DNA序列測定的技術和策略
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿基出現在可變終止端的機會均等，因些上述每一組產物都是一些寡核苷酸混合物，這些寡核苷酸的長度由某一種特定堿基在原DNA全片段上的位置所決定。然后在可以區分長度僅差一個核苷酸的不同DNA分子的條件下，對各組寡核苷酸進行電泳分析，只要把幾組寡核苷酸加樣于測序凝膠中若干個相鄰的泳道這上，即可從凝膠的放射自影片上直接讀出DNA上的核苷酸順序。一Sanger雙脫氧鏈終止法 現行的邏終止法人加減法序列測定技術（Sacger和Coulson，1975）發展而來的。加減法首次引入了使用特異引物在DNA聚合酶作用下進行延伸反應、堿基特異性的鏈終止，以及......閱讀全文
DNA序列測定的技術和策略
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
DNA序列測定技術
DNA序列測定技術序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam－Gilbert DNA化學降解法測序策略 目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的
DNA序列測定技術
DNA序列測定技術序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam－Gilbert DNA化學降解法測序策略目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干
DNA序列和大規模DNA測序策略的探討（圖）
人類基因組計劃的核心內容之一是基因組測序。隨著人類基因組圖譜趨于完成，人類基因的 定位克隆、鑒定分析直至全基因組測序取得了突破性進展，測序策略的成熟、測序方法的改進、自動測序儀的廣泛應用、計算機數據分析系統的擴展以及測序分析能力的提高， 大大推進了大規模DNA測序的進程。第一節 DNA測序的基本方法
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定3
2．利用末端轉移酶和α-32P-ddNTP標記DNA的3ˊ-末端 在二價陽離子存在下，末端轉移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羥基末端，如果作為底物的核苷酸經過修飾（如ddNTP），則可以在DNA的3ˊ-OH上僅加入一個核苷酸。對于雙鏈DNA片段，亦存在DNA的兩側均被標記問題，可通過上述同
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定2
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法（雙脫氧鏈終止法）和Maxam（1977）提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都同樣生成相互獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組核苷酸都有共同的起點，卻隨機終止于一種（或多種）特定的殘基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，選用合適的DNA聚合酶進行測序反應也是保證測序質量的重要因素之一。常用于雙脫氧末端終止法測序的有幾種不同的酶： 1．大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger測序的酶。但通常會有兩個問題：①Klenow片段的持續合成能力較
DNA－序列分析技術
試劑、試劑盒 瓊脂糖TE 水飽和酚無水乙醇70％乙醇TEMED測序酶溴化乙錠儀器、耗材 電泳儀離心管離心機冰浴箱恒溫板DNA 測序儀
DNA－序列分析技術
DNA序列分析技術可用于：（1）分析物種的遺傳多樣性；（2）鑒定新的物種；（3）用于比較基因組學。實驗方法原理本節描述運用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自動DNA 測序儀進行雙鏈DNA 測序的方法。熱循環測序反應使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDe
DNA微序列技術
·?????????Protocols for Making Drosophila Arrays?(Stanford U.)Detailed protocol for making arrays including PCR Amplification of cDNAs for Printing,?
DNA－序列分析技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本節描述運用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自動DNA 測序儀進行雙鏈DNA 測序的方法。熱循環測序反應使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDeoy TM Terminator
測序技術及DNA序列測定結果分析
實驗概要?在分子生物學研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等（1977）發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam和 ? Gilbert（1977）發明的化學降解法。這二種方法在原理上差異很大，但都是根據核苷酸在某一固定的點開始，隨機在某一個特定的
DNA自動序列測定試驗
[實驗原理]DNA 測序（DNA sequencing）是對DNA 分子的一級結構的分析。其基本原理是DNA 的復制反應體系中需要存在DNA 聚合酶、DNA 模板、寡核苷酸引物和dNTP，引物和模板退火形成雙鏈后，DNA 聚合酶在引物的引導下在模板鏈上沿3’→5’的方向移動，dNTP 按照堿
DNA序列分析技術2
3)電泳電極緩沖液 1 倍TBE（pH 值8.0）預電泳 30 分鐘至1 小時恒溫方式 測序膠板上夾蓋鋁恒溫板電泳溫度 50℃左右電泳條件 恒功率 90～110W電泳時間 2.5 小時至5 小時4)干膠制備和壓片電泳結束后取下膠板，用工具撬開玻璃板，使膠留在其中一塊板上。將裁剪好的新華3 號濾紙在膠
DNA序列分析技術1
物種的遺傳多樣性在本質上是DNA 一級序列的多樣性。近年來，隨著DNA 測序技術的迅速發展和日益普及，DNA 測序在遺傳多樣性的研究中正在起著越來越大的作用。本章將介紹目前在遺傳多樣性研究中常用的一種手動和一種全自動雙鏈DNA 測序方法。1.DNA 模板的制備在遺傳多樣性的研究中，由于樣本量一般都較
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列
[目的] 掌握雙脫氧鏈終止法測定DNA序列的原理與方法[原理]DNA聚合酶催化的DNA鏈延伸是在3’-OH末端上進行的。由于2’，3’-雙脫氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脫氧而失去游離-OH，當它參入到DNA鏈后，3’-OH末端消失，使DNA鏈的延伸終止。本實驗根據此原理，將待測DNA片段插
DNA序列測定技術（Sanger雙脫氧鏈終止法與Maxam－Gilbert－...
