固相pH梯度等電聚焦實驗
制膠 等電聚焦 pH 梯度的測定 檢測 實驗方法原理 固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質（丙烯酰胺衍生物）共價結合到聚丙烯酰胺凝膠中并形成 pH 梯度，所以制膠過程比載體兩性電解質凝膠復雜。灌膠的方法與常規聚丙烯酰胺梯度凝膠和 SDS 梯度凝膠相似。高質量的凝膠介質和固相 pH 梯度介質，聚合過程以及漂洗對固相 pH 梯度凝膠是非常重要的。 試劑、試劑盒 丙烯酰胺單體貯液 過硫酸銨貯液 儀器、耗材 ......閱讀全文
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗8
方案8 第二向：蛋白質的 SDS-PAGE 實驗實驗方法原理在第一向 IEF 和 IPG 膠條平衡之后，需進行第二向 SDS-PAGE。SDS-PAGE 是基于蛋白質分子量的不同而將其分離的。這種分離系統可從多家供應商處獲得，在許多蛋白質化學實驗室中也普遍使用。這里介紹放置 IPG 膠條的方法以及第
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗10
方案11 銀氨染色實驗方法原理銀染聚丙烯酰胺凝膠首先由 Switzer 等引進（1979)，已迅速成為一種最普遍使用的高靈敏度蛋白質染色方法。因存在背景高、重復性不好及銀鏡等問題，多年來對此方法的改進較多。目前，Rabilloud 等（1994b）在文獻中發現 100 多種不同的方案，但所有這些方案
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗13
方案13 用 GelCode 磷蛋白染色試劑盒對磷蛋白進行染色實驗實驗材料含蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒乙酸鉬酸銨溶液含硝酸的鉬酸銨溶液甲基綠溶液NaOH磺基水楊酸溶液含氯化鈣的磺基水楊酸溶液儀器、耗材帶有蓋子的玻璃或塑料平皿烘箱往復式或定軌式搖床實驗步驟1.將凝膠放入盛有 50 ml 水的平皿中，
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗14
方案14 雙向凝膠的槽式轉移實驗實驗材料包含蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材印跡紙硝化纖維素薄膜或 PVDF 膜電源電泳轉移設備實驗步驟1.測量 SDS-PAGE 凝膠的尺寸，將轉移膜剪成與凝膠相適應的尺寸。槽式轉移系統的膜根據需要可以剪成比凝膠大或者小。2.用水將薄膜潤濕或用甲醇將
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗15
方案15 雙向凝膠的半干印跡實驗實驗方法原理當 “ 三明治”結構中的濾紙浸透緩沖液時，半干印跡轉移設備能將蛋白質從凝膠轉移到膜上。和槽式印跡轉移設備相比，半干印跡只用較少的緩沖液；因為電極板靠得很近，故轉移時只要求較低的電壓。實驗材料含有蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材印跡紙支持性纖
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗16
方案16?用麗春紅 S 染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜的蛋白質試劑、試劑盒麗春紅乙酸實驗步驟1.用麗春紅 S 染液浸沒轉移后的膜，輕搖 5 min。2.棄去染液，用水清洗膜，重復幾次，直到蛋白質條帶變得清晰。不要重復使用染料，因為這可能使結果重復性變差。第一次用完后，將染料盡量排盡。3.用一只軟鉛筆標
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗17
方案17 用考馬斯亮藍 R250 染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜的蛋白質試劑、試劑盒考馬斯亮藍 R250甲醇乙酸實驗步驟1.將轉移后的膜浸在考馬斯亮藍染液中，輕搖 5min?。2.棄去染液，在搖床上用含乙酸的甲醇進行脫色。不要重復使用染液，因為這樣會使結果的重復性變差。3. 用水洗膜，輕搖 5min。
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗19
方案19 用膠體金染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜蛋白試劑、試劑盒膠體金染液PBS (PH 7. 2)吐溫-20溶液實驗步驟1.將膜浸入吐溫-20 溶液中，37°C，輕搖 45 min。2.室溫下，用吐溫-20 溶液洗膜，輕搖 5 min。3.棄去洗液，多次重復步驟①和②。4.室溫下在膠體金染液中染膜
