從M13噬菌體模板合成非固定長度的單鏈DNA探針
實驗方法原理 在合成過程中，低濃度的放射性標記的 dNTP 使探針的長度限制為 200~300 個核苷酸。但是新合成的 DNA 可通過改變投入的模板量和 dNTP 的濃度使其長度為 100~1000 個核苷酸，如此長度范圍內的探針適用于大多數雜交實驗。 實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 寡核苷酸引物 模板 DNA 試劑、試劑盒 洗脫緩沖液 甲酰胺染色緩沖液 NaOH 探針合成緩沖液 ......閱讀全文
單鏈DNA探針技術簡介
用雙鏈探針雜交檢測另一個遠緣DNA時,探針序列與被檢測序列間有很多錯配。而兩條探針互補鏈之間的配對卻十分穩定,即形成自身的無效雜交,結果使檢測效率下降。采用單鏈探針則可解決這一問題。單鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:(1) 以M13載體衍生序列為模板,用Klenow片段合成單鏈探針; (2)
雙鏈DNA探針標記法
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連
雙鏈DNA探針切口平移法
當雙鏈DNA 分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA 聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA
雙鏈DNA探針切口平移法
當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動,
雙鏈DNA探針切口平移法
?? 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動,用
雙鏈DNA探針標記法介紹
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。1.?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的
單鏈互補DNA的定義
中文名稱單鏈互補DNA英文名稱single-strand cDNA;sscDNA定 義在逆轉錄酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)為模板合成與mRNA序列互補的單鏈DNA。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
單鏈DNA的結構特點
單鏈DNA就是指以這種狀態存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學性質、吸收光譜、堿基反應性質等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內含有單鏈環狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細胞內增殖時則形成雙鏈DNA。
細胞化學詞匯單鏈DNA
中文名稱：單鏈DNA外文名稱：single－stranded DNA術語含義：單鏈DNA就是指以這種狀態存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學性質、吸收光譜、堿基反應性質等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內含有單鏈環狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細胞內增殖時則形成雙鏈DNA。
雙鏈DNA探針標記法的介紹
分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到
雙鏈DNA探針隨機引物合成法
? 隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度為400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優點是：(1)Klenow片段沒有5'→3'外切
細胞化學詞匯單鏈互補DNA
中文名稱：單鏈互補DNA英文名稱：single-strand cDNA;sscDNA定 義：在逆轉錄酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)為模板合成與mRNA序列互補的單鏈DNA。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）?
抗單鏈DNA抗體的概述
抗ssDNA是抗DNA抗體中臨床意義和重要性都不如抗dsDNA的一種，DNA是一個大分子的復合物，由兩條核苷酸鏈形成的雙螺旋結構。加熱時堿基間的氫鍵斷裂，DNA變性產生ssDNA。抗ssDNA的反應位點主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶構成的堿基。
切口平移法雙鏈DNA探針標記法
?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性內切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物試劑、試劑盒 乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 電泳緩沖液Tris-ClKlenow 基礎緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材 變性聚丙烯酰胺凝膠或堿性瓊脂糖凝膠黏性貼片或磷光黏性貼片Sephad
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
實驗材料大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性內切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物試劑、試劑盒乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 電泳緩沖液Tris-ClKlenow 基礎緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材變性聚丙烯酰胺凝膠或堿性瓊脂糖凝膠黏性貼片或磷光黏性貼片Sephadex
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 限制性內切核酸酶 模板 DNA 寡核苷酸引物 試劑、試
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
實驗方法原理 SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。實驗材料 3' 引物鏈親和素磁珠儀器、耗材 電泳儀PCR 儀離心機凝膠成像儀
分子遺傳學詞匯單鏈DNA
中文名稱：單鏈DNA外文名稱：single－stranded DNA定義：大部分DNA以雙螺旋結構存在，但一經熱或堿處理就會變為單鏈狀態。
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。實驗材料3
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。
單鏈DNA的功概念和作用
單鏈DNA就是指以這種狀態存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學性質、吸收光譜、堿基反應性質等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內含有單鏈環狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細胞內增殖時則形成雙鏈DNA。
單鏈DNA結合蛋白的功能簡介
單鏈DNA結合蛋白（Single-stranded DNA-binding protein，縮寫SSB或SSBP）又稱單鏈結合蛋白，是專門負責與DNA單鏈區域結合的一種蛋白質，為DNA復制、重組和修復所必需的成分。 防止兩條互補單鏈再次結合為雙螺旋，維持單鏈狀態。防止單鏈區域形成鏈內二級結構。
從M13噬菌體模板合成非固定長度的單鏈DNA探針
在合成過程中，低濃度的放射性標記的 dNTP 使探針的長度限制為 200~300 個核苷酸。但是新合成的 DNA 可通過改變投入的模板量和 dNTP 的濃度使其長度為 100~1000 個核苷酸，如此長度范圍內的探針適用于大多數雜交實驗。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在
從M13噬菌體模板合成非固定長度的單鏈DNA探針
實驗方法原理 在合成過程中，低濃度的放射性標記的 dNTP 使探針的長度限制為 200~300 個核苷酸。但是新合成的 DNA 可通過改變投入的模板量和 dNTP 的濃度使其長度為 100~1000 個核苷酸，如此長度范圍內的探針適用于大多數雜交實驗。實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klen
從M13噬菌體模板合成非固定長度的單鏈DNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在合成過程中，低濃度的放射性標記的 dNTP 使探針的長度限制為 200~300 個核苷酸。但是新合成的 DNA 可通過改變投入的模板量和 dNTP 的濃度使其長度為 100~1000 個核苷酸，如此長度范圍內的探針適用于大多數
隨機引物合成法雙鏈DNA探針標記法
隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度為400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優點是：(1)Klenow片段沒有5'→3'外切酶活
單鏈DNA結合蛋白的基本內容
單鏈結合蛋白（SSB，single strand DNA-binding protein）：結合于螺旋酶沿復制叉方向向前推進產生的單鏈區，防止新形成的單鏈DNA重新配對形成雙鏈DNA或被核酸酶降解的蛋白質。 螺旋酶沿復制叉方向向前推進產生了一段單鏈區，但是這種單鏈DNA不會長久存在，會很快重新
單鏈Oligo合成與DNA組裝技術－（二）
2.2 Golden Gate組裝Golden Gate組裝技術是基于非同源重組的代表性技術，其利用Ⅱ型限制性酶 BsaⅠ在識別位點外部切割的特性，設計特異的突出序列同時組裝多個片段，且酶切和酶連可以同時進行，原理如圖3所示。首先，擴增目的片段，在兩端加上BsaⅠ識別序列，同時在識別序列內側
單鏈Oligo合成與DNA組裝技術－（一）
合成生物學作為迅速發展的交叉學科，已在生物醫藥、新材料、診斷、能源和數據儲存等領域展現越來越廣泛的應用潛力。合成基因組學作為合成生物學的重要研究方向，著重于新生命體系的從頭設計與合成，其以Oligo（寡核苷酸鏈）合成、拼裝和轉移等核心技術為支撐。新生命體系的從頭設計與合成不僅需要合成組成基因組的小片