【分享】siRNA轉染成功的主要關鍵
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素，細胞轉染實驗中經常會遇到siRNA轉染，下面介紹一下siRNA轉染成功的主要關鍵點。圖片來源于網絡 1.設計合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。siRNA的設計合成首先很重要，最優的設計可以用最小的工作濃度取得滿意的沉 默效果，減少副反應的發生。siRNA的設計可以通過檢索,優先選用經過驗證的siRNA或設計多對siRNA。需要強調的是，需要同時設置陰性對照以排 除非特異沉默現象和陽性對照以確認整個實驗體系的有效性。 2.合成的siRNA注意純度和工作濃度 siRNA的合成需要注意的是一定要選用高純度的siRNA，siRNA的純度直接關系到轉染效率和沉默效率。siRNA的工作濃度和siRNA的設計、細胞種類、目標基因有關。建議一定進行相關的預實驗優化各條件。 3.選擇......閱讀全文
國際ZLRFect小核酸siRNA轉染試劑/miRNA轉染試劑使用說明
介紹?RFect小核酸轉染試劑是國際知名科學家崔坤元博士領導我公司研發團隊在美國西雅圖實驗室研發成功的一種新型的小核酸轉染試劑。RFect可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內的小分子RNA和DNA，轉染細胞包括絕大多數貼壁生長的細胞，如一般細胞株
單核細胞小核酸siRNA轉染試劑/miRNA轉染試劑使用說明
RFectMN單核細胞小核酸轉染試劑 ???????????????????????????????????????????????????????貨 ???號：BIOG-11024: 0.5ml?????? BIOG-11025: 1.0ml ?????????? BIOG-11026: 1.5m
RFect原代細胞小核酸siRNA轉染試劑/miRNA轉染試劑使用說明
RFectPM原代細胞小核酸轉染試劑（RFect原代細胞小核酸siRNA轉染試劑/miRNA轉染試劑）???????????????????????????????????????????????????????貨??? 號：BIOG-11014: 0.5ml????????? BIOG-11015
siRNA的轉染
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：?1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至
siRNA的轉染
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種： 1.磷酸鈣共沉淀 將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉
siRNA－轉染程序
?A．siRNA轉染的方法???哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面：1.???????轉染試劑的用
如何優化GenMuteTM轉染試劑，提高siRNA/DNA共轉染效率？
GenMuteTM siRNA轉染試劑（Cat#SL100568）是市場上最有力的siRNA傳遞工具之一。siRNA/DNA共轉染時，siRNA的最佳濃度范圍是0.5ηM到10ηM，過多的siRNA可能導致沉默效果差的“洪水效應”，切勿使用超過20ηM的siRNA。以24孔板為例，如下步驟將對如何優
siRNA體外轉染——GenMuteTM－siRNA體外轉染的優化
GenMuteTM siRNA轉染試劑（Cat#SL100568）是市場上最有力的siRNA傳遞工具之一。最佳的siRNA濃度范圍是1.0nM到10nM，過多的siRNA可能導致沉默效果差的“洪水效應”。我們實驗室已經使用GenMuteTM轉染試劑成功敲除了內源表達的生長因子。以24孔板為例，如下步
siRNA的轉染方法
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至關
siRNA的轉染方法
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞 中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞 膜并通過胞飲進入目的細胞 的細胞 質。沉淀物的大小和質量對
hepg2細胞siRNA轉染條件
之前我們用過Lipo，說明書上要求細胞的密度在70%左右，同時在轉染后的4-6小時注意要換培養液，后來我們實驗室換了RFect sRNA Transfection Reagent，細胞密度在45%左右 ,設置siRNA終濃度10nM,30nM,50nM,100nM四個梯度，每個梯度最好做2個復孔，一
RNAi及siRNA轉染相關實驗攻略
RNAi 是一種高效的特異性強的基因表達抑制，應用RNAi生物學機制進行基因功能研究已經成為一種創新性的新方法，人們第一次可以如此快速和方便地抑制細胞中特定基因的表達水平，從而用于分析特定基因在細胞中的功能。RNAi 技術還為新藥開發、疾病治療提供了創新性的方法和途徑，有著極其廣闊的應用前景。轉染是
【分享】siRNA轉染成功的主要關鍵
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素，細胞轉染實驗中經常會遇到siRNA轉染，下面介紹一下siRNA轉染成功的主要關鍵點。圖片來源于網絡 1.設計合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。si
轉染試劑：Roche
???? 轉染試劑：Roche[選購寶典]現轉染市場多個新產品涌現而出，一些舊產品更弦易主。一提起羅氏的轉染試劑，大家肯定立馬想到Fugene 6/HD。即使Fugene 6/HD不在手，羅氏也毫不畏懼，因為它集合二十年的轉染經驗，推出了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP轉染試
各種轉染試劑的中文轉染方法
FuGENE6（Roche）轉染步驟： 轉染前一天將細胞分至培養板，轉染當天細胞應50-80％融合。將細胞以1-3×105/2 ml接種于6孔板后孵育過夜將達到如此密度。 將FuGENE6 Reagent在室溫孵育10-15分鐘。使用之前將FuGENE6顛倒混勻一下。 1. 在PCR管中加入不含血
