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  • 如何選擇適合實驗的一抗和二抗?

    小編今天給大家分享一些抗體選擇的經驗~檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素:分析或應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗體說明書沒有提及的應用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型,而僅是說明尚未經過此種分析試驗驗證,如果抗體不適用某些分析試驗,則會在抗體說明書上標注出來不適于某分析試驗。2. 樣本蛋白的結構性質了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇最合適的抗體,至少兩方面因素需要考慮待測樣本蛋白的結構域:抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來,其中的免疫原包括:全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體或細胞,抗體說明書一般都有免疫原的描述,如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區域,則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用 FACS......閱讀全文

    做wb時,一抗和二抗濃度是怎么確定的

    一抗的用量和樣品中的目標分子含量相關,如果含量較高,就不需要用太多一抗,以免浪費和條帶太亮不易分析。推薦采用廠家的抗體濃度(義翹神州會提供抗體用量、天然細胞株檢測結果),如果樣品與廠家的不是一種細胞,可以嘗試上下摸索一兩個濃度梯度;二抗的用量,和你所在實驗室常規的用量就可以,如果出現效果不理想的狀態

    免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什么稀釋

    PBS稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點TritonX100效果好。培養液成分太多了。而且固定之后細胞都死了,用培養液沒什么意義,只要保證其pH等條件適合就好了。抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下,有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定。可以4度過夜,這樣染色效果

    免疫熒光染色的一抗,二抗分別用什么稀釋

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    AMCA熒光二抗?EarthOx新型DyLight-405熒光二抗

    中英文品名品牌貨號規格詳情??山羊抗小鼠IgG二抗, 黃紅色DyLight 549熒光標記?-DyLight 549 AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)??EarthOx??E032310??¥200/100μl?? ¥800/500μl詳情??山羊抗兔IgG二抗

    二抗的選擇

    二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源,例如:如果你的一抗是小鼠的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse?secondary。建議檢查二抗說明書確保該抗體適用于你的檢測應用,?二抗一般連接熒光素FITC或發光團。

    如何選擇二抗

    二抗選擇(1)種屬來源。主要根據一抗種屬來源而決定二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。免疫組化,WB二抗主要選擇HRP,Biotin標記的二抗,而免疫熒光染色可按實驗需要選擇不同熒光素標記的二抗,如FITC、

    二抗孵育時間

    二抗孵育時間為1至2小時。參考二抗的說明書,按照適當比例用封閉液稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗。吸盡洗滌液后,立即加入稀釋好的二抗,室溫在搖床上緩慢搖動孵育1至2小時。回收二抗。二抗的濃度一般要參照抗體說明書選擇最適當的比例。一抗二抗的選擇直接影響實驗結果以及背景的深淺。要嚴格保證反應時間,

    流式做簡標抗體一抗,二抗分別孵多長時間

    (1)單抗包被-抗原-酶標二抗-底物顯色。本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體,經洗滌后加入含有抗原之待測樣品,如待檢樣品中有相應抗原存在,即可與包被于固相載體上的特異性抗體結合,經保溫孵育洗滌后,即可加入酶標記特異性抗體,再經孵育洗滌后,加底物顯色進行測定,底物降解的量即為欲測抗原的量。(2)單

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    流式做簡標抗體一抗,二抗分別孵多長時間

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    流式做簡標抗體一抗,二抗分別孵多長時間

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    檢測treg細胞檢測直接用熒光一抗好還是用熒光二抗好

    一抗確實要依照你所用的抗體而言,建議是在1:100-1:500之間,在稀釋的我就沒用過了。其實我大部分抗體的濃度多是在1:100 左右浮動。二抗我都是用的1:50-1:100.再稀釋的比率效果不是很好。

    做WB時羊抗鼠二抗的稀釋比例一般是多少

    【1】抗體的說明上,都給出了一個范圍,可以以這個范圍為根據摸索。開始的時候可以把膜剪成幾小塊,每一塊用不同的一抗二抗濃度,這樣就可以比較快的摸出適宜的濃度。有些時候也有一定的經驗的:我用的是SANTA CRUZ的抗體,一抗建議的稀釋比是1:200-1000,我用的是1:400效果挺好的。周圍的人用的

    做WB時羊抗鼠二抗的稀釋比例一般是多少

    【1】抗體的說明上,都給出了一個范圍,可以以這個范圍為根據摸索。開始的時候可以把膜剪成幾小塊,每一塊用不同的一抗二抗濃度,這樣就可以比較快的摸出適宜的濃度。有些時候也有一定的經驗的:我用的是SANTA CRUZ的抗體,一抗建議的稀釋比是1:200-1000,我用的是1:400效果挺好的。周圍的人用的

    wb二抗怎么融化

    wb 二抗融化,wb 抗體用5%的脫脂奶粉或者1%的BSA (千分之一的TBST的溶液 )配置,可以先讓抗體和奶粉或者BSA 蛋白非特異結合,這樣就不會與PVDF 膜上的蛋白結合了。

    一抗的選擇

    檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素:?分析試驗應用的類型l?樣本蛋白的結構性質l?樣本的種屬l?抗體宿主的種類l?抗體的標記和檢測l1.分析試驗應用的類型???一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應用于W

    免疫組化的一抗和二抗濃度和孵育時間有什么要求

    一抗孵育溫度有幾種:4度、室溫、37度,其中4度效果最佳;孵育時間與溫度、抗體濃度有關,一般37度1-2h,4度過夜(從冰箱拿出后37度復溫45min)。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30min-1h,濃度一般有工作液,若是濃縮液還要摸索濃度。

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    一抗孵育溫度有幾種:4度、室溫、37度,其中4度效果最佳;孵育時間與溫度、抗體濃度有關,一般37度1-2h,4度過夜(從冰箱拿出后37度復溫45min)。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30min-1h,濃度一般有工作液,若是濃縮液還要摸索濃度。

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