軟瓊脂克隆形成實驗的基本步驟
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形成率弱，轉化細胞系強；正常細胞克隆形成率弱，腫瘤細胞強。并且克隆形成率與接種密度有一定關系，做克隆形成率測定時，接種細胞一定要分散成單細胞懸液，直接接種在碟皿中，持續一周，隨時檢查，到細胞形成克隆時終止培養。基本步驟：(1)取對數生長期細胞，用0.25%胰蛋白酶消化并輕輕吹打，使之成為單細胞，作活細胞計數，用含20%胎牛血清的DMEM培養液調整細胞密度至1×106細胞/L。然后根據實驗要求作梯度倍數稀釋。(2)用蒸餾水分別制備出1.2%和0.7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在40℃中不會凝固。(3)按1:1比例使1.2%......閱讀全文
軟瓊脂克隆形成實驗的基本步驟
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
軟瓊脂克隆形成實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映了其惡性程度。
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
軟瓊脂克隆形成實驗
軟瓊脂克隆形成實驗可用于：（1）細胞分化的基礎研究；（2）臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。實驗方法原理軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映
軟瓊脂克隆形成實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映了其惡性程度。
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
軟瓊脂克隆化的方法
軟瓊脂克隆化借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長，而達到克隆化，具體操作如下：1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×1
單克隆抗體技術：克隆化(有限稀釋法、軟瓊脂克隆化、...
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
單克隆抗體的克隆化方法軟瓊脂平板法介紹
軟瓊脂克隆化借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長，而達到克隆化，具體操作如下：1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×1
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養實驗
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則不能形成集落。HL-60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養基中形成集落。二甲
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養實驗
在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則不能形成集落。實驗方法基本方案 實驗方法原理 HL-60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養基中形成集落。二甲基亞砜是一種細胞分化誘導劑，經二甲基亞砜
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養實驗
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養實驗可用于：（1）細胞分化的基礎研究；（2）臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。實驗方法原理在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則不能形成集落。HL-60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激
軟瓊脂法
軟瓊脂法是一種克隆化的方法。克隆化是指使單個細胞無性繁殖而獲得該細胞團體的整個培養過程。
細胞單克隆的分離方法（有限稀釋法與軟瓊脂法）
一、有限稀釋法材料：a、96孔細胞培養板等；b、HT培養基；c、活力強的雜交瘤細胞；d、小鼠腹腔細胞。方法：a、制備小鼠腹腔細胞。同“細胞融合”一節中的方法。b、制備待克隆的雜交瘤細胞懸液，用含20%血清的HT培養基稀釋至每毫升含2.5、15和50個細胞三種不同的稀釋度。c、按每毫升加入5×104-
定位候選克隆的基本步驟
