DNA自動序列測定試驗
[實驗原理]DNA 測序(DNA sequencing)是對DNA 分子的一級結構的分析。其基本原理是DNA 的復制反應體系中需要存在DNA 聚合酶、DNA 模板、寡核苷酸引物和dNTP,引物和模板退火形成雙鏈后,DNA 聚合酶在引物的引導下在模板鏈上沿3’→5’的方向移動,dNTP 按照堿基配對原則,逐個連接在引物的3’-OH 末端。然而,如果在DNA 合成體系中加入雙脫氧核苷三磷酸(2’,3’-ddNTP),后者與dNTP 的區別在于脫氧核糖的C3 位置缺少-OH,這樣,一旦2’,3’-ddNTP 摻入到DNA 鏈中,由于沒有3’-OH,不能同后續的dNTP 形成磷酸二酯鍵,從而使正在延伸的引物鏈在此終止。DNA 自動測序技術也采用了這一基本原理。即在反應體系中除了加入正常反應所必需的4 種dNTP 外,還加入了一定比例的4 種熒光染料基團標記的2’,3’-ddNTP,鏈合成過程中,dNTP 和熒光染料基......閱讀全文
DNA自動序列測定試驗
[實驗原理]DNA 測序(DNA sequencing)是對DNA 分子的一級結構的分析。其基本原理是DNA 的復制反應體系中需要存在DNA 聚合酶、DNA 模板、寡核苷酸引物和dNTP,引物和模板退火形成雙鏈后,DNA 聚合酶在引物的引導下在模板鏈上沿3’→5’的方向移動,dNTP 按照堿
DNA微序列技術
·?????????Protocols for Making Drosophila Arrays?(Stanford U.)Detailed protocol for making arrays including PCR Amplification of cDNAs for Printing,?
DNA-序列分析技術
試劑、試劑盒 瓊脂糖TE 水飽和酚無水乙醇70%乙醇TEMED測序酶溴化乙錠儀器、耗材 電泳儀離心管離心機冰浴箱恒溫板DNA 測序儀
DNA-序列分析技術
DNA序列分析技術可用于:(1)分析物種的遺傳多樣性;(2)鑒定新的物種;(3)用于比較基因組學。實驗方法原理本節描述運用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自動DNA 測序儀進行雙鏈DNA 測序的方法。熱循環測序反應使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDe
DNA序列測定技術
DNA序列測定技術序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam-Gilbert DNA化學降解法測序策略 目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭,但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的
DNA-序列分析技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本節描述運用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自動DNA 測序儀進行雙鏈DNA 測序的方法。熱循環測序反應使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDeoy TM Terminator
DNA序列測定技術
DNA序列測定技術序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam-Gilbert DNA化學降解法測序策略目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭,但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干
DNA重組(DNA-recombination)技術:DNA序列測定2
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法(雙脫氧鏈終止法)和Maxam(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭,但這兩種方法都同樣生成相互獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸,每組核苷酸都有共同的起點,卻隨機終止于一種(或多種)特定的殘基,形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重組(DNA-recombination)技術:DNA序列測定3
2.利用末端轉移酶和α-32P-ddNTP標記DNA的3ˊ-末端 在二價陽離子存在下,末端轉移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羥基末端,如果作為底物的核苷酸經過修飾(如ddNTP),則可以在DNA的3ˊ-OH上僅加入一個核苷酸。對于雙鏈DNA片段,亦存在DNA的兩側均被標記問題,可通過上述同
DNA重組(DNA-recombination)技術:DNA序列測定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述,選用合適的DNA聚合酶進行測序反應也是保證測序質量的重要因素之一。常用于雙脫氧末端終止法測序的有幾種不同的酶: 1.大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow片段) 此酶是最早用于建立Sanger測序的酶。但通常會有兩個問題:①Klenow片段的持續合成能力較
DNA序列分析技術1
物種的遺傳多樣性在本質上是DNA 一級序列的多樣性。近年來,隨著DNA 測序技術的迅速發展和日益普及,DNA 測序在遺傳多樣性的研究中正在起著越來越大的作用。本章將介紹目前在遺傳多樣性研究中常用的一種手動和一種全自動雙鏈DNA 測序方法。1.DNA 模板的制備在遺傳多樣性的研究中,由于樣本量一般都較
DNA序列分析技術2
3)電泳電極緩沖液 1 倍TBE(pH 值8.0)預電泳 30 分鐘至1 小時恒溫方式 測序膠板上夾蓋鋁恒溫板電泳溫度 50℃左右電泳條件 恒功率 90~110W電泳時間 2.5 小時至5 小時4)干膠制備和壓片電泳結束后取下膠板,用工具撬開玻璃板,使膠留在其中一塊板上。將裁剪好的新華3 號濾紙在膠