關于轉染試劑的簡介
哺乳動物的轉染技術在60年代末70年代初即已引入。 將外源DNA 導入哺乳動物細胞的方法大致可分為兩大類，即生物方法和物理化學方法。物理化學方法中常用的有磷酸鈣法、顯微注射、電穿孔、脂質體介導的轉染，以及最近出現的以高分子聚合物為載體的基因傳遞技術。生物方法則主要是以病毒作為載體,通過病毒感染
RNA轉染試劑的對比
近期，上海公衛臨床研究中心的一位研究生應用兩種轉染試劑Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen）進行了一次RNA轉染比較。比較情況如下：實驗方法轉染試劑：Turbofect transfection reage
如何優化PolyJet轉染試劑？
我們使用PolyJet DNA轉染試劑轉染表皮細胞及Raw267.4細胞非常有效，并且毒性很小。對于如何更好的優化PolyJet轉染試劑，我樂意分享以下幾點：1、DNA的質與量。DNA的純度對于轉染實驗至關重要。由E Coli制備的DNA，A260/280必須達到1.80甚至更高。對于6孔板，通常每
siRNA實驗成功要點
1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA序列??? 為了找到潛在靶位點，掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析，去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能，siRNA應根據mRNA低二級結構的區域設
siRNA實驗成功的十個要點
1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA 序列為了找到潛在靶位點，掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA 靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析，去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能，siRNA 應根據mRNA 低二級結構
細胞轉染率低－轉染試劑要全背鍋嗎？
細胞轉染低都是PCR試劑的問題嗎？PCR純度不夠確實會有這樣的問題，所以選擇PCR試劑很重要 主要還是以下幾點影響：1. 其他微生物污染您覺得您養的細胞 ，不，不，不 ，可能您只知道您養的是細胞，你不知道的是您的細胞可能背著您養了一群小三，比如支原體，病毒，黑膠蟲等等，特別是支原體它可以更改細胞的特
細胞轉染快準狠GeneCopoeia轉染試劑的適用細胞
細胞轉染是指將外源基因如DNA，RNA等導入細胞內的一種技術。根據哺乳動物細胞蛋白表達流程，細胞培養完成后需進行細胞轉染，根據不同的實驗目的可選擇不同的轉染方法。目前，常用的細胞轉染方法主要分為三類途徑：物理介導（電穿孔法，基因槍法、顯微注射法）、化學介導（脂質體轉染法、磷酸鈣共沉淀法、陽離子聚合物
細胞轉染快準狠GeneCopoeia轉染試劑的適用細胞
細胞轉染是指將外源基因如DNA，RNA等導入細胞內的一種技術。根據哺乳動物細胞蛋白表達流程，細胞培養完成后需進行細胞轉染，根據不同的實驗目的可選擇不同的轉染方法。目前，常用的細胞轉染方法主要分為三類途徑：物理介導（電穿孔法，基因槍法、顯微注射法）、化學介導（脂質體轉染法、磷酸鈣共沉淀法、陽離子聚合物
原代細胞轉染小核酸siRNA等操作步驟和注意事項
原代細胞相對普通傳代細胞要難轉染，但用對了試劑一樣可以擁有很高的轉染效率和實驗結果，下面以RFect為例，簡單介紹下原代細胞轉染的操作步驟和注意事項。原代細胞轉染操作步驟（以24孔培養板為例）：A. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔500 μl培養基（不可加抗生素），使細胞在轉染時密度在30-50
RNAi－實驗介紹
1. RNAi 介紹 RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導
RNAi－實驗介紹
1. RNAi 介紹RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導。這個方法與常規方
DNA體外轉染試劑_如何準備轉染所需的質粒DNA
轉染效率受到諸多因素的影響，除了細胞、培養基和載體等影響因素外，另外一項非常重要的因素便是DNA的質量。為了比較不同廠家的轉染效率，我們分別從三家不同的供應商購買了質粒制備試劑盒來制備pEGFP-N3質粒DNA，并通過不同的方法將制備的pEGFP-N3質粒轉運至NIH-3T3細胞。pEGFP-N3質
用六孔板做siRNA轉染，怎樣才能讓細胞鋪勻
1、一般96孔板,每孔是加100微升細胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后，將未加的細胞懸液混一下再，繼續加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（一般輕巧敲三下），太強或次數太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉（逆時針效果不好），依次
用六孔板做siRNA轉染，怎樣才能讓細胞鋪勻
1、一般96孔板,每孔是加100微升細胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后，將未加的細胞懸液混一下再，繼續加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（一般輕巧敲三下），太強或次數太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉（逆時針效果不好），依次
siRNA對照解析
A．普通陰性對照??1.siRNA實驗應該有陰性對照；2.通用陰性對照為與目的基因的序列無同源性的普通陰性對照；3．Scrambled陰性對照和選中的siRNA序列有相同的組成，但是和mRNA沒有明顯的同源性；4．陰性對照需要確定和目的靶細胞中其它基因同源性很低。??B．熒光標記陰性對照??1. R