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗11
方案11 與質譜兼容的銀染法實驗實驗方法原理在方案 11 中介紹的銀氨方法是用于檢測在 SDS-PAGE 凝膠上蛋白質的最靈敏的方法之一。但是，這種方法和其他標準銀染方法都不適合于質譜分析，而質譜已成為鑒定雙向凝膠上蛋白質的最好方法。因為在凝膠中被質譜分析的蛋白質不能被修飾，許多通常用的敏化試劑（例
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗12
方案12 用 SYPRO Ruby 進行熒光染色實驗材料含蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒固定液SYPRO Ruby 染料儀器、耗材聚丙烯塑料平皿往復式或定軌式搖床UV或藍光透射儀實驗步驟1.將膠放入聚丙烯塑料平皿中，其中應有足夠的固定溶液，使凝膠在平皿中能自由漂浮。在搖床上搖動 30 min。如果是多
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗9
方案9 膠體考馬斯亮藍染色實驗暫未評分點評實驗，有機會獲丁當獎勵?+收藏固相化 pH 梯度雙向凝膠電泳實驗標簽：雙向凝膠電泳蛋白質 固相化pH 蛋白質與蛋白質組學實驗指南 第四章雙向電泳是研究蛋白質組學的一種有效方法。與單向電泳相比，它能從復雜的蛋白質混合物中分離出更多的成分。電泳時，蛋白質遷移速度
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗7
方案7 垂直SDS 平板凝膠制備：同時灌制多梯度凝膠實驗實驗方法原理對于分離寬分子量范圍的蛋白質，梯度 SDS-PAGE 凝膠可提供最佳分析方法，產生更清晰的蛋白質點。通過減少凝膠中孔的尺寸，可使擴散減少。但是，梯度凝膠重復性較差，所以通常用多凝膠灌制裝置來同時灌制，制作一套凝膠來進行同一系列的實驗
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗18
方案18 用印度墨水染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜蛋白試劑、試劑盒印度墨水PBS吐溫-20溶液實驗步驟1.將膜浸人吐溫-20 溶液中，輕搖 10 min。2.棄去吐溫-20 溶液。3.重復步驟1與2三次。4.將膜轉人印度墨水中，輕搖染色 2~18 h。5.棄去染液，用吐溫-20 溶液洗膜，輕搖 5 m
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗5
方案5 第一向：蛋白質的等電聚焦電泳實驗實驗方法原理這里所描述的分離蛋白質的兩種方法都是基于蛋白質所帶凈電荷的多少，使用固相化的 pH 梯度凝膠進行的 IEF 技術。這些方法作為雙向凝膠分離的第一向，除了利用傳統的水平電泳儀進行 IPG 凝膠的等電聚焦外（方案 5 方法 A)，還能在自帶的電泳槽里使
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗6
方案6 垂直 SDS 平板凝膠的制備：均一凝膠的灌制實驗實驗方法原理蛋白質通過 IEF 進行分離之后，可進行第二向電泳，即 SDS-PAGE。本方案詳細介紹了灌制均一 SDS-PAGE 凝膠的方法。均一凝膠（具完全相同的%T和％c) 對特殊分子量范圍的蛋白質有較好的分離效果，因其灌制方法簡單而被普遍
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀特點
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的、線性或非線性的pH梯度中進行分離，具有以下特點：一、優點：1、分辨率高，區帶清晰、窄。2、加樣部位自由，重現性好。3、可測定蛋白和多肽的等電點。二、缺點：1、載體兩性電解質合成過程復雜，影響蛋白質點
聚丙烯酰胺等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的形成
聚丙烯酰胺等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質具有不同等電點的特性，以聚丙烯酰胺為電泳支持物，在其中加入載體兩性電解質（一種含有各種連續pI的小分子混合物）的電泳分離技術。載體兩性電解質是一系列多氨基多羧基的混合物，pI = 3～11。在制備聚丙烯酰胺凝膠時，將其混溶其中。載體兩性電解質在溶液中的行為可從
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀介紹
