western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般抗體的說明上,都給出了一個范圍,一抗為1:200-2000,二抗為1:1000-10000。western blot 的原理:本質是抗原抗體反應。第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在,放大一抗的信號。......閱讀全文
一抗、二抗如何保存
工作液根據需要稀釋在5%奶粉里,再加入少量疊氮化鈉(大約0.01% w/v),4度保存。Alisa_lin(站內聯系TA)分裝,-20度保存。不要反復凍融,沒有用過粉末的二抗,按說明書唄石頭2011(站內聯系TA)液體的一抗沒加甘油的話盡量不要放在負二十,因為用的時候反復凍融不好。粉末狀的二抗負二十
一抗/二抗該選誰?
?? 我們在生活中經常會面臨做選擇這樣的一個難題,其實做選擇本身并不是多么困難的事情,關鍵在于您是否了解自己內心真正需要的是什么。就好比我們的實驗者在選擇產品的品牌、質量、規格等,根據這些信息再去做相關的判斷。比如zui簡單的一個例子,不少的伙伴都對一抗、二抗的選擇方面甚是苦惱,那如何選擇呢,技術教
一抗二抗的制備方法
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 包被:用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 5%脫脂乳(SMP)或者BSA 37℃(或
怎樣稀釋一抗和二抗
一抗的確比二抗貴,我們實驗室1:500~1:1000稀釋一抗體都可以,雜交袋盡量小,一抗稀釋液其實只要能覆蓋完整個條帶的用量就可以
一抗二抗的制備方法
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 包被:用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 5%脫脂乳(SMP)或者BSA 37℃(或
AMCA熒光二抗?EarthOx新型DyLight-405熒光二抗
中英文品名品牌貨號規格詳情??山羊抗小鼠IgG二抗, 黃紅色DyLight 549熒光標記?-DyLight 549 AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)??EarthOx??E032310??¥200/100μl?? ¥800/500μl詳情??山羊抗兔IgG二抗
二抗如何選擇論一抗與二抗種屬及類型區別
二抗廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體,在免疫學反應中,經常需要針對試驗選擇不同的二抗,艾美捷能為您的科研工作提供最適合和最全面的二抗產品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般
二抗的選擇
二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源,例如:如果你的一抗是小鼠的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse?secondary。建議檢查二抗說明書確保該抗體適用于你的檢測應用,?二抗一般連接熒光素FITC或發光團。
如何選擇二抗
二抗選擇(1)種屬來源。主要根據一抗種屬來源而決定二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。免疫組化,WB二抗主要選擇HRP,Biotin標記的二抗,而免疫熒光染色可按實驗需要選擇不同熒光素標記的二抗,如FITC、
二抗孵育時間
二抗孵育時間為1至2小時。參考二抗的說明書,按照適當比例用封閉液稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗。吸盡洗滌液后,立即加入稀釋好的二抗,室溫在搖床上緩慢搖動孵育1至2小時。回收二抗。二抗的濃度一般要參照抗體說明書選擇最適當的比例。一抗二抗的選擇直接影響實驗結果以及背景的深淺。要嚴格保證反應時間,
一抗和二抗用什么稀釋
一抗的確比二抗貴,我們實驗室1:500~1:1000稀釋一抗體都可以,雜交袋盡量小,一抗稀釋液其實只要能覆蓋完整個條帶的用量就可以
ELISA如何選一抗與二抗
二抗廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體,在免疫學反應中,經常需要針對試驗選擇不同的二抗,艾美捷能為您的科研工作提供最適合和最全面的二抗產品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般
為什么一抗可以回收二抗不能
因為一抗我們是用BSA加疊氮鈉稀釋的,要回收,一般只要不長細菌就一直用,但是中間要補一些抗體,不然太稀了曝不出來,二抗是用脫脂奶粉稀釋的,不回收。
wb二抗怎么融化
wb 二抗融化,wb 抗體用5%的脫脂奶粉或者1%的BSA (千分之一的TBST的溶液 )配置,可以先讓抗體和奶粉或者BSA 蛋白非特異結合,這樣就不會與PVDF 膜上的蛋白結合了。
一抗二抗不同倍數稀釋有影響嗎
有。一抗是針對抗原的抗體,二抗是針對一抗的抗體,一抗二抗不同倍數稀釋有影響,稀釋倍數過高或抗體品質差均可造成高背景。
如何選擇適合實驗的一抗和二抗?
