如何選擇適合實驗的一抗和二抗?
小編今天給大家分享一些抗體選擇的經驗~檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素:分析或應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗體說明書沒有提及的應用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型,而僅是說明尚未經過此種分析試驗驗證,如果抗體不適用某些分析試驗,則會在抗體說明書上標注出來不適于某分析試驗。2. 樣本蛋白的結構性質了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇最合適的抗體,至少兩方面因素需要考慮待測樣本蛋白的結構域:抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來,其中的免疫原包括:全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體或細胞,抗體說明書一般都有免疫原的描述,如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區域,則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用 FACS......閱讀全文
一抗、二抗如何保存
工作液根據需要稀釋在5%奶粉里,再加入少量疊氮化鈉(大約0.01% w/v),4度保存。Alisa_lin(站內聯系TA)分裝,-20度保存。不要反復凍融,沒有用過粉末的二抗,按說明書唄石頭2011(站內聯系TA)液體的一抗沒加甘油的話盡量不要放在負二十,因為用的時候反復凍融不好。粉末狀的二抗負二十
一抗/二抗該選誰?
?? 我們在生活中經常會面臨做選擇這樣的一個難題,其實做選擇本身并不是多么困難的事情,關鍵在于您是否了解自己內心真正需要的是什么。就好比我們的實驗者在選擇產品的品牌、質量、規格等,根據這些信息再去做相關的判斷。比如zui簡單的一個例子,不少的伙伴都對一抗、二抗的選擇方面甚是苦惱,那如何選擇呢,技術教
怎樣稀釋一抗和二抗
一抗的確比二抗貴,我們實驗室1:500~1:1000稀釋一抗體都可以,雜交袋盡量小,一抗稀釋液其實只要能覆蓋完整個條帶的用量就可以
一抗二抗的制備方法
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 包被:用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 5%脫脂乳(SMP)或者BSA 37℃(或
一抗二抗的制備方法
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 包被:用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 5%脫脂乳(SMP)或者BSA 37℃(或
一抗和二抗用什么稀釋
一抗的確比二抗貴,我們實驗室1:500~1:1000稀釋一抗體都可以,雜交袋盡量小,一抗稀釋液其實只要能覆蓋完整個條帶的用量就可以
ELISA如何選一抗與二抗
二抗廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體,在免疫學反應中,經常需要針對試驗選擇不同的二抗,艾美捷能為您的科研工作提供最適合和最全面的二抗產品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般
二抗如何選擇論一抗與二抗種屬及類型區別
二抗廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體,在免疫學反應中,經常需要針對試驗選擇不同的二抗,艾美捷能為您的科研工作提供最適合和最全面的二抗產品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般
為什么一抗可以回收二抗不能
因為一抗我們是用BSA加疊氮鈉稀釋的,要回收,一般只要不長細菌就一直用,但是中間要補一些抗體,不然太稀了曝不出來,二抗是用脫脂奶粉稀釋的,不回收。
如何選擇適合實驗的一抗和二抗?
小編今天給大家分享一些抗體選擇的經驗~檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素:分析或應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗體說明書沒有提及的
一抗二抗不同倍數稀釋有影響嗎
有。一抗是針對抗原的抗體,二抗是針對一抗的抗體,一抗二抗不同倍數稀釋有影響,稀釋倍數過高或抗體品質差均可造成高背景。
western-glut4一抗,二抗怎么配置
配制抗體的時候有兩樣東西比較關鍵:溶解抗體的溶液或稀釋液,通常如果只是溶解抗體,可能會建議用PBS或者TBS,提供中性環境,以幫助抗體的保存。如果已經是液體,只是需要稀釋做實驗的話,一般會用封閉液(BSA溶液,脫脂奶粉,注脫脂奶粉稀釋后的抗體無法再次使用),或者是洗液(TBST或PBST)。抗體的濃
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般根據抗體的特異性和親和度。一抗的濃度范圍比較大,從1:200到1:1000都有,這個要多做幾次才能確定。二抗的稀釋倍數打,一般用1:5000到1:10000就可以了。
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般抗體的說明上,都給出了一個范圍,一抗為1:200-2000,二抗為1:1000-10000。western blot 的原理:本質是抗原抗體反應。第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般抗體的說明上,都給出了一個范圍,一抗為1:200-2000,二抗為1:1000-10000。western blot 的原理:本質是抗原抗體反應。第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般根據抗體的特異性和親和度。一抗的濃度范圍比較大,從1:200到1:1000都有,這個要多做幾次才能確定。二抗的稀釋倍數打,一般用1:5000到1:10000就可以了。
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般抗體的說明上,都給出了一個范圍,一抗為1:200-2000,二抗為1:1000-10000。western blot 的原理:本質是抗原抗體反應。第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體
Western-Blot-一抗二抗去除液(酸性)使用說明
ECL 化學發光法是目前最常用、最靈敏的 Western Blot 檢測方法。由于這些底物不會在膜表面沉淀、牢牢結合在膜上,因此可以通過一抗二抗去除液(Stripping buffer)將親和結合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強烈而有效解離結合的抗體,也要足夠溫和使轉移的目標蛋白仍
一抗和二抗濃度和孵育時間有什么要求
一抗孵育溫度有幾種:4度、室溫、37度,其中4度效果最佳;孵育時間與溫度、抗體濃度有關,一般37度1-2h,4度過夜(從冰箱拿出后37度復溫45min)。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30min-1h,濃度一般有工作液,若是濃縮液還要摸索濃度。
免疫組化中,一抗、二抗的制備方法
ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來,發展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。 (一) 原理 ELISA是以
免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什么稀釋
PBS稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點TritonX100效果好。培養液成分太多了。而且固定之后細胞都死了,用培養液沒什么意義,只要保證其pH等條件適合就好了。抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下,有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定。可以4度過夜,這樣染色效果
免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什么稀釋
PBS稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點TritonX100效果好。培養液成分太多了。而且固定之后細胞都死了,用培養液沒什么意義,只要保證其pH等條件適合就好了。抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下,有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定。可以4度過夜,這樣染色效果
免疫熒光的一抗核二抗分別用什么稀釋
PBS稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點TritonX100效果好。培養液成分太多了。而且固定之后細胞都死了,用培養液沒什么意義,只要保證其pH等條件適合就好了。抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下,有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定。可以4度過夜,這樣染色效果
免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什么稀釋
PBS稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點TritonX100效果好。培養液成分太多了。而且固定之后細胞都死了,用培養液沒什么意義,只要保證其pH等條件適合就好了。抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下,有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定。可以4度過夜,這樣染色效果
免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什么稀釋
PBS稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點TritonX100效果好。培養液成分太多了。而且固定之后細胞都死了,用培養液沒什么意義,只要保證其pH等條件適合就好了。抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下,有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定。可以4度過夜,這樣染色效果
做wb時,一抗和二抗濃度是怎么確定的
一抗的用量和樣品中的目標分子含量相關,如果含量較高,就不需要用太多一抗,以免浪費和條帶太亮不易分析。推薦采用廠家的抗體濃度(義翹神州會提供抗體用量、天然細胞株檢測結果),如果樣品與廠家的不是一種細胞,可以嘗試上下摸索一兩個濃度梯度;二抗的用量,和你所在實驗室常規的用量就可以,如果出現效果不理想的狀態
免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什么稀釋
PBS稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點TritonX100效果好。培養液成分太多了。而且固定之后細胞都死了,用培養液沒什么意義,只要保證其pH等條件適合就好了。抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下,有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定。可以4度過夜,這樣染色效果