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的、線性或非線性的pH梯度中進行分離。一、載體兩性電解質的概念：載體兩性電解質是兩性的，使它們在電泳柱中能達到一個平衡位置。載體兩性電解質可以作為載體。兩性電解質不能用于等電聚焦，只有載體兩性電解質，即
制備電泳實驗——等電聚焦制備電泳
實驗方法原理等電聚焦制備電泳是一種非變性制備技術。由于等電聚焦電泳技術的特點，因而是一種理想的制備方法。試劑、試劑盒電極液兩性電解質Ultrodex實驗步驟一、液體介質垂直柱狀蔗糖密度梯度等電聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制備和分析目的的等電聚焦方法。載體兩性電解質在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
等電點聚焦分離蛋白質實驗
蛋白質可以在包被或非包被的毛細管柱分離，分離方案的選擇取決于靶蛋白的特異屬性。最重要的屬性就是pl，這由一般的凝膠電泳或CE決定。等電點聚焦分離是CE分離的一種。實驗方法原理等電點聚集（IEF） 分離可以通過 CE 輕易地達到，這也是選擇隨后用于蛋白質分離的緩沖液系統的有效的第一步。蛋白質和多肽是兩
等電點聚焦分離蛋白質實驗
實驗方法原理 等電點聚集（IEF） 分離可以通過 CE 輕易地達到，這也是選擇隨后用于蛋白質分離的緩沖液系統的有效的第一步。蛋白質和多肽是兩性的，因此它們的電荷由周圍的載體緩沖液決定。當蛋白質或多肽處于電場中，它移動到一個區域，這里周圍的 pH 等于其等電點（pI）。在包被的毛細管柱內可
等電點聚焦分離蛋白質實驗
等電點聚焦 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 等電點聚集（IEF） 分離可以通過 CE 輕易地達到，這也是選擇隨后用于蛋白質分離的緩沖液系統的有效的第一步。蛋白質和多肽是兩性
等電點聚焦電泳
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
芯片等電聚焦分離
芯片等電聚焦分離蛋白質的原理與常規毛細管等電聚焦基本相同，都是依據蛋白質的等電點(pI)不同而進行分離。Hofmann等首次將毛細管等應用于蛋白質分析。Li等在PDMS芯片和聚碳酸酯(PC)芯片上，采用等電聚焦模式分離廠牛血清白蛋白和增強型綠色熒光蛋白(EGFP)。Das等。26 3采用高聚物芯片，
什么是等電聚焦？
等電聚焦是一個物理學名詞。等電點聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，當蛋白質放進此體系時，不同的蛋白質即移動到或聚焦于與其等電點相當的pH位置上。
等電聚焦(isoelectric－focusing)
等電點聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，當蛋白質放進此體系時，不同的蛋白質即移動到或聚焦于與其等電點相當的pH位置上，電聚焦的優點是：有很高的分辨率，可將等電點相差0.01-0.02pH單位的蛋白質分開；一般電泳由于受擴散作用的
等電聚焦電泳色譜儀分離技術介紹（二）
8、載體兩性電解質pH值梯度不穩定的原因：陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過程。反之，如果其酸性端逐漸消失則稱為陽極漂移。為了闡明等電聚焦電泳中pH值梯度不穩定的機制，提出了各種假說：（1）載體兩性電解質向陰、陽極的等速電泳遷移。（2）在陰極因CO2的吸附而引起陰極液組分和濃度
關于等電聚焦水平板電泳法的固色和染色介紹
（1）等電聚焦水平板電泳法的試劑： a、固定液 20%三氯醋酸 b、染色液（i）染色儲備液 稱取1.0gG-250，溶于20ml水中，為溶液1；稱取125g（NH4）2SO4，溶于400ml水中，為溶液2；稱取20g H3PO4，為溶液3；將溶液3加入到溶液1中，待G-250完全溶解后 ，與
等電聚焦注意事項
1.等電聚焦后可用一根染色的細線（0.1mm）標出染料前沿的位置； 2.不同品牌的載體兩性電解質性質上有細微的差別，使用不同來源的載體兩性電解質凝膠時候蛋白質分離樣式略有差異，若要獲得最好的重復性一般不要更換載體兩性電解質的品牌； 3.通常，窄范圍的pH梯度可以提高分辨率，但是需要時間也比較
固相萃取前調節ph
近年來分析檢測技術有了很大的飛躍，但樣品前處理依然是科研工作者必須面對的挑戰。 固相萃取（Solid Phase Extraction，簡稱SPE）是一種從二十世紀七十年代中期開始發展起來，用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術。根據吸附劑填料及吸附機理的不同，主要分為正相、反相、離子交換和