小編今天給大家分享一些抗體選擇的經驗~檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素:分析或應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗體說明書沒有提及的
western-glut4一抗,二抗怎么配置
配制抗體的時候有兩樣東西比較關鍵:溶解抗體的溶液或稀釋液,通常如果只是溶解抗體,可能會建議用PBS或者TBS,提供中性環境,以幫助抗體的保存。如果已經是液體,只是需要稀釋做實驗的話,一般會用封閉液(BSA溶液,脫脂奶粉,注脫脂奶粉稀釋后的抗體無法再次使用),或者是洗液(TBST或PBST)。抗體的濃
如何選擇合適的二抗?
二抗的選擇原則:針對一抗來源的二抗(比如一抗是小鼠來源的,二抗就要是抗小鼠的)針對一抗Ig亞型的(比如一抗是IgM,二抗就要是抗IgM的抗體)為了增加特異性、降低背景:可以選擇Fab段的抗體(去除Fc段的)、經過標本來源種屬血清吸附的的二抗查看二抗的說明書,選擇經過驗證可以用于相應實驗方法的二抗Ab
熒光二抗用什么稀釋
抗體不用水稀釋,一般用PBS稀釋,稀釋后馬上就用,盡量不要存放。如果背景有些高,可以用PBS-T稀釋也行。
二抗用水稀釋能用嗎
不能。二抗用水稀釋后,抗體會隨之減弱,直到沒有效果,不能使用。二抗是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在,放大一抗的信號。
wb二抗室溫幾小時
二抗一般室溫就行,沒要求要37度,一個小時差不多就夠了。
Jackson-ImmunoResearch-二抗選用指南
Jackson ImmunoResearch ?公司二抗選用指南( 此部分內容來源于 Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc ?網站,如有疑問,請參考原網站)親和層析法純化的二抗 ? ?用親和層析法純化的抗體是指,利用耦聯到瓊脂糖凝膠上的抗原將抗血清中的抗體親
Jackson-ImmunoResearch-二抗選用指南
Jackson ImmunoResearch?公司二抗選用指南(此部分內容來源于Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc網站,如有疑問,請參考原網站)親和層析法純化的二抗用親和層析法純化的抗體是指,利用耦聯到瓊脂糖凝膠上的抗原將抗血清中的抗體親和層析下來。我們采
二抗孵育久了會怎樣
孵育過夜一般多見于封閉液。二抗孵育過夜比較少見。因為二抗中酶的活性可能容易受到影響,并且如果在二抗孵育階段有微生物滋生,后續洗滌步驟少,容易干擾顯色。二抗濃度太高、孵育時間太長了 。洗膜不夠,可以嘗試3次,每次15min 。如果片子全黑,要考慮膠片是不是已經曝光了。
二抗的選擇和定位
第一步:選擇抗體。三種二抗抗體:Whole IgG,F(ab&;rsquo;)2片段,Fab片段。?Whole IgG抗體適用于多數情況,是性價比最高的。Whole IgG是完整的抗體分子,有一個Fc部分和兩個與抗原結合的Fab部分 (Figure 1, Jackson ImmunoResearch
wb二抗室溫幾小時
二抗一般室溫就行,沒要求要37度,一個小時差不多就夠了。蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
免疫組化中,一抗、二抗的制備方法
ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來,發展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。 (一) 原理 ELISA是以