補體介導的細胞毒實驗——補體介導法
細胞毒實驗可應用于：（1）檢查細胞膜抗原；（2）鑒定抗體的特異性。實驗方法原理帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或瀕死細胞，而活細胞不著色。此即補體依賴性細胞毒試驗，利用細胞毒試驗可以檢查細胞膜抗原，亦可鑒定抗體的特異性。 本實驗中，Thy-1抗原是小鼠胸腺T細胞特異的表面抗原，在體外利用抗小鼠Thy-1的單克隆抗體通過補體的協同作用，可殺傷95%以上的胸腺細胞。 實驗材料C57BL／6J小鼠試劑、試劑盒Hank’s液單克隆抗體補體伊紅-Y染液儀器、耗材眼科剪眼科鑷平皿不銹鋼網試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片顯微鏡實驗步驟一、實驗方法 1. 小鼠胸腺細胞懸液的制備：將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取......閱讀全文
補體介導的細胞毒實驗——補體介導法
細胞毒實驗可應用于：（1）檢查細胞膜抗原；（2）鑒定抗體的特異性。實驗方法原理帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死
補體介導的細胞毒實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或
補體介導的細胞毒實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或
補體介導的細胞毒實驗
實驗方法原理帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或瀕死細胞，而活細胞不著色。此即補體依賴性細胞毒試驗，利用細胞
補體介導的細胞毒實驗
實驗方法原理 帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或瀕死細胞，而活細胞不著色。此即補體依賴性細胞毒試驗，利用細
補體介導的細胞毒試驗
一、實驗原理帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或瀕死細胞，而活細胞不著色。此即補體依賴性細胞毒試驗，利用細胞
補體介導的細胞毒試驗
1、實驗原理帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或瀕死細胞，而活細胞不著色。此即補體依賴性細胞毒試驗，利用細胞
補體介導的細胞毒試驗
【原理】??補體介導的細胞毒試驗（complement??dependent??cytotoxicity???test）的原理是特異性抗體與細胞膜上相應抗原結合后，在補體的參與下，可產生細胞膜損傷，細胞死亡；不帶相應抗原的細胞仍然存活。利用染料排斥實驗判定淋巴細胞死活狀態，活細胞不著色，具有折光性，
細胞技術專題：補體介導的細胞毒試驗
1、實驗原理帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞、病毒感染細胞）與相應抗體結合后，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或瀕死細胞，而活細胞不著色。此即補體依賴性細胞毒試驗，利用細胞
細胞介導細胞毒作用檢測法1：Cr釋放法
4小時51Cr釋放法檢測CMC活性1）用51Cr鉻酸鈉標記靶細胞短期標記法1．用RPMI-1640培養液洗滌107靶細胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氫鈉的完全培養液懸浮細胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr鉻酸鈉，37℃水浴中標記1小時，每5～10分鐘搖晃一次，混勻細胞。2．如上用RPM
細胞介導細胞毒作用檢測法3：LDH釋放法
LDH釋放法1）測定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培養液將靶細胞調整到5×104～2×105/ml，此濃度需根據情況預先標定。2．在96孔圓底細胞培養板中加入靶細胞，每孔加100μl。3個效應細胞自然釋放對照孔不加靶細胞，只加100μl培養液。3．向各孔加100μl效應細胞，效應細胞與
細胞介導的細胞毒作用（CMC）檢測法：細胞的制備
CMC中效應細胞的制備1）用淋巴細胞分離液分離PBMC1．抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸鹽（PBS）懸浮細胞。將此懸液小心加在淋巴細胞分離液上，400×g離心30分鐘。2．離心后紅細胞在管底，PBMC在血漿和淋巴細胞分離液的交界面。收集PBMC，用PBS洗滌細胞兩次，每次離心150×
細胞介導細胞毒作用檢測法：時間分辯熒光分析法
1）銪熒光檢測法：標記靶細胞：1、EuCl3的制備：稱取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl攪拌至溶解，再用1N NaOH調節pH至4.0。加雙蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存備用。2、用預冷的標記液將靶細胞濃度調整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖
細胞介導細胞毒作用檢測法6：熒光法檢測CMC
熒光法檢測CMC1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培養液將K562細胞配成1×105/ml濃度。用同樣培養液將PBMC配成1×106/ml濃度。2．取96孔圓底細胞培養板，每孔加0.1ml K562細胞懸液；每孔加適量PBMC使效靶比為1：1～5：1，每種處理3個復孔；3個對照孔只加
細胞介導細胞毒作用檢測法7：單細胞CMC試驗
單細胞CMC試驗1．用細胞培養液等量混合效應細胞和靶細胞，30℃水浴10分鐘。室溫中250×g離心5分鐘，去上清液。同量靶細胞不加效應細胞同樣處理作為對照。2．用少量細胞培養液輕輕懸浮細胞，吸管上下吹打5～6次。這一分散細胞的步驟關系到試驗的準確性和重復性，應當設法保持技術的一致性。取少許細胞懸液，
抗體加補體的細胞毒試驗方法
此法是組織相容性抗原（HLA）檢查技術中最常用的一種方法.也稱微量淋巴細胞毒試驗.人體的組織相容性抗原存在于淋巴細胞膜的表面,從供者與受者的血液分離淋巴細胞作為靶細胞,以各種定型單價抗血清與家兔血清補體作為效應系統.如果淋巴細胞表面具有與抗血清相對應的抗原,則淋巴細胞就會受損傷或致死而被臺盼藍
細胞介導細胞毒作用檢測法4：時間分辯熒光分析法
時間分辯熒光分析法1）銪熒光檢測法標記靶細胞1．EuCl3的制備：稱取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl攪拌至溶解，再用1N NaOH調節pH至4.0。加雙蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存備用。2．用預冷的標記液將靶細胞濃度調整到5×106/ml，加50μl 10mg/
抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用
ADCC是一種細胞毒反應，指表達FcR的具有殺傷活性細胞（如NK,單核巨噬）通過識別Ab的Fc段直接殺傷被抗體包被的靶細胞。
細胞介導的細胞毒作用（CMC）檢測法：效應細胞和靶...
