以及放射性污染等缺點。??? 1．應用生物素標記探針的雙重標記
放射性核素標記技術的優缺點
穩定同位素和放射性同位素均可用來示蹤，但在實際應用中，穩定同位素具有放射性同位素無法比擬的優越性：（1）安全、無輻射，穩定同位素對動植物不會造成傷害，在使用、運輸和儲存的過程中比較方便；（2）半衰期長，放射性同位素因其半衰期太短而沒有實用性，限制了其應用，而穩定同位素的半衰期均大于1×1015年，因
核酸雜交技術(Northern－Blot、Southern－Blot和探針標記）
（一）Southern Blot原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進
呂弋：探針和標記技術－讓光譜解碼生命奧秘
分析測試百科網訊 光譜技術已邁過百年歷史長河，中國的光譜分析技術亦可追溯到上個世紀50年代，今日中國的光譜技術已從國際上“跟跑”躍升到部分領域領跑的地位。在這巨大飛躍的背后，是老中青科學家為克服嚴峻挑戰而付出的辛勤汗水。伴隨著將在成都召開的第21屆全國分子光譜學學術會議，中國光學學會光譜專業委員
非放射性Dig－dUTP
[原理]DNA是通過異羥基洋地黃毒苷（digoxigenin，Dig）配基標記的脫氧尿嘧啶核苷三磷酸（dUTP）隨機插入結合而被標記。dUTP通過間臂連結類固醇半抗原異羥基洋地黃毒苷酸基，形成Dig-dUTP，雜交反應后，雜交的靶DNA通過酶聯免疫法與一個抗體復合物[抗異羥基洋地黃毒苷配基堿性磷酸酶
雜交探針的檢測實驗2
實驗材料膠乳試劑、試劑盒顯影劑儀器、耗材浸泡盒水浴鍋玻片架實驗步驟1. ?在42℃~45℃水浴溶化小份稀釋的膠乳10 min，將膠乳倒入或吸入潔凈的玻片包裝盒中（浸泡盒）。?2. ?將玻片緩慢并輕柔地浸入浸泡盒中，緩慢取出并垂直放置在試管架上或將玻片置于干燥器中2 h，使其干燥。3. ?將充分干燥的
非放射性標記的方法介紹
中文名稱非放射性標記英文名稱nonradiometric labeling;nonradioactive labeling定 義用熒光、顯色物質或穩定性同位素等非放射性物質代替放射性核素對化合物進行的標記。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
熒光原位雜交技術的問世
熒光標記技術（FISH）指利用一些能發射熒光的物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。 上述試題的技術是在原熒光標記技術基礎上發展起來的熒光原位雜交技術。 1969年，Gall和Pardue等首次將同位素探針用于原位雜交實驗，獲得成功。 1
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交組織化學實驗技術1
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質
原位雜交組織化學技術的基本方法
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交組織化學概述
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
定量PCR－Taqman探針設計要領2
第三步：尋找一家信賴的公司合成引物和探針，一般引物合成大家比較熟悉，而且價格也比較便宜（特別是這兩年便宜了許多），而探針則相對來說貴了許多，一般 Taqman探針合成在1000到5000元不等（不同的合成要求價錢不同）——而這只是標記價錢，序列合成基本上和引物合成價錢相似。 第四、五、六步：一般
農作物種子純度鑒定方法綜述3
4分子標記鑒定法廣義的分子標記是指可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白質。蛋白質標記包括種子貯藏蛋白和同工酶(指由一個以上基因位點編碼的酶的不同分子形式)及等位酶(指由同一基因位點的不同等位基因編碼的酶的不同分子形式)。狹義的分子標記概念只是指DNA標記，而這個界定現在被廣泛采納。由于DNA分子中堿基
地高辛檢測方法
地高辛檢測試劑盒?DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I貨號:?11745832910羅氏科學應用部（Roche Applied Science）是最早致力于向用戶提供非放射標記技術的公司之一，讓更多的科研工作者們可以避免使用危
放射性核素數據（放射性核素衰變表、放射性測定單...2
3、原子量 符號 原子序數 原子量 錒（actinium） Ac 89 227.02
核酸探針標記及原位雜交2
（二）隨機引物合成法 隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合，在Klenow酶的作用下，合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常，產物平均長度為400～600個，可以獲得大量的有效探針。反應時對模板的要求不嚴格，用微量制備的質
用寡聚（dT）作引物合成放射性標記的扣除cDNA探針
實驗方法原理?本方案描述通過與 mRNA 驅動方雜交，繼之以羥基磷灰石層析純化單鏈放射性標記的 cDNA，制備扣除 cDNA 探針。實驗材料?反轉錄酶反轉錄酶緩沖液驅動方 mRNA模板 mRNA試劑、試劑盒?乙酸銨DTTEDTA乙醇HCl異丁醇NaOH酚氯仿胎盤 RNA 酶抑制劑SDSSDS EDT
用寡聚（dT）作引物合成放射性標記的扣除cDNA探針
本方案描述通過與 mRNA 驅動方雜交，繼之以羥基磷灰石層析純化單鏈放射性標記的 cDNA，制備扣除 cDNA 探針。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理本方案描述通過與 mRNA 驅動方雜交，繼之以羥基磷灰石層析純化單鏈放射性標記的 cDNA，制備扣除 cDNA 探針。實驗
原位雜交組織化學實驗技術2
DNA合成儀的誕生使制造寡核苷酸探針成為可能，與上述探針不同的是寡核苷酸探針不是克隆性DNA探針，它是由DNA合成儀依照所需雜交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便，價格低廉的優點，也可進行放射性與非放射性標記，但其特異性不如克隆性探針強，亦不如其雜交信號高。 原位雜交組織化學技術在近20年的發展
RAPD標記技術
實驗概要運用隨機引物擴增尋找多態性DNA片段可作為分子標記。這種方法即為RAPD(randomly ?amplifiled polymorphic ?DNA,隨機擴增的多態性DNA.)該RAPD技術建立于PCR基礎上，它是利用一系列(通常數百個)不同的隨機排列堿基順序的寡聚核苷酸單鏈(通常為十聚體)
AFLP標記技術
實驗概要AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來(附圖)。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的
RFLP標記技術
實驗概要DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。RFLP(Restriction ?Fragment Length ?Polymorphism,限制片段長度多態性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據不同品種（個體）基因組的限制性內切酶的酶
分子雜交技術（二）
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
分子雜交技術（二）
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
放射性標記的探針與固定在膜上的核酸Southern雜交
放射性標記的探針與固定在膜上的核酸Southern雜交1.?將含有靶DNA的膜漂浮在盛有6×SSC（或6×SSPE）的皿中直到膜自下面而上完全浸濕。將膜浸于溶液中2 min。2.?用下列方法之一進行預雜交在熱密封的袋中進行的雜交a.???????將膜塞入熱密封袋中（如Sears Seal-A-Mea
IL2質粒DNA探針制備的操作步驟
實驗概要本實驗介紹了IL-2質粒DNA探針制備的詳細步驟。實驗步驟1. 含IL-2質粒DNA探針的提取?? 1) 取含IL-2質粒DNA的單個菌落置兩個25ml LB培養基(含100μg/ml Amp)，37℃ 220r/min 振搖過液(約16h )；?? 2) 取10ml菌液加200ml LB培