AFLP標記技術
實驗概要AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來(附圖)。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后PCR反應的引物結合位點。實驗中,根據需要通過選擇在末端上分別填加了1～3個選擇性核苷的不同引物,可以達到選擇性擴增的目的。這些選擇性核苷酸使得引物能選擇性地識別具有特異配對順序的內切酶片段,進行結合,導致特異性擴增。主要試劑Taq酶 EcoR I/ Mse I EcoR I/ Mse I接頭 E A引物M C引 物T4 DNA&nb......閱讀全文
AFLP技術
實驗概要本實驗介紹了AFLP（amplified fragment length polymorphism）技術。AFLP是一種建立在PCR基礎上的限制性片斷長度多態性分析，是一種重要而有效的分子標記技術。主要試劑AFLP試劑盒、測序膠、銀染試劑主要設備PCR儀、銀染設備實驗步驟1. 總DNA提取(
cDNA/AFLP－Protocol
Preparation of Para-magnetic beads from Promega cat#Z5482:a) suspend magnetic particles in bottle - transfer 200 ul (200 ug) of beads per sampleof RNA
AFLP標記技術
實驗概要AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來(附圖)。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的
AFLP分子標記實驗
其基本原理是：以PCR(聚合酶鏈式反應)為基礎，結合了RFLP、RAPD的分子標記技術。把DNA進行限制性內切酶酶切，然后選擇特定的片段進行PCR擴增(在所有的限制性片段兩端加上帶有特定序列的“接頭”，用與接頭互補的但3-端有幾個隨機選擇的核苷酸的引物進行特異PCR擴增，只有那些與3-端嚴格配對的片
基于－AFLP－的轉錄表達譜分析
實驗材料Total RNA試劑、試劑盒鏈霉親和素包被的磁珠洗滌緩沖液EDTA第一鏈緩沖液第二鏈緩沖液DTT4 dNTP 的混合物SuperScript IIRNase HSTEXTris· ClRL緩沖液ATPPCR 緩沖液T4 多核苷酸激酶緩沖液加樣染料硅烷黏合硅烷溶液變性聚丙烯酰胺凝膠TBE 分
分子標記—AFLP原理和操作步驟
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的粘末端順
分子標記—AFLP原理和操作步驟
AFLP可用于：（1）構建遺傳連鎖圖譜；（2）利用AFLP快速鑒別與目的基因緊密連鎖的分子標記；（3）AFLP輔助的輪回選擇育種；（4）研究基因表達與調控；（5）分類和進化研究；（6）甲基化研究等。實驗方法原理AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順
基于－AFLP－的轉錄表達譜分析（二）
19. 取 10 ml 反應混合物和分子質量參照物一起電泳，檢查預擴增的情況。 應該看到位于 50～500 bp 之間的，呈拖尾狀的彌散產物。20. 按 1：500 稀釋 2 ul 非選擇性的預擴增cDNA片段（也就是＋0/＋0）到Tris· Cl （pH 8. 0）/0.1 mmol/L EDTA
基于－AFLP－的轉錄表達譜分析（一）
