一；儀器：同上
二：試劑：ECL標記盒，其余同上
三：操作：1：將待標記的DNA稀釋至10ng/ml
2：將上述DNA在100℃5分鐘，冰浴5分鐘
3：離心后加入10ulECL標記混合物，混合均勻
4：加10ul戊二醛溶液混勻，37℃20分鐘，此反應液可直接用于雜交也可在50％甘油中－20℃保存。
4：PCR擴增制備帶標記探針
用標記脫氧單核苷酸部分代替PCR反應體系中的脫氧核苷酸（一般是帶標記的dUTP代替dTTP），經PCR擴增后標記基團隨機攙入擴增產物－DNA探針中。這樣使探針濃度高，可檢測標記基團量多，靈敏度高，與缺口平移法制備探針相比，具有方便簡捷的特點，并且由于具高靈敏度因此在檢測低豐度，低拷貝數的目的片斷時，尤其有效。一般可用來進行攙入的帶標記基團可以為同位素標記基團、臭化脫氧尿苷標記基團、也可為其他非放標記基團如生物素、地高辛等。下面以生物素和地高辛為例介紹探針的PCR標記技術。
一：生物素標記
應用bio-11-dUTP部分替代dTTP攙入PCR擴增探針中
操作1：配制反應體系
dNTP的組成dATP、dCTP、dGTP各20mmol,dTTP 15mmol, bio-11-dUTP 5mmol混勻，其他試劑如常規PCR。
2：25循環后，凍存，取出化凍，趁下層水相尚在冰凍狀態，吸盡石蠟油
3：水相中20mg/ml糖原1ul, pH5.2 2.5MnaAC10ul,220ul無水乙醇。混勻后－20℃過夜
4：離心取沉淀，冷凍干燥后100ul水或TE復溶。
二：地高辛標記
應用dig-11-dUTP部分替代dTTP攙入PCR擴增探針中
操作1：配制反應體系
dNTP的組成dATP、dCTP、dGTP各200umol,dTTP 130umol, bio-11-dUTP 70umol混勻，其他試劑如常規PCR。
2：35循環擴增產物
3：擴增產物純化與DIG隨機標記探針方法相同（僅沉淀時，50ulPCR反應液中加入5ul4MliCl和150ul冰乙醇）。
注：1：標記時標記基團在dNTP中占的比例不能太高，因標記基團與dTTP相比具位阻效應，比例太高PCR擴增及以后的雜交都要受到影響。
2：靶DNA用量不能太高，生物素標記中控制在0.2fmol左右；地高辛標記中可低至0.1ng。