DNA序列家族的概念
中文名稱DNA序列家族英文名稱DNA sequence family;sequence family定 義DNA分子變性后可復性形成穩定的堿基配對雙鏈分子的一組序列。序列之間有很高的同源性。應用學科遺傳學(一級學科),基因組學(二級學科)
端粒DNA-序列的概念
端粒DNA 序列(telomere DNA sequence,TEL)端粒的功能是與端粒酶結合,完成染色體末端復制。端粒酶以其自身的RNA 為模板,在染色體端部添加上端粒的重復序列。作為模板的RNA 比較短,含有1.5 個端粒重復單元。端粒結構還能防止染色體融合及降解。端粒是保護DNA分子中的基因的
重復[DNA]序列的概念
中文名稱重復[DNA]序列英文名稱repetitive [DNA] sequence定 義DNA分子中重復出現的核苷酸序列。應用學科遺傳學(一級學科),基因組學(二級學科)
DNA-下游序列的結構特點
中文名稱下游序列英文名稱downstream sequence定 義DNA或RNA分子中,相對于某一序列的3′方向的序列。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),總論(二級學科)
細胞化學基礎端粒DNA序列
端粒DNA 序列(telomere DNA sequence,TEL)端粒的功能是與端粒酶結合,完成染色體末端復制。端粒酶以其自身的RNA 為模板,在染色體端部添加上端粒的重復序列。作為模板的RNA 比較短,含有1.5 個端粒重復單元。端粒結構還能防止染色體融合及降解。端粒是保護DNA分子中的基因的
DNA-前導序列的結構特點
前導序列是結構基因中編碼區之前的一段序列,這部分序列能被轉錄,但不被翻譯,在mRNA是從5′端起至結構基因第一編碼子開始點(通常 AUG)為止,在蛋白質合成過程中不被翻譯。
可銷毀特定DNA序列裝置出爐
英國《自然·通訊》雜志19日在線發表了一篇合成生物學論文,描述了一種基于“基因組編輯”CRISPR技術的的裝置,能銷毀轉基因生物中特定的DNA序列。控制住特定DNA序列銷毀的能力,其應用范圍將包括防止轉基因生物的環境釋放、幫助生物技術公司保護知識產權以及避免偷竊等等。 出于對轉基因微生
Genome-Biology:食物會影響DNA序列
牛津大學的研究人員在兩種寄生蟲中檢測到了食物組分造成的DNA序列差異。他們在Genome Biology雜志上發表文章指出,食物能夠影響生物的基因序列。 “生物從食物中獲取原料構建自己的DNA。我們認為,食物組分可能應該能夠改變生物的DNA。我們也許可以預測素食者熊貓與肉食者北極熊之間的基因差
著絲粒DNA序列的概念
中文名稱著絲粒DNA序列英文名稱centromere DNA sequence定 義真核細胞染色體著絲粒部位可與動粒結合的DNA序列。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞化學(二級學科)
端粒DNA-序列的基本信息
端粒DNA 序列(telomere DNA sequence,TEL)端粒的功能是與端粒酶結合,完成染色體末端復制。端粒酶以其自身的RNA 為模板,在染色體端部添加上端粒的重復序列。作為模板的RNA 比較短,含有1.5 個端粒重復單元。端粒結構還能防止染色體融合及降解。?端粒是保護DNA分子中的基因
DNA保守序列的結構特點
保守序列(Conserved Sequence):指在進化過程中基本保持不變的?DNA?分子中的一個核苷酸片段或者蛋白質中的氨基酸片段。
DNA序列多態性的定義
中文名稱DNA序列多態性英文名稱DNA sequence polymorphism定 義同一物種的不同基因組DNA等位序列之間的差異。包括長度多態、限制性酶切位點多態及單核苷酸多態等。應用學科遺傳學(一級學科),基因組學(二級學科)
DNA共有序列的結構特點
共有序列(consensus sequence) 決定啟動序列的轉錄活性大小。各種原核啟動序列特定區域內(通常在轉錄起始點上游-10及-35區域)存在共有序列(consensus sequence)
T載體克隆的DNA序列分析
實驗目的: 了解常規DNA序列分析技術(Sanger雙脫氧法)的原理及操作步驟。 實驗原理: 在分子生物學研究中,DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等(1977)發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam和Gilbert(1977)發明的化學
DNA序列測定的技術和策略
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭,但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸,每組寡核苷酸都有固定的起點,但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
DNA序列和大規模DNA測序策略的探討(圖)
人類基因組計劃的核心內容之一是基因組測序。隨著人類基因組圖譜趨于完成,人類基因的 定位克隆、鑒定分析直至全基因組測序取得了突破性進展,測序策略的成熟、測序方法的改進、自動測序儀的廣泛應用、計算機數據分析系統的擴展以及測序分析能力的提高, 大大推進了大規模DNA測序的進程。第一節 DNA測序的基本方法
細菌DNA序列可作信息“存儲器”
阿根廷科學家近日成功將該國國歌旋律以人工基因編碼形式植入某種細菌染色體中。這一方法不僅可以用來存儲音樂旋律,還可能發展為一種擁有巨大應用潛力的信息存儲方式。 據阿根廷媒體報道,主持研究的阿根廷信息生物學家費德里克·普拉達介紹說,生物的DNA(脫氧核糖核酸)由四種脫氧核苷酸組成,即腺嘌呤、胸
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列
[目的] 掌握雙脫氧鏈終止法測定DNA序列的原理與方法[原理]DNA聚合酶催化的DNA鏈延伸是在3’-OH末端上進行的。由于2’,3’-雙脫氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脫氧而失去游離-OH,當它參入到DNA鏈后,3’-OH末端消失,使DNA鏈的延伸終止。本實驗根據此原理,將待測DNA片段插