選擇隨機定向測定策略的影響因素（1）計算設備 任何大規模的測序計劃將在很大程度上依賴計算機程序對原始序列資料進行分類、整理和排列（Staden，1986）。在權衡隨機法的利與弊之時，必須將與適當的計算機設備進行聯機的問題放到壓倒一切的位置上來考慮。如果這些設備尚無從適當的計算機設備進行聯機的問題
PCR技術（十五）：個體配子DNA序列的PCR分析
高等生物遺傳圖譜的構建依賴于選擇性雜交后代的分析或者通過家系分析法來計 算連鎖關系。對人類而言僅后者是可行的。使用長度多態性限制片段（RFLPS）在構 建人連鎖圖譜方面已取得長足的進步。為了對帶有與已知表現型相關的RFLP標記的基 因進行定位，首先得建立間隔約10CM的遺傳標記束（平均1CM等于1％
表達基因的克隆策略與分離表達基因序列的技術方法
人類基因組計劃的主要任務之一就是要從大片段基因組區域或整條染色體DNA 上鑒定出基因表達序列(gene expressed sequences)或轉錄單位(transcription units)。在人類基因組30億個堿基對中，發生轉錄的表達序列(即基因)僅占總序列的3～5％。基因組中絕大部
DNA序列分析電泳儀技術參數
電泳儀電源按電壓分為高壓1500～5000V、中壓500～1500V、低壓500V以下三種；按電流分為大電流500mA～2000mA、中電流100～500mA、小電流100mA以下三種；按功率分為大功率200～400W、中功率60～200W、小功率60W以下三種。基本參數外形尺寸（L×W×D）：47
DNA序列家族的概念
中文名稱DNA序列家族英文名稱DNA sequence family;sequence family定 義DNA分子變性后可復性形成穩定的堿基配對雙鏈分子的一組序列。序列之間有很高的同源性。應用學科遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）
重復[DNA]序列的概念
中文名稱重復[DNA]序列英文名稱repetitive [DNA] sequence定 義DNA分子中重復出現的核苷酸序列。應用學科遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）
端粒DNA－序列的概念
端粒DNA 序列(telomere DNA sequence,TEL)端粒的功能是與端粒酶結合，完成染色體末端復制。端粒酶以其自身的RNA 為模板，在染色體端部添加上端粒的重復序列。作為模板的RNA 比較短，含有1.5 個端粒重復單元。端粒結構還能防止染色體融合及降解。端粒是保護DNA分子中的基因的
DNA序列測定技術（Sanger雙脫氧鏈終止法與Maxam－Gilbert...4
序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam－Gilbert DNA 化學降解法測序策略目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的
DNA序列測定技術（Sanger雙脫氧鏈終止法與Maxam－Gilbert...2
二、Maxam－Gilbert DNA 化學降解法與包括合成反應的鏈終止技術不同，Maxam-Gilbert法要對原DNA 進行化學降解。這一方法是在體外研究lac阻抑制與lac操縱基因相互作用時醞釀發展起來的。時至今日，可以探測DNA 構象的蛋白質－DNA 相到作用，仍然是Maxam- G
DNA序列測定技術（Sanger雙脫氧鏈終止法與Maxam－Gilbert...3
３．DNA 聚合酶通常用于雙脫氧法序列測定的有幾種不同的酶，其中包括大腸桿菌DNA 聚合酶I的Klenow片段（Sanger等，1977），反轉錄酶（見文獻，如Mieredorf和Prfeffer，1987）經過修飾消除了 3'→5'外節酶活性的T7噬菌體DNA 聚合酶（
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
實驗材料 樣品試劑、試劑盒 雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀器、耗材 加濕盒熱循環儀實驗步驟 1. ?將載有固定樣品的載玻片置105℃加熱塊上5~120 s。?2. ?載玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室溫溫育過夜，以滅活內源性過氧化物酶活性，然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術，就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。實驗材料樣品試劑、試劑盒雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列實驗原理、操作步驟和儀器...2
3．制備電泳凝膠及電泳(1)制備膠模：取雙塊制膠玻板，先用泡沫海綿沾“洗潔凈”液仔細擦洗，用水徹底淋洗，干燥后繼用酒精清洗，晾干，再用硅烷劑(repel- silane)將玻板的—面擦一遍，蒸餾水淋洗，干燥 (注意：清洗時應戴一次性手套操作)。將其中一塊玻板平置臺上(硅烷處理過的—面朝上)，兩側各放
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列實驗原理、操作步驟和儀器...3
3．單鏈模板的分離(1)沉淀M13：在上述M13培養物上清中，加入0.2倍體積的3.5mol/L醋酸銨/20%多聚乙二醇溶液，顛倒混勻數次，置冰浴30分鐘。離心15-30分鐘(11000g)可見白色噬菌體沉淀。小心除去上清液，可將試管倒置并吸去多余液體。(2)分離純化模板：向沉淀中加入TE緩沖液10