實驗方法原理 實驗材料 Total RNA試劑、試劑盒 鏈霉親和素包被的磁珠洗滌緩沖液EDTA第一鏈緩沖液第二鏈緩沖液DTT4 dNTP 的混合物SuperScript II RNase HSTEXTris· ClRL緩沖液ATP PCR 緩沖液T4 多核苷酸激酶緩沖液加樣染料硅烷黏合硅烷溶
分子標記方法：AFLP原理和操作步驟
AFLP原理：AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘
AFLP(擴增性片段長度多態性)技術的定義
AFLP技術是一項新的分子標記技術，是基于PCR技術擴增基因組DNA限制性片段，基因組DNA先用限制性內切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DNA片段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點序列，作為引物結合位點。限制性片段用二種酶切割產生，一種是罕見切割酶，一種是常用切割酶。它結合了(限制性內切酶片段長度多態
關于妊娠期急性脂肪肝的預后介紹
近10年來AFLP的預后明顯改善，有文獻報道低于10%。降低孕產婦死亡率的關鍵是早期診斷和及時終止妊娠。大部分孕婦終止妊娠后癥狀迅速改善，無明顯后遺癥。 目前認為AFLP有復發可能。因此，有AFLP史者在以后的妊娠中一定要加強臨床和實驗室的監測，在原發和復發的AFLP中，首發癥狀往往十分相
關于妊娠急性脂肪肝的預后介紹
近10年來AFLP的預后明顯改善，有文獻報道低于10%。降低孕產婦死亡率的關鍵是早期診斷和及時終止妊娠。大部分孕婦終止妊娠后癥狀迅速改善，無明顯后遺癥。 目前認為AFLP有復發可能。因此，有AFLP史者在以后的妊娠中一定要加強臨床和實驗室的監測，在原發和復發的AFLP中，首發癥狀往往十分相似。
急性妊娠脂肪肝的病理及臨床表現
病理 AFLP的病理改變為肝臟大小正常或輕度縮小，色黃質軟，光滑，切面油膩。組織學改變主要是彌漫性肝細胞脂肪變性和脂肪浸潤，脂肪變性是微囊泡狀，脂肪變可侵及整個肝小葉，匯管區可有炎細胞浸潤，也可見少量肝細胞壞死和淤膽。 臨床表現 通常AFLP發生在妊娠的第28～40周，平均第36周，以26
急性妊娠脂肪肝的臨床表現
通常AFLP發生在妊娠的第28～40周，平均第36周，以26～30歲的孕婦多見，患者約48%是初產婦，其中14%是雙胎孕婦，嬰兒男女性別比為3：1。AFLP起病急驟，主要臨床表現為乏力、厭食、惡心、嘔吐、腹痛，有出血傾向，可迅速轉入昏迷；約90%的患者可出現持續性惡心和嘔吐，腹痛以右上腹或劍下明
DNA標記的擴增片段長度多態性介紹
AFLP是1995年荷蘭科學家Zabeau和Vos等發展起來的一種檢測DNA多態性的新方法，文章發表于Nucleic Acids Research。AFLP 是 RFLP 與PCR相結合的產物，其基本原理是先利用限制性內切酶水解基因組 DNA 產生不同大小的 DNA 片段，再使雙鏈人工接頭的酶切
妊娠期急性脂肪肝的鑒別診斷介紹
1.急性重癥病毒性肝炎 肝臟衰竭是急性重癥病毒性肝炎的主要表現，臨床上與AFLP極為相似，應特別注意鑒別。急性重癥病毒性肝炎的血清免疫學檢查往往陽性（包括肝炎病毒的抗原和抗體檢測）；轉氨酶極度升高，往往>1000U/L；尿三膽陽性。血尿酸升高不明顯，白細胞計數正常，腎功能異常出現較晚。外周血涂
基因型分析
Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD)Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD)?by??(DNA KAFFE)RAPD analysis has been successfully used in mapping
急性妊娠脂肪肝的治療
