蛋白質沉淀技術（三）
3.策略 C 的基本操作程序(1) 配制 10%(V/V)[5%(m/V)] 的 PEI 儲存液。PEI(WV) 常以 50%(m/V) 的黏稠液體狀態存在（來自于 MPBiochemicals 的 PEI, 其相對分子質量 Mw=50000?100000, 也可采用其他來源，如 Sigma 和 Aldrich，Mw=750000)。取 10 mLPEI, 用雙蒸水 H2O 稀釋至 70 mL，并以濃鹽酸 (3.8?4.0 mL) 調節 pH 至 7.9。最后以雙蒸水 H2O 定容至終體積為 1 〇〇 niL。儲存液在冷室或室溫下是穩定的。應該注意的是, 有些公司提供的 PEI 溶液已經用雙蒸水 H2O 進行 I:1 稀釋, 以降低溶液的黏稠度, 有利于溶液的配制。其濃度僅為 25%(m/\〇。(2) 在 30 mL 含有 50 mmol/LTris-Ha(pH7.9)、5% 甘油、0.1 mmol/LEDT......閱讀全文
蛋白質沉淀技術（三）
3.策略 C 的基本操作程序(1) 配制 10%(V/V)[5%(m/V)] 的 PEI 儲存液。PEI(WV) 常以 50%(m/V) 的黏稠液體狀態存在（來自于 MPBiochemicals 的 PEI, 其相對分子質量 Mw=50000?100000, 也可采用其他來源，如 Sigma 和
蛋白質沉淀技術
蛋白質沉淀技術 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 一、AS 沉淀 1.原理 雖然有些其他鹽類也可以用做沉淀劑，但是 AS
蛋白質沉淀技術
在過去的 100 年里，雖然人們已經使用過多種不同的沉淀方法，但是 AS 沉淀一直都得到了最廣泛的應用，尤其對于酸性蛋白質。此外，PEI 沉淀的應用也正日益普及。接下來，將會對這兩種方法進行詳細的討論, 隨后對其他幾種沉淀方法做簡單概述，并針對沉淀過程中沉淀的處理和純化效率的最大化提出一般性建議。實
蛋白質沉淀技術（二）
(4) 小心倒出上清液，并測量其體積。依據表 20.1 所示的以百分飽和度從低到高的順序加入 AS 以確定所需 AS 的質量。繼續伴以快速的攪拌并緩慢加入 AS，以避免局部形成較高鹽濃度，之后靜置 30 min, 使其形成沉淀。(5) 如步驟 (3) 中所示進行離心。盡量去除上清液, 若之前已經仔細
蛋白質沉淀技術（一）
一、AS 沉淀1.原理雖然有些其他鹽類也可以用做沉淀劑，但是 AS 的特點突出，故而最具有應用價值。AS 可很好地穩定蛋白質的結構、可溶性極好、相對價廉、純物質容易獲得，且 25℃ 時其飽和溶液的密度 (4.1InoVU1O=I.235 g/cm3) 低于另一種鹽析劑磷酸氫二鉀（3mol/L，(0=
Porviar－P3蛋白質沉淀板獨特的蛋白質沉淀技術
Porvair Sciences蛋白質沉淀板（P3），也稱為蛋白質碰撞板。專-利設計，樣品制備之前有效去除不需要的蛋白質。?P3微孔板具有良好的流速、低非特異性結合和出色的去除效率。此外，孔板的清潔系統可確保工作流程中無泄漏。?P3蛋白質沉淀技術如何工作？P3板通過添加諸如甲醇或乙腈之類的溶劑來使溶
蛋白質濃度分析實驗——三氯乙醇沉淀
實驗材料樣品試劑、試劑盒TCA緩沖液丙酮儀器、耗材離心機實驗步驟1. 對 500 μl 的樣品（至少 5 μg/ml），加 50 μl 的 TCA ( 100% ) 并振蕩。2. 把樣品置于冰上 30 分鐘（或者置于冷藏箱中 15 分鐘），然后 10000 g 離心 5 分鐘。3. 傾去上清液并仔細
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗——三氯醋酸沉淀法
實驗材料含蛋白質的樣品試劑、試劑盒100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）實驗步驟1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30 min （或在冷凍
蛋白質沉淀濃縮方法
