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實驗方法原理 M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌至周圍培養液中的病毒顆粒中制備的，首先在高鹽存在下，絲狀病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀濃縮，然后用酚抽提釋放單鏈 DNA，最后乙醇沉淀收集單鏈 DNA。實驗材料 M13 單鏈噬菌體載體感染 M13 噬菌體的大腸桿菌培養物未感染的大腸桿菌的培養試劑、試劑盒 氯仿乙醇酚聚乙二醇 8000乙酸鈉蔗糖凝膠上樣緩沖液TE儀器、耗材 瓊脂糖凝膠多管振蕩器實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液氯仿乙醇酚聚乙二醇 8000 ( 20%，m/V，PEG 8000 ) 溶于 2.5 mol/L NaCl。乙酸鈉（3 mol/L, pH 5.2)蔗糖凝膠上樣緩沖液TE ( pH 8.0)2. 凝膠瓊脂糖凝膠（1.2%) 懸于 0.5 X TBE，含 0.5 μg/ml 溴化乙錠3. 核酸和寡核苷酸重組 DNA 的 M13 單鏈噬菌體載體4. 專用設備多管振蕩器（可選）5. 載體和菌株感染 M13......閱讀全文
試劑、試劑盒 乙酸銨 ATP 乙醇 甘油 蒸餾水 IPTG Mg
下面的方案描述了鳥槍法測序的起始步驟，從靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌體載體構建 DNA 片段文庫，也包括斷裂靶 DNA 的兩種方法--超聲法和噴霧法，以及用 DNA 聚合酶修復片段末端的技術要點。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。試劑、
這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這個方案主
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 乙醇 氯化鈉 苯酚 醋酸鈉 TE 瓊
實驗方法原理 試劑、試劑盒 甲酸銨 寡核苷酸雜交溶液 寡核苷酸預雜交
本方案主要描述了篩選噬菌體 M13 重組克隆，而一種選擇方案是篩選含噬菌粒的細菌克隆。最后也介紹了用 PCR 檢測突變體的方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗方法原理試劑、試劑盒甲酸銨寡核苷酸雜交溶液寡核苷酸預雜交液TE噬菌體T4多核
實驗方法原理 雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至
實驗方法原理 試劑、試劑盒 甲酸銨寡核苷酸雜交溶液寡核苷酸預雜交液TE噬菌體T4多核苷酸激酶限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變寡核苷酸[γ-32P]ATP2XYT 頂層瓊脂和 2xYT 瓊脂平皿儀器、耗材 鈍端鑷子皮下注射用針頭（18 號）和印度墨水孵箱硝酸纖維素膜或尼龍膜真空烤箱68°C 水浴What
實驗方法原理 這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液乙醇氯化鈉苯酚醋酸鈉TE瓊脂糖凝膠原始的重組 M13 噬菌體單鏈 DNAYT 培養基儀器、耗材 Corex 離心機管巴斯德滴管柱層析樹脂大腸桿菌菌株 CJ236大腸桿菌菌株 TG1JM109 或相當的菌株實驗步驟 材料緩沖液和溶液各種貯存液，緩沖液和試劑成分請參閱附錄 1。
雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌體的 DNA 片段不要大于 1000 堿基。而且，當用“正向”或“反向”通用測序引物進行 DNA 測序時，大片段的中心區域可
經典的 Kunfcel 寡核苷酸指導的誘變方法利用大腸桿菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特異地篩除去含尿嘧啶堿基的 DNA 的選擇性作用（請參考寡核苷酸誘變信息欄）。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩
實驗方法原理 這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時。實驗材料 大腸桿菌 F' 菌株M13 噬菌體原液
實驗方法原理 雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌體的 DNA 片段不要大于 1000 堿基。而且，當用“正向”或“反向”通用測序引物進行 DNA
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
噬菌粒巧妙地組合了質粒和絲狀噬菌體的特征。除了基本特征外，這些質粒通常是高拷貝數的，并帶有一個修飾后的絲狀噬菌體的主要基因間區。這個區域 ( 野生型為 508 bp)不表達蛋白，但含有全部的順式作用序列，該作用是病毒 DNA 合成起始和結束及噬菌體顆粒的形態發生必不可少的。本實驗來源「分子克隆實驗指
實驗方法原理 噬菌粒巧妙地組合了質粒和絲狀噬菌體的特征。除了基本特征外，這些質粒通常是高拷貝數的，并帶有一個修飾后的絲狀噬菌體的主要基因間區。這個區域 ( 野生型為 508 bp
實驗方法原理 在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。
基因克隆技術是分子生物學的核心技術，其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，用于深入分析基因的結構與功能，并可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。基因克隆的一項關鍵技術是DNA重組技術，它利用酶學方法將不同來源的DNA分子進行體外特異性切割，重新拼接組裝成一個新的雜合DNA分子。在此基礎上將
實驗方法原理 M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌至周圍培養液中的病毒顆粒中制備的，首先在高鹽存在下，絲狀病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀濃縮，然后用酚抽提釋放單鏈 DNA，最
實驗方法原理 噬菌粒巧妙地組合了質粒和絲狀噬菌體的特征。除了基本特征外，這些質粒通常是高拷貝數的，并帶有一個修飾后的絲狀噬菌體的主要基因間區。這個區域 ( 野生型為 508 bp)不表達蛋白，但含有全部的順式作用序列，該作用是病毒 DNA 合成起始和結束及噬菌體顆粒的形態發生必不可少的。實驗材料
實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌 試劑、試劑盒
試劑、試劑盒 dNTP 溶液 乙醇 外切核酸酶Ⅲ緩沖液 核酸酶 S1 停止反應混合液 酚
試劑、試劑盒 dNTP 溶液乙醇外切核酸酶Ⅲ緩沖液核酸酶 S1 停止反應混合液酚氯仿醋酸鈉外切核酸酶ⅢKlenow 混合物連接混合物核酸酶 S1 反應混合物限制性內切酶凝膠靶 DNA儀器、耗材 微量離心管或帶 U-型孔的微量滴定板水浴裝置實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液和試劑的成分清參閱附錄
逐步地從靶 DNA 的一端或另一端刪除多個寡核苷酸的嵌套式缺失突變方法被用來確定功能性順式調控元件的邊界，早先曾作為指導 DNA 測序的模板。該方法依賴于核酸酶，這些核酸酶均以可預測的方式消化 DNA, 其中外切核酸酶 HI 是目前最好的。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J.
實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌試劑、試劑盒 ATPPE1緩沖液PE2 緩沖液噬菌體 T4 DNA 連接酶噬菌體 T4 多核苷酸激酶大腸桿菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段M13 噬菌體通用測序引物含 4 種 dNTP 的 dNTP 溶液誘變的 M
DNA 片段的克隆需要合適的載體，載體或是質粒，或是噬菌體，或是病毒，通常大多經過人工改造[地的。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細胞內必須能自主復制，即必須具備復制原點；二是該載體必須具備適合的酶切位點，且這些酶切位點不在復制原點區域內。以上兩條，保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲
互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方
DNA片段的克隆需要合適的載體，載體或是質粒，或是噬菌體，或是病毒，通常大多經過人工改造[地的。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細胞內必須能自主復制，即必須具備復制原點；二是該載體必須具備適合的酶切位點，且這些酶切位點不在復制原點區域內。以上兩條，保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽隆