含尿嘧啶的單鏈噬菌體M13DNA制備實驗
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液乙醇氯化鈉苯酚醋酸鈉TE瓊脂糖凝膠原始的重組 M13 噬菌體單鏈 DNAYT 培養基儀器、耗材 Corex 離心機管巴斯德滴管柱層析樹脂大腸桿菌菌株 CJ236大腸桿菌菌株 TG1JM109 或相當的菌株實驗步驟 材料緩沖液和溶液各種貯存液，緩沖液和試劑成分請參閱附錄 1。將貯存液稀釋至所需的濃度。乙醇氯化鈉（2.5mol/L) 含 15% 聚乙二醇（m/V，PEG8000)苯酚（pH8.0)苯酚：氯仿（1:1,V/V)醋酸鈉（3mol/L,pH5.2)TE(pH7.6)凝膠瓊脂糖凝膠請參閱步驟 16。核酸和寡核苷酸DNA 分子質量標準，原始的重組 M13 噬菌體單鏈 DNA培養基2xYT 培養基含 0.25ug/ml 尿嘧啶的 2XYT 培養基離心機和轉子SorvallGSA 轉子或相當的產品SorvallSS-34 轉子或相當的產品專用設備Corex 離心機管（15 ml 和 30 ml)巴斯德滴管......閱讀全文
含尿嘧啶的單鏈噬菌體－M13－DNA－制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 乙醇 氯化鈉 苯酚 醋酸鈉 TE 瓊脂糖凝膠 原始的重組 M13 噬菌體
含尿嘧啶的單鏈噬菌體－M13－DNA－制備實驗
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液乙醇氯化鈉苯酚醋酸鈉TE瓊脂糖凝膠原始的重組 M13 噬菌體單鏈 DNAYT 培養基儀器、耗材 Corex 離心機管巴斯德滴管柱層析樹脂大腸桿菌菌株 CJ236大腸桿菌菌株 TG1JM109 或相當的菌株實驗步驟 材料緩沖液和溶液各種貯存液，緩沖液和試劑成分請參閱附錄 1。
含尿嘧啶的單鏈噬菌體－M13－DNA－制備實驗
經典的 Kunfcel 寡核苷酸指導的誘變方法利用大腸桿菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特異地篩除去含尿嘧啶堿基的 DNA 的選擇性作用（請參考寡核苷酸誘變信息欄）。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩
M13噬菌體單鏈DNA的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌至周圍培養液中的病毒顆粒中制備的，首先在高鹽存在下，絲狀病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀濃縮，然后用酚抽提釋放單鏈 DNA，最后乙醇沉淀收集單鏈 DNA。
M13噬菌體單鏈DNA的制備
M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌至周圍培養液中的病毒顆粒中制備的，首先在高鹽存在下，絲狀病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀濃縮，然后用酚抽提釋放單鏈 DNA，最后乙醇沉淀收集單鏈 DNA。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌
M13噬菌體單鏈DNA的制備
實驗方法原理 M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌至周圍培養液中的病毒顆粒中制備的，首先在高鹽存在下，絲狀病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀濃縮，然后用酚抽提釋放單鏈 DNA，最后乙醇沉淀收集單鏈 DNA。實驗材料 M13 單鏈噬菌體載體感染 M13 噬菌體的大腸桿菌培養物未感染的大腸桿菌的培養
制備DNA測序模板實驗——制備單鏈M13噬菌體DNA
本實驗包含了用于制備適用于雙脫氧測序的模板及適用于末端標記和化學測序的DNA的實驗方案。所有用于雙脫氧測序的雙鏈模板在與引物退火前必須變性，在一般應用上，堿變性在測序中的效果比熱變性好。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1
單鏈和雙鏈M13噬菌體DNA的大規模制備
實驗方法原理 這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時。實驗材料 大腸桿菌 F' 菌株M13 噬菌體原液
單鏈和雙鏈M13噬菌體DNA的大規模制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時
單鏈和雙鏈M13噬菌體DNA的大規模制備
這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這個方案主
M13噬菌體雙鏈（復制型）DNA的制備
感染 M13 噬菌體的細菌含病毒雙鏈 RF DNA，培養基中粗提病毒顆粒中含單鏈子代 DNA，雙鏈 RF DNA 可以采用類似于質粒純化的方法從感染細胞的小量培養物中分離。從 1~2 ml 的感染細胞培養物中可以分離幾微克的 RF DNA，這個量足以進行亞克隆和作限制酶酶切圖譜。本實驗來源「分子克隆
M13噬菌體雙鏈（復制型）DNA的制備
實驗方法原理 感染 M13 噬菌體的細菌含病毒雙鏈 RF DNA，培養基中粗提病毒顆粒中含單鏈子代 DNA，雙鏈 RF DNA 可以采用類似于質粒純化的方法從感染細胞的小量培養物中分離。從 1~2 ml 的感染細胞培養物中可以分離幾微克的 RF DNA，這個量足以進行亞克隆和作限制酶酶切
M13噬菌體雙鏈（復制型）DNA的制備
感染 M13 噬菌體的細菌含病毒雙鏈 RF DNA，培養基中粗提病毒顆粒中含單鏈子代 DNA，雙鏈 RF DNA 可以采用類似于質粒純化的方法從感染細胞的小量培養物中分離。從 1~2 ml 的感染細胞培養物中可以分離幾微克的 RF DNA，這個量足以進行亞克隆和作限制酶酶切圖譜。本實驗來源「分子克隆
