實驗方法原理檢査配方設計:如果配方完全,在加完血清之后可直接使用;如果配方不全(例如,缺少谷氨酰胺),則加人相應的濃縮液。實驗材料培養基儲存液谷氨酰胺血清抗生素青霉素鏈霉素試劑、試劑盒吸液管實驗步驟1. 檢查培養基的配方,并決定需要添加何種添加劑,例如谷氨酰胺。2. 將培養基放在超凈臺內,如果需要可加入其他補充物或添加劑。3 . 如果瓶蓋用聚乙烯封口,去掉聚乙烯,用 70 % 的乙醇擦洗。4. 將瓶子打開。5. 將各種適量的添加劑加到瓶中,并做正確稀釋;如果配制 100 ml,按下列配方:谷氨酰胺,200 mmol/L,1 ml抗生素(如果需要使用),0.5 ml (每種各取)血清,10 ml (10%)(a) 每一種添加劑均用不同的移液管。(b)加完一種添加劑后將其移到超凈臺的一側,這樣就知道已經加了哪種添加劑。(c)培養基配完后,將所有的添加劑和補充物從超凈臺上拿走。6. 此方案特別針對以 Hank’s 鹽溶液配制的 MEM......閱讀全文
食品微生物實驗室規劃設計方案一、選址:實驗室應選擇在清潔安靜的場所,遠離生活區,鍋爐房與交通要道;實驗室應選擇在光線充足,通風良好的場所,要與生產加工車間有一定距離;實驗室應選擇在方便扦樣與檢驗,距離車間較近的工作場所。二、結構和布局:根據生產實際需要,一般工廠應設置細菌與理化檢驗兼有的綜合實驗室,
70、 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?血清中沉淀物的出現有許多種原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。 若欲去除這些絮
由于影響因素過多,細胞/組織培養中出現的一些問題往往很難分析并得到解決,因此被人戲稱為“黑色藝術”或“巫術”。本文列舉了一些動物細胞/組織培養中常見的問題及解決方法。 1.培養試劑的保存:血清:-5oC - -20oC 保存,避免反復凍融。培養基: 2oC – 8oC避光保存。
◇水解乳蛋白 水解乳蛋白為淡黃色粉末,雖易潮解結塊,但不影響使用。 不同批號和牌號質量有差異。水解乳蛋白是乳白蛋白經蛋白酶和肽酶水解后的產物,含有豐富的氨基酸。開始時它是專為猴腎細胞培養設計的,而實際上它對許多細胞系(株),如Hela細胞和原代細胞都是一種優良培養基。使用時用Hanks液配制成0
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
實驗方法原理 在核內,RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白,不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonuc
實驗方法原理 在核內,RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白,不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucUoprotein,hnRNP) 結合形成 hnRNP 復合物。實驗材料 HeLa S3 細胞抗體試劑、試
在核內,RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白,不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucUoprotein,hnRNP) 結合形成 hnRNP 復合物。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法
一般培養-保持胚胎干細胞處于未分化狀態 培養基 細胞復蘇 凍存細胞 明膠包被 細胞傳代 體外分化 培養基 包被有多聚鳥氨酸/纖維結合蛋白的培養板(使用或不使用蓋玻片) 體外分化方法 注:以下培養針對于小鼠的R1胚胎干細胞系,其它胚胎
由于影響因素過多,細胞/組織培養中出現的一些問題往往很難分析并得到解決,因此被人戲稱為“黑色藝術”或“巫術”。本文列舉了一些動物細胞/組織培養中常見的問題及解決方法。 1.培養試劑的保存:血清:-5oC - -20oC 保存,避免反復凍融。培養基: 2oC – 8oC避光保存。
由于影響因素過多,細胞/組織培養中出現的一些問題往往很難分析并得到解決,因此被人戲稱為“黑色藝術”或“巫術”。本文列舉了一些動物細胞/組織培養中常見的問題及解決方法。 1.培養試劑的保存: 血清:-5oC --20oC 保存,避免反復凍融。 培養基: 2oC – 8oC避
1、一般培養——保持胚胎干細胞處于未分化狀態 培養基細胞復蘇凍存細胞明膠包被細胞傳代 2 、體外分化 培養基:包被有多聚鳥氨酸/纖維結合蛋白的培養板(使用或不使用蓋玻片) 體外分化方法 注:以下培養針對于小鼠的R1胚胎干細胞系,其它胚胎干細胞的培養可
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被
1、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎?不見得!因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下,pH 8.0, 溫度37 ℃其作用能力最強。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前,一