AFLP尚無特效療法，一旦確診應及早終止妊娠，可行剖宮產或引產，以改善患者預后。同時給予支持和對癥治療。通過外周靜脈補充各種營養素必要時通過中心靜脈進行靜脈營養，維持水電解質平衡。可適量應用肝泰樂、肝得健、蛋氨酸、復方膽堿等藥物。對伴有貧血或出血傾向明顯者可適量補充紅細胞、血小板及新鮮冰凍血漿等
妊娠期肝內膽汁淤積的簡介
娠娠期肝內膽汁淤積癥表現為瘙癢、轉氨酶升高、黃疸、膽汁酸升高。而AFLP無瘙癢和膽汁酸的升高。妊娠期膽汁淤積癥的組織學改變主要是肝小葉中央毛細膽管中膽汁淤積，胎盤組織亦有膽汁沉積；而AFLP的肝細胞主要是脂肪小滴浸潤，胎盤無明顯改變。
急性妊娠脂肪肝的病因與發病機制
AFLP的病因及發病機制尚未闡明，目前尚未見遺傳因素與本病有關的報道，孕婦血清學檢查和病毒培養陰性亦不支持感染因素致病的可能，大多數孕婦沒有明確的毒物接觸史。目前，多數人認為妊娠后體內性激素水平的變化與本病有直接關系，孕婦體內雌激素、生長激素、兒茶酚胺等水平升高，加之妊娠末期孕婦處于應激狀態，使
關于妊娠急性脂肪肝的實驗室檢查
（1）血常規，外周血白細胞計數升高，可達（15.0～30.0）×109/L，出現中毒顆粒，并見幼紅細胞和嗜堿性點彩紅細胞；血小板計數減少，外周血涂片可見肥大血小板。 （2）血清總膽紅素中度或重度升高，以直接膽紅素為主，一般不超過200μmol/L；血轉氨酶輕度或中度升高，ALT不超過300U/
關于妊娠期急性脂肪肝的實驗室檢查介紹
（1）血常規，外周血白細胞計數升高，可達（15.0～30.0）×109/L，出現中毒顆粒，并見幼紅細胞和嗜堿性點彩紅細胞；血小板計數減少，外周血涂片可見肥大血小板。 （2）血清總膽紅素中度或重度升高，以直接膽紅素為主，一般不超過200μmol/L；血轉氨酶輕度或中度升高，ALT不超過300U/
幾種標記實驗的特點
RAPD利用 10 個堿基的一個或幾個隨機引物非定點地擴增 DNA 片段，一般一個引物可擴增 6-12 條 DNA 片段，利用凝膠電泳分開擴增的片段，從而進行基因多態性研究。 RAPD 是一種能快速進行基因多態性研究的技術，并且由于不涉及印跡雜交、放射性自顯影等技術，因此簡便易行。SSR 真核生物的
常用的幾種分子標記
RAPD利用 10 個堿基的一個或幾個隨機引物非定點地擴增 DNA 片段，一般一個引物可擴增 6-12 條 DNA 片段，利用凝膠電泳分開擴增的片段，從而進行基因多態性研究。 RAPD 是一種能快速進行基因多態性研究的技術，并且由于不涉及印跡雜交、放射性自顯影等技術，因此簡便易行。?SSR 真核生物
擴增片段長度多態性的方法
AFLP 是 RFLP 與PCR相結合的產物，其基本原理是先利用限制性內切酶水解基因組 DNA 產生不同大小的 DNA 片段，再使雙鏈人工接頭的酶切片段相邊接，作為擴增反應的模板 DNA，然后以人工接頭的互補鏈為引物進行預擴增，最后在接頭互補鏈的基礎上添加 1—3個選擇性核苷酸作引物對模板 DNA
擴增片段長度多態性的實現方法
AFLP 是 RFLP 與PCR相結合的產物，其基本原理是先利用限制性內切酶水解基因組 DNA 產生不同大小的 DNA 片段，再使雙鏈人工接頭的酶切片段相連接，作為擴增反應的模板 DNA，然后以人工接頭的互補鏈為引物進行預擴增，最后在接頭互補鏈的基礎上添加 1—3個選擇性核苷酸作引物對模板 DNA
擴增片段長度多態性的方法介紹
AFLP 是 RFLP 與PCR相結合的產物，其基本原理是先利用限制性內切酶水解基因組 DNA 產生不同大小的 DNA 片段，再使雙鏈人工接頭的酶切片段相邊接，作為擴增反應的模板 DNA，然后以人工接頭的互補鏈為引物進行預擴增，最后在接頭互補鏈的基礎上添加 1—3個選擇性核苷酸作引物對模板 DN