M13噬菌體雙鏈（復制型）DNA的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 感染 M13 噬菌體的細菌含病毒雙鏈 RF DNA，培養基中粗提病毒顆粒中含單鏈子代 DNA，雙鏈 RF DNA 可以采用類似于質粒純化的方法從感染細胞的小量培養物中分離。從 1~2 ml 的感染細胞培養物中可以分離幾微克的
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 限制性內切核酸酶 模板 DNA 寡核苷酸引物 試劑、試
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
實驗材料大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性內切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物試劑、試劑盒乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 電泳緩沖液Tris-ClKlenow 基礎緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材變性聚丙烯酰胺凝膠或堿性瓊脂糖凝膠黏性貼片或磷光黏性貼片Sephadex
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性內切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物試劑、試劑盒 乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 電泳緩沖液Tris-ClKlenow 基礎緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材 變性聚丙烯酰胺凝膠或堿性瓊脂糖凝膠黏性貼片或磷光黏性貼片Sephad
從M13噬菌體模板合成非固定長度的單鏈DNA探針
實驗方法原理 在合成過程中，低濃度的放射性標記的 dNTP 使探針的長度限制為 200~300 個核苷酸。但是新合成的 DNA 可通過改變投入的模板量和 dNTP 的濃度使其長度為 100~1000 個核苷酸，如此長度范圍內的探針適用于大多數雜交實驗。實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klen
從M13噬菌體模板合成非固定長度的單鏈DNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在合成過程中，低濃度的放射性標記的 dNTP 使探針的長度限制為 200~300 個核苷酸。但是新合成的 DNA 可通過改變投入的模板量和 dNTP 的濃度使其長度為 100~1000 個核苷酸，如此長度范圍內的探針適用于大多數
從M13噬菌體模板合成非固定長度的單鏈DNA探針
在合成過程中，低濃度的放射性標記的 dNTP 使探針的長度限制為 200~300 個核苷酸。但是新合成的 DNA 可通過改變投入的模板量和 dNTP 的濃度使其長度為 100~1000 個核苷酸，如此長度范圍內的探針適用于大多數雜交實驗。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在
M13噬菌體衍生載體的制備實驗
載體衍生法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 質粒 試劑、試劑盒
M13噬菌體衍生載體的制備實驗
實驗材料?質粒試劑、試劑盒?YT培養基儀器、耗材?離心機分光光度計搖床實驗步驟 1.? 將來自一個單菌落的過夜培蕎新鮮菌液按1 ：50稀釋，在含有適當抗生素的2×YT培養液（1~5 ml）中，于37℃培養至OD600=0.1。2.? 按1，10，20，50 MOI感染細胞，于37℃劇烈振蕩下培養4.
寡核苷酸指導的單鏈－DNA－誘變實驗
本文介紹了由 Zoller 和 Smith 的雙引物技術（1984,1987) 結合 Kunkel 的誘變體產量富集方法（1985) 構成的經典方案。本方案中使用的單鏈 DNA 模板含有較高的尿嘧啶殘基，因為它們是從生長于 dut 和 ung 基因突變大腸菌中的 M13 噬菌體中制備的（見方案 1)
重組M13噬菌體克隆分析
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。 實驗材料
重組M13噬菌體克隆分析
在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌
重組M13噬菌體克隆分析
實驗方法原理 在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。實驗材料 重組 M13 噬菌體單鏈 DNAM13 噬菌體重組噬菌斑M13 噬菌體非重組載體噬菌斑大腸桿菌 F' 菌株試劑
M13噬菌體液體培養
M13 噬菌體原種通常采用液體培養，感染細胞并不裂解而是緩慢生長形成稀懸液。接種幾乎總是用一個新挑取的噬菌斑或單個噬菌斑獲得的噬菌體顆粒懸液。感染細胞含 200 拷貝以上雙鏈 RF DNA，每代分泌數百個噬菌體顆粒。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理M13 噬菌體原種通常采
M13噬菌體液體培養
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 M13 噬菌體原種通常采用液體培養，感染細胞并不裂解而是緩慢生長形成稀懸液。接種幾乎總是用一個新挑取的噬菌斑或單個噬菌斑獲得的噬菌體顆粒懸液。感染細胞含 200 拷貝以上雙鏈 RF DNA，每代分泌數百個噬菌體顆粒。
M13噬菌體液體培養
實驗方法原理 M13 噬菌體原種通常采用液體培養，感染細胞并不裂解而是緩慢生長形成稀懸液。接種幾乎總是用一個新挑取的噬菌斑或單個噬菌斑獲得的噬菌體顆粒懸液。感染細胞含 200 拷貝以上雙鏈 RF DNA，每代分泌數百個噬菌體顆粒。實驗材料 M13 噬菌斑大腸桿菌 F' 菌株儀器、耗材 LB
寡核苷酸指導的單鏈－DNA－誘變實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌 試劑、試劑盒 ATP