在生化制備中，沉淀主要用于濃縮目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制備中常用的有以下幾種沉淀方法和沉淀劑： 1．鹽析法 多用于各種蛋白質和酶的分離純化。 2．有機溶劑沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化，有時也用于蛋白質沉淀。 3．等電點沉淀法 用于氨基酸、
什么是蛋白質沉淀？
蛋白質沉淀(precipitation)是蛋白質分子凝聚從溶液中析出的一種現象，變性蛋白質一般易于沉淀，但在一定的條件下，變性的蛋白質也可不發生沉淀。蛋白質沉淀常用的方法有鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、生物堿試劑與某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。
蛋白質的沉淀方法及常見沉淀劑
名稱??上清液?0.5ml血漿中不同沉淀劑使蛋白沉淀的%?PH值?0.20.4?0.60.8?1.0?1.5??2.03.0???4.0?10%三氯醋酸?1.4-2.0?99.7?99.3?99.6?99.5?99.5?99.7?99.8?99.8?99.8?6%高氯酸?
蛋白質沉淀方法有機溶劑沉淀法介紹
多用于生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化 有機溶劑的沉淀機理是降低水的介電常數，導致具有表面水層的生物大分子脫水，相互聚集，最后析出。 該法優點在于： 1）分辨能力比鹽析法高，即蛋白質或其它溶劑只在一個比較窄的有機溶劑濃度下沉淀； 2）沉淀不用脫鹽，過濾較為容易； 3）在生化制備中應
蛋白質沉淀方法等電點沉淀法介紹
此法單獨應用較少，多與其它方法結合使用 兩性電解質分子上的凈電荷為零時溶解度最低，不同的兩性電解質具有不同的等電點，以此為基礎可進行分離。如工業上生產胰島素時，在粗提液中先調PH8.0去除堿性蛋白質，再調PH3.0去除酸性蛋白質。利用等電點除雜蛋白時必須了解制備物對酸堿的穩定性，不然盲目使用十
簡述蛋白質沉淀的沉淀原理和定性分析
沉淀原理 蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉淀(precipitation)，變性蛋白質一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質也可不發生沉淀。 定性分析 蛋白質所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩定因素，即顆粒表面的水化層和電荷。若無外加條件，不致互相凝集
蛋白質沉淀方法鹽析法
在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同，故可用于對混和蛋白質組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白，飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出來，鹽析沉
蛋白質提取與純化技術（三）
一、樣品的濃縮生物大分子在制備過程中由于過柱純化而樣品變得很稀，為了保存和鑒定的目的，往往需要進行濃縮。常用的濃縮方法的：1、減壓加溫蒸發濃縮通過降低液面壓力使液體沸點降低，減壓的真空度愈高，液體沸點降得愈低，蒸發愈快，此法適用于一些不耐熱的生物大分子的濃縮。2、空氣流動蒸發濃縮 空氣的流動可使液體
三氯乙酸沉淀實驗
試劑、試劑盒 丙酮分子量標準TCA+DOC加與不加2-巰基乙醇的樣品緩沖液儀器、耗材 聚丙烯微量離心管實驗步驟 材料與設備丙酮（Aldrich Chemical Co.Inc.)注：保存于室溫。不能放入冰箱。聚丙烯微量離心管 (1.5-ml)注：1. 用前將離心管洗干凈。2. 分析極少量蛋白質（
三氯乙酸沉淀實驗
三氯乙酸沉淀實驗主要用于（1）蛋白質的沉淀純化；（2）試樣化合物的提取。實驗方法原理1. 三氯乙酸為酸性化合物，是陰離子型沉淀劑，在低于蛋白質等電點的PH值時，酸根與帶正點荷的蛋白質形成不溶性鹽而沉淀；2. 作為蛋白質變性劑使蛋白質構象發生改變，暴露出較多的疏水性基團， 使之聚集沉淀。3. 隨著蛋白