1、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎?不見得!因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下,pH 8.0, 溫度37 ℃其作用能力最強。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前,一
細胞培養所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒 清洗 在組織細胞培養中,體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物,上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質,均能影響培養細胞的生長。因此對新使用玻璃器 皿和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗,且要根據器皿的組成材料不同,選擇不同 的清
化學試劑不像食品和藥品有嚴格的保質期,化學試劑還沒一個保質期的具體要求和界限,這與化學試劑的保質期受多方面因素影響有關;但主要是因其性質和應用而變化的。化學試劑是進行化學研究、成分分析的相對標準物質,是化學實驗課程重要的消耗性物資,廣泛用于物質的合成、分離、定性和定量分析。試劑的有效日期是影響實驗結
化學試劑是進行化學研究、成分分析的相對標準物質,是化學實驗課程重要的消耗性物資,廣泛用于物質的合成、分離、定性和定量分析。試劑的有效日期是影響實驗結果準確性的重要因素。在實際使用過程中,人們總是習慣于用生產日期來判斷化學試劑的有效性,其實大謬不然。化學試劑不像食品和藥品有嚴格的保質期,化學試劑還
實驗概要磺胺類藥物是抗菌藥,被廣泛應用于動物和人,但常常造成藥物殘留,各種檢測藥物殘留的方法已經被應用。本試驗利用酶聯免疫吸附方法,檢測磺胺類藥物的濃度,為實際應用提供參考。主要試劑150ml甲醇,50ml三甲基硅烷,500ml乙酸乙酯,500ml飽和碳酸鈉,80ml飽和氯化鈉,100ml 4M
一、細胞培養基礎和步驟細胞培養基大全細胞原代培養步驟細胞傳代培養步驟二、細胞培養常見問答1、加到培養基中的血清 必須滅活嗎?答:不是必須的,看做什么實驗了。2、四季青胎牛血清滅活是56 ℃30分鐘嗎?答:如果用于培養大多數的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子
細胞培養所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒清洗在組織細胞培養中,體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物,上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質,均能影響培養細胞的生長。因此對新使用玻璃器 皿和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗,且要根據器皿的組成材料不同,選擇不同 的清洗方法。玻璃器皿的清
小鼠神經干細胞(C17.2)細胞接受后的處理:1) 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下,同時給細胞拍照各2
細胞培養常見問答 1、加到培養基中的血清 必須滅活嗎? 答:不是必須的,看做什么實驗了。 2、四季青胎牛血清滅活是56 ℃30分鐘嗎? 答:如果用于培養大多數的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子 。但是如果用于培養一些表面具
6.4.1.3 對實驗室自制的培養基即實驗室制備各別成分培養基,實驗室應有培養基質 量控制程序。該程序包括培養基的性能測試、實驗室內部的配制規范等,以監控基礎 材料的質量,目的是保證培養基驗收合格,確保不同時期制備的培養基性能的一致性 和符合檢測的要求。 6.4.3.1 所有的
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
培養基是細胞培養中不可缺少的營養成分,但是最基礎的培養基卻給實驗者帶來了一系列的問題。別小看細胞培養,這里可蘊含著大學問。 1.怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件?ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多
為加強藥品生產監管,進一步指導和規范藥品生產企業科學系統地開展除菌過濾技術及應用、無菌工藝模擬試驗,國家藥品監督管理局組織制定了《除菌過濾技術及應用指南》,作為實施《藥品生產質量管理規范(2010年修訂)》的指導性文件,現予發布,自2018年10月1日起施行。 特此通告。 附件:除菌過濾技術
培養基是細胞培養中不可缺少的營養成分,但是最基礎的培養基卻給實驗者帶來了一系列的問題。別小看細胞培養,這里可蘊含著大學問。 1.怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件? ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。
26、PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別? PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白質的單克隆抗體生產培養基。如果作為雜交瘤生產培養基使用,PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是雜交瘤生產培養