細胞介導的細胞毒作用（CMC）檢測法：效應細胞和靶細胞的制備CMC中效應細胞的制備：1）用淋巴細胞分離液分離PBMC：1、抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸鹽（PBS）懸浮細胞。將此懸液小心加在淋巴細胞分離液上，400×g離心30分鐘。2、離心后紅細胞在管底，PBMC在血漿和淋巴細胞分離
抗補體(anticomplement)實驗檢測與補體結合的CIC
血清中有免疫復合物存在時，可與其本身的C1（內源性C1）結合。將被檢血清56℃加熱1h，能破壞結合的C1，空出補體結合位點。當加入豚鼠血清（外源性C1）及指示系統（致敏SRBC）時，CIC又可與外源性C1結合，使致敏SRBC的溶血被抑制。?1、試劑?（1）緩沖生理鹽水 NaCl l7.00g，Naa
補體測定實驗——溶血試驗（CH50）法
實驗材料血清試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液生理鹽水NaClNa2HPO4KH2PO4硫酸鎂溶液儀器、耗材水平離心機水浴箱分光光度計實驗步驟一、材料準備1. ?濃度為1×10 g/ml 的綿羊紅細胞配制（1）取經稀釋洗滌后的綿羊紅細胞配成較5%稍濃的細胞懸液。（2）取50%細胞懸液1ml，加于14ml蒸餾水
農桿菌介導法概述
農桿菌介導法起初只被用于雙子葉植物中，農桿菌的介導轉化在一些單子葉植物(尤其是水稻)中也得到了廣泛應用。此外，生物技術學家還可以通過發根農桿菌轉化，在液體培養基中培養高密度的根，作為一種在轉基因植物中獲得大量蛋白質的方法。 農桿菌Ti質粒的T-DNA可高效率地整合到植物受體細胞的染色體上并得到
農桿菌介導法簡介
農桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位 [1] ，并誘導產生冠癭瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。因此，農桿
補體結合反應實驗
實驗材料 傷寒的抽出液試劑、試劑盒 豚鼠血清兔血清綿羊紅血球儀器、耗材 小試管試管架水浴鍋實驗步驟 一、預備試驗預備試驗包括溶血素效價的滴定，補體效價的滴定，抗原效價的滴定及被檢血清的處理。1. ?溶血素效價的滴定：按照下表加入各物凡最高稀釋度的溶血素可呈現完全溶血者為一個單位。依上表結果第10管（
補體結合反應實驗
實驗材料傷寒的抽出液試劑、試劑盒豚鼠血清兔血清綿羊紅血球儀器、耗材小試管試管架水浴鍋實驗步驟一、預備試驗預備試驗包括溶血素效價的滴定，補體效價的滴定，抗原效價的滴定及被檢血清的處理。1. ?溶血素效價的滴定：按照下表加入各物凡最高稀釋度的溶血素可呈現完全溶血者為一個單位。依上表結果第10管（即1：4
細胞介導細胞毒作用檢測法2：[3H]脫氧胸苷釋放法
[3H]脫氧胸苷釋放法1）標記靶細胞1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培養液將靶細胞配成2×106/ml，取10μCi（370kBq）[3H]TdR加到1ml靶細胞中，37℃水浴標記4～6小時，每30分鐘搖晃一次。2．用RPMI-1640培養液洗滌細胞3次，每次400×g 10分鐘。用含5％小
細胞介導細胞毒作用檢測法5：用MTT檢測法測定CMC
用MTT檢測法測定CMC1．?Fen細胞培養于含10％小牛血清的RPMI-1640培養液中，在625px2培養瓶中生長到接近匯合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％?EDTA的PBS消化細胞5分鐘，洗滌后，用細胞培養液將細胞配成1×105/ml。2．?取96孔細胞培養板，每孔加0.1ml細胞懸液，在
脂質體介導的真核細胞轉染實驗——質體介導短暫表達
用脂質體將DNA導人各種真核細胞的效率比其他轉染方法更高，重復性更好。實驗材料哺乳動物細胞試劑、試劑盒質粒DNA完全培養基氯化銫DMEM儀器、耗材培養皿培養箱聚苯乙烯管實驗步驟1. ?按5×105細胞/孔的量在六孔板中接種指數期生長的細胞，在37℃ 5%CO2培養箱中 培養過夜，直至細胞80%匯片。
RNA介導的基因沉默實驗
實驗材料pGEM-T 載體DNA 模板試劑、試劑盒dNTP 混合物DNA 聚合酶（Sigma) 及配套緩沖液限制酶儀器、耗材PCR 純化試劑盒或柱子實驗步驟一、篩選目的基因片段的參數1. 序列( 1 ) 構建一個指定的 RNA 沉默載體首先要進行生物信息學分析。根據目的基因對應的已知 cDNA 序列
RNA介導的基因沉默實驗
實驗材料 pGEM-T 載體DNA 模板試劑、試劑盒 dNTP 混合物DNA 聚合酶（Sigma) 及配套緩沖液限制酶儀器、耗材 PCR 純化試劑盒或柱子實驗步驟 一、篩選目的基因片段的參數1. 序列( 1 ) 構建一個指定的 RNA 沉默載體首先要進行生物信息學分析。根據目的基因對應的已知 c