三氯乙酸沉淀實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1. 三氯乙酸為酸性化合物，是陰離子型沉淀劑，在低于蛋白質等電點的PH值時，酸根與帶正點荷的蛋白質形成不溶性鹽而沉淀；2. 作為蛋白質變性劑使蛋白質構象發生改變，暴露出較多的疏水性基團， 使之聚集沉淀。3. 隨著蛋白質分子量的增
蛋白質沉淀方法重金屬鹽沉淀法簡介
常用于搶救誤服重金屬鹽中毒的病人 許多有機物質包括蛋白在內，在堿性溶液中帶負電荷，能與金屬離子形成沉淀。根據有機物與它們之間的作用機制，可分為羧酸、胺及雜環等含氮化合物類，如銅鋅鎘；親羧酸疏含氮化合物類，如鈣鎂鉛；親硫氫基化合物類，如汞銀鉛。蛋白質-金屬離子復合物的重要性質是它們的溶解度對溶液
免疫共沉淀技術
免疫沉淀可用于定位甲基化或轉錄因子結合的位置等DNA變化，但可能需要與假抗體進行斗爭。盡管ChIP-seq、DIP-seq和相關技術可以提供全基因組測定的相關信息，但它們并非總是有效。染色質免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation, ChIP）或DNA免疫沉淀（DNA
乙醇沉淀蛋白質低溫可逆嗎
低溫短時間可逆，水化膜被奪取，蛋白質表面電荷減少，才出現的蛋白質析出。但是乙醇與蛋白質接觸過久后，會出現不可逆變性。
乙醇沉淀蛋白質原理和操作
鹽析法——多用于各種蛋白質和酶的分離純化在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出,這種方法稱為鹽析.常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等.各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同,故可用于對混和蛋白質組分的分離.例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白,飽和硫酸銨可以使血清
乙醇沉淀蛋白質的實驗目的
純化蛋白，或使蛋白變性,或去除蛋白都有可能。
乙醇沉淀蛋白質原理和操作
鹽析法——多用于各種蛋白質和酶的分離純化在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出,這種方法稱為鹽析.常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等.各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同,故可用于對混和蛋白質組分的分離.例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白,飽和硫酸銨可以使血清
乙醇沉淀蛋白質低溫可逆嗎
低溫短時間可逆，水化膜被奪取，蛋白質表面電荷減少，才出現的蛋白質析出。但是乙醇與蛋白質接觸過久后，會出現不可逆變性。
蛋白質沉淀的方法有那些
沉淀蛋白質的方法主要有：鹽析、有機溶劑、生物堿試劑、重金屬鹽、加熱凝固。分析如下：（1）鹽析破壞蛋白質的水化膜和電荷，采用不同濃度鹽可將不同的蛋白質分段析出，鹽析的蛋白質不變性，鹽析作用是可逆的。（2）有機溶劑可破壞蛋白質的水化膜，若調節pH=pI，則更易沉淀。低溫操作，快速分離溶劑不會使蛋白質變性
蛋白質沉淀的方法有哪些
蛋白質沉淀的定義：蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉淀(precipitation)，變性蛋白質一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質也可不發生沉淀。蛋白質沉淀的方法：鹽析法?——多用于各種蛋白質和酶的分離純化；在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體
無水乙醇沉淀蛋白質的原理
破壞蛋白質的水化膜，蛋白質在水中的溶解度下降；當然也不排除使蛋白質變性（酒精消毒的原理）。
鹽析法沉淀蛋白質的原理
鹽析法沉淀蛋白質的原理是：降低蛋白質的電常數，調節蛋白質溶液的等電點，與蛋白結合形成不溶性鹽，使蛋白質溶液呈電中性，破壞了水化膜，從而會使得蛋白質凝聚，最終從溶液中析出。蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用中性鹽加入蛋白質溶液，