細胞培養（cellculture）的一些常見問題與解答1
1、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++， Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0， 溫度37 ℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定要用D-Hank's液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶，以便于將含血清的培養基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為：（1）0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA。（2）0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA。（3）0.25%胰蛋白酶。溶液pH8.0～9.0，使用D-Hank's液配制。多數細胞傳代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。2、液體培養基中谷氨酰胺的作用，及使用方法幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質，在缺少谷氨酰胺時，細胞生......閱讀全文
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答1
1、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++， Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0， 溫度37 ℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答1
1、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++， Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0， 溫度37 ℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答2
6、血清的有關問題：新生牛血清：新出生牛5天內取血制成小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：（1）特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10EU，血紅蛋
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答2
6、血清的有關問題：新生牛血清：新出生牛5天內取血制成小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：（1）特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10EU，血紅蛋
細胞培養常見問題與解答1
1.為什么要熱滅活血清？加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。2.如何用臺盼蘭計數活細胞？用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200－2000個/毫升，在0
293細胞培養(cell－culture)技術
1、293細胞明顯適應酸性環境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長, 換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養基。2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，
細胞培養常見問題與解答4
22.在High Five無血清培養基中去污劑的濃度是多少？ High Five無血清培養基中去污劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。 23.High Five細胞用多大的密度凍存？ 3.0x10E6 ce
細胞培養常見問題與解答3
15.如何檢測內毒素(熱源)水平？ LAL（Limulus Amebocyte Lysate）試驗是可用的最敏感和特異的檢測細菌內毒素的方法。Levin和Bang 發現細菌可引起鱟（Limulus polyphemus）血管內的凝集作用。內毒素啟動一個細胞內酶原系統（絲氨酸蛋白酶級
細胞培養常見問題與解答2
8.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。9.為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀？GIBICO的胎牛血清 沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白
植物細胞培養（plant－cell－culture）技術概述
植物細胞培養技術就是為了某種目的而在細胞水平上對離體植物細胞或原生質體進行的一系列生物工藝學操作。它包括分離、培養、再生以及一系列相關的操作。就有用化合物的生產來說，它主要是指在無菌條件下通過懸浮培養植物細胞生產有用化合物的過程。理論與技術基礎：植物細胞全能性、微生物液體深層發酵系統、遺傳工程
原代神經細胞培養方法－Neuron－Cell－Culture
1. Preparation of coverslips1.1- Mass cultureOur standard mass cultures are plated on astrocytes.??Those, in turn, are plated on glass coverslips pre-
Maintenance－of－Cell－Culture
Maintenance of Cell Culture Author:?Nanci Donacki Source:?Contributed by Nanci Donacki Date Added:?Tue May 14 2002
Bacterial－cell－culture
Materials Glass culture tubes with metal caps and labels Growth medium, from media room or customized Glass pipette tubes Parafilm Equ
細胞培養的八個常見問題與解答(FAQ)
1 冷凍管應如何解凍？ 取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。 2 細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DM
細胞培養常見問題解答
1.如何選用特殊細胞系培養基？?培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。??2.何時須更換培養基？?視細胞生長密度而定， 或遵照細胞株基本數據上之更換時間，按時更
細胞培養板的選擇與常見問題解答（一）
細胞培養板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根據材質的不同有Terasaki板和普通細胞培養板。具體選擇時根據培養細胞的類型、所需培養體積及不同的實驗目的而定。（1）平底和圓底（U型和V型）培養板的區別和選擇：貼壁細胞一
細胞培養板的選擇與常見問題解答（二）
(4)細胞分布不均及解決辦法問：我的細胞接種培養板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊？我看園子里有的戰友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質量問題啊？答：請問你的細胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養板？如果是后者，而且是轉圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少
細胞凍存常見問題與解答FAQ1
細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO？除少數特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。2、可否使用
Cell－Culture－Media－and－Solutions
Cell Culture Media and Solutions Dec. 18, 1990 R. Veile Antimycotic/antibiotic media: To 1 liter of sterile RPMI 1640 with 2mM L-gl
Cell－Culture－Media－and－Solutions
Antimycotic/antibiotic media: To 1 liter of sterile RPMI 1640 with 2mM L-glutamine, add: 165.0 ml fetal bovine serum, heat inactivated 12.0 m
Cell－Suspension－Culture－of－Arabidopsis
實驗概要 Cell Suspension Culture of Arabidopsis? 主要試劑 10% (v/v) Household Bleach Callus Induction Medium? ? ? ?Gamborg's B5 Basal Medium? ? ? ?0.5
ES－Cell－Culture－and－Manipulation
MediaHigh glucose DMEM (-pyruvate, -glutamine)20% Heat-inactivated Fetal calf serum (can vary by cell type, be sure!!)1X l-glutamine1X Penicillin/stre
Trabecular－cell－monolayer－culture
Originally described in 1979 and more recently modified by Stamer et al primary trabecular monolayer cell culture has been a cornerstone for inves
stem－cell－culture－protocol
實驗概要stem cell culture protocol主要試劑cell culture supplies and reagentssEnvironment: cell culture requires a sterile environment, so it needs a separat
細胞培養常見問題解答（二）
11 欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速?欲回收動物細胞， 其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘， 過高之轉速， 將造成細胞死亡。12 細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生
細胞培養常見問題解答（三）
21 偵測出細胞株有支原體污染時， 該如何處理?直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細胞株。22 CO2 培養箱之水盤如何保持清潔?定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。23 為何培養基保存于4 °C 冰箱中，顏色會偏暗紅色， 且pH值會越來越偏堿性?培養基保存于4 °C 冰箱中，
細胞培養常見問題解答（一）
1 冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后， 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。2 細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO?除少數特別注明對D
細胞培養常見問題解答（二）
16 細胞欲冷凍保存時， 細胞冷凍管內應有多少細胞濃度?冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial， 融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。17 應如何避免細胞污染?細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室
細胞培養常見問題解答（四）
另：這里補充一下培養用品的消毒，供參考：細胞培養的最大危險是發生培養物的細菌，真菌和病毒等微生物的污染，污染主要是由于操作者的疏忽而引起，常見的原因有操作間或周圍空間的不潔，培養器皿和培養液消毒不合格或不徹底，由于有關培養的每個環節的失誤均能導致培養失敗，故細胞培養的每個環節都應嚴格遵守操作常規，防
細胞培養常見問題解答（一）
1 冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后， 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。2 細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO?除少數特別注明對D