補體介導的細胞毒實驗

本實驗中，Thy-1抗原是小鼠胸腺T 細胞特異的表面抗原，在體外利用抗小鼠Thy-1 的單克隆抗體通過補體的協同作用，可殺傷95％以上的胸腺細胞。

小鼠

Hank's液抗小鼠Thy-1的單克隆抗體補體伊紅-Y染液

解剖器械平皿不銹鋼網試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片

1.  小鼠胸腺細胞懸液的制備
 

將 4～6 周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank's液的平皿中，在100 目的不銹鋼網上研磨后，過篩，放入試管，離心1000 rpm，5 分鐘，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank's液中，配成1×10⁷ /ml細胞懸液。
 

2.  取試管3 支，標明順序，依據下表依次加入1×10⁷ /ml胸腺細胞懸液、抗小鼠Thy-1 的單克隆抗體（最適稀釋度）及Hank's液，放入37 ℃水浴30 分鐘。

3.  取出后每管加入1 ％伊紅-Y 染液1 滴，混勻，室溫放置2 分鐘。
 

4.  重新混勻后分別在一張載玻片上滴片，加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀察，再用高倍鏡觀察，比較3 管中細胞死活情況。

1.  胸腺細胞制備速度要快，且需在冰浴中進行操作，以保持細胞活力。
 

2.  抗Thy-1 的單克隆抗體和補體的效價要在預實驗中確定。
 

3.  細胞對照管死細胞數若超過5％，實驗需重新做。
 

4.  細胞滴加到載玻片上后長時間放置不檢測也可導致假陽性反應。

一、實驗結果  
 

死細胞呈紅色，無光澤且腫脹變大；活細胞不著色、有光澤且形態正常。
 

高倍鏡下計數 200 個細胞并計算其中死細胞的百分數。

計算公式如下：