定位候選克隆包括三個基本步驟：基因組定位、候選cDNA的獲得、全長及功能分析。本文即對此策略的發展和應用作一概要介紹。基因組定位新發展起來的，尤其在分離腫瘤易感基因中常用的方法是用PCR方法檢測多樣本的雜合性丟失(LOH)或純合性丟失的高發頻率區，從而獲得疾病候選基因定位。體細胞抑癌基因的失活是導致
貼壁細胞的克隆形成實驗
實驗方法原理用不同濃度的實驗試劑將細胞處理24h 。經胰蛋白酶消化后，以低細胞密度接種，溫育1～3 周，染色后（見彩圖6a,e) 計集落數（圖22.1)。實驗步驟材料無菌生長液D-PBSA0.25%粗制胰蛋白酶待測化合物配制成最大使用濃度的10倍，溶于無血清生長液中；檢査試驗溶液的pH 和滲透壓，若
基因克隆的基本步驟有哪些
基因克隆的基本步驟流程如下：一、目的DNA片段的獲得：DNA克隆的第一步是獲得包含目的基因在內的一群DNA分子，這些DNA分子或來自于目的生物基因組DNA或來自目的細胞mRNA逆轉錄合成的雙鏈 cDNA分子。由于基因組DNA較大，不利于克隆，因此有必要將其處理成適合克隆的DNA小片段，常用的方法有機
瓊脂中克隆培養
實驗方法原理 溫度高時瓊脂呈液態，但在37℃ 時成凝膠狀態，細胞懸浮在溫暖的瓊脂凝膠培養基中，待瓊脂形成凝膠后進行培養，形成散在集落，很容易分離。實驗材料 Noble瓊脂Difco胎牛血清儀器、耗材 兩倍濃度培養基生長培養基無菌超純水無菌錐形瓶吸管通用容器培養皿水浴三角瓶托盤電子細胞計數儀本生煤氣噴
瓊脂中克隆培養
實驗方法原理溫度高時瓊脂呈液態，但在37℃ 時成凝膠狀態，細胞懸浮在溫暖的瓊脂凝膠培養基中，待瓊脂形成凝膠后進行培養，形成散在集落，很容易分離。實驗材料Noble瓊脂 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?D
瓊脂中克隆培養
實驗方法原理溫度高時瓊脂呈液態，但在37℃ 時成凝膠狀態，細胞懸浮在溫暖的瓊脂凝膠培養基中，待瓊脂形成凝膠后進行培養，形成散在集落，很容易分離。實驗材料Noble瓊脂Difco胎牛血清儀器、耗材兩倍濃度培養基生長培養基無菌超純水無菌錐形瓶吸管通用容器培養皿水浴三角瓶托盤電子細胞計數儀本生煤氣噴燈實驗
瓊脂中克隆培養
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 溫度高時瓊脂呈液態，但在37℃ 時成凝膠狀態，細胞懸浮在溫暖的瓊脂凝膠培養基中，待瓊脂形成凝膠后進行培養，形成散在集落，很容易分離。 實驗材料
軟瓊脂培養的概念和原理
I.Macpherson等于1964年首創的培養法，這一培養法選擇性地使已轉化的細胞進行增殖，而抑制正常細胞的增殖。通常是將含有0.5%瓊脂的培養基作為營養層鋪在底部，然后再將含有細胞的少量軟瓊脂培養基（瓊脂量約0.3%）倒在上面。正常細胞仍停留在接種時的狀態，幾乎不進行增殖，但已轉化的細胞則以半浮
方案22.3－貼壁細胞的克隆形成實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用不同濃度的實驗試劑將細胞處理24h 。經胰蛋白酶消化后，以低細胞密度接種，溫育1～3 周，染色后（見彩圖6a,e) 計集落數（圖22.1)。 實驗步驟
細胞克隆實驗操作的具體步驟
一、細胞復蘇將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5
瓊脂糖核酸電泳標準實驗步驟
瓊脂糖核酸電泳1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；2.根據欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內，定量加入電泳緩沖液（一般20~30 ml）；3.放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染
免疫瓊脂雙向擴散實驗具體步驟
瓊脂擴散（ agar diffusion ）為可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠中所呈現的一種沉淀反應。當對應的抗原、抗體在半固體瓊脂終相遇，且二者比例適當時，便出現可見的白色沉淀線，這組沉淀線是一組抗原、抗體的特異性復合物。當瓊脂中有多組不同的抗原、抗體存在時，便各自依其擴散速度的差異，再適當的部位形成獨
小量細菌克隆的雜交法篩選實驗步驟
小量細菌克隆的雜交法篩選實驗步驟，一、材料1. 培養基含有適當抗菌素的 LB 或 SOB 瓊脂板。含有氯霉素的 LB 或 SOB 瓊脂板。2. 專用設備(1) 硝酸纖維素膜（Millipore HAWP，或類似產品）或尼龍膜。濾膜不必是無去污劑污染或無菌。(2) 注射器（3cc )，針頭（18 號）
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養和測定
?一、原理??? 在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則不能形成集落。HL一60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養基中形成集落。二甲基亞砜是一種細胞分化誘導劑，經二甲基亞砜處理后的HL一