siRNA實驗成功要點
1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA序列 為了找到潛在靶位點，掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析，去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能，siRNA應根據mRNA低二級結構的區域設計。美國著名RNA產品公司Ambion提供網上在線設計工具，幫助您更快地完成這項工作。網址為：www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html2. 選擇低GC含量的siRNA Ambion公司研究發現GC含量在40-55%的siRNA比55%以上的活性高。3. 純化體外轉錄siRNA 在轉染前要確認siRNA的大小和純度。為得到高純度的siRNA，推薦用玻璃纖維結合，洗脫（Ambion siR......閱讀全文
siRNA實驗成功要點
1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA序列??? 為了找到潛在靶位點，掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析，去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能，siRNA應根據mRNA低二級結構的區域設
siRNA實驗成功的十個要點
1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA 序列為了找到潛在靶位點，掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA 靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析，去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能，siRNA 應根據mRNA 低二級結構
【分享】siRNA轉染成功的主要關鍵
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素，細胞轉染實驗中經常會遇到siRNA轉染，下面介紹一下siRNA轉染成功的主要關鍵點。圖片來源于網絡 1.設計合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。si
RNAi及siRNA轉染相關實驗攻略
RNAi 是一種高效的特異性強的基因表達抑制，應用RNAi生物學機制進行基因功能研究已經成為一種創新性的新方法，人們第一次可以如此快速和方便地抑制細胞中特定基因的表達水平，從而用于分析特定基因在細胞中的功能。RNAi 技術還為新藥開發、疾病治療提供了創新性的方法和途徑，有著極其廣闊的應用前景。轉染是
RNA干涉實驗——采用RNaseⅢ制備siRNA分子實驗
實驗方法原理首先在體外以長為 200~1000 bp 的 cDNA 為模板轉錄合成正義與反義的單鏈 RNA 分子，然后通過退火形成長的 dsRNA 分子，再用Diccr 核酸酶進行切割得到 siRNA 分子的混合物，通過純化去除沒有被切割的雙鏈 RNA 分子和 DNA 模板以后，siRNA 分子就可
RNA干涉實驗——體外轉錄合成siRNA分子實驗
實驗方法原理采用噬菌體 RNA 聚合酶（T7、T3 或 SP6 RNA 聚合酶）可以很方便地在體外合成 siRNA 分子的正義與反義 RNA 鏈，然后再通過退火形成雙鏈的 siRNA 分子。體外轉錄合成 siRNA 分子與化學合成雙鏈 RNA 分子相比，其成本相對要低得多，而且有研究報道前者對靶基因
siRNA表達框架制備siRNA的方法介紹
siRNA表達框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一種由PCR得到的siRNA表達模版，包括一個RNA pol Ⅲ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol Ⅲ終止位點，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是，SECs
siRNA表達載體制備siRNA的方法介紹
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞中表
siRNA的轉染
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：?1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至
siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段45—50nt的發夾結構RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳動物細胞中的表達,shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA，從而引發基因沉默或者表達抑制。這一類啟動子包括大家熟悉的人
siRNA的轉染
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種： 1.磷酸鈣共沉淀 將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉
siRNA表達框架
siRNA表達框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達模版，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。這個方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一個RNA polⅢ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol I
SiRNA用戶指南
Selection of siRNA duplexes from the target mRNA sequenceUsing Drosophila melanogaster lysates (Tuschl et al. 1999), we have systematically analyzed t
siRNA制備方法
體外制備1.化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3―4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的si
siRNA－Design－Guidelines
Using siRNA for gene silencing is a rapidly evolving tool in molecular biology. There are several methods for preparing siRNA, such as chemical synthe
siRNA對照解析
A．普通陰性對照??1.siRNA實驗應該有陰性對照；2.通用陰性對照為與目的基因的序列無同源性的普通陰性對照；3．Scrambled陰性對照和選中的siRNA序列有相同的組成，但是和mRNA沒有明顯的同源性；4．陰性對照需要確定和目的靶細胞中其它基因同源性很低。??B．熒光標記陰性對照??1. R
siRNA－轉染程序
?A．siRNA轉染的方法???哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面：1.???????轉染試劑的用
諾華開創性siRNA降膽固醇藥物inclisiran－III期項目成功
諾華（Novartis）近日宣布，評估首創小干擾RNA（siRNA）降膽固醇藥物inclisiran治療成人高脂血癥的3項關鍵III期臨床試驗的結果已發表于《新英格蘭醫學雜志》（NEJM）。這3項試驗均達到了主要終點，結果顯示：與安慰劑相比，inclisiran在2劑初始劑量后一年2次皮下注射治
ELISA檢測實驗注意要點
好的試劑，出色的儀器和正確的操作是確保ELISA檢測成果準確牢靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的構成不同而有所差異，國內醫學查驗一般均用板式點。本文將敘說板式ELISA各個操作過程的留心關鍵，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特別儀器合作運用，嚴峻遵從規矩操作，必能得出準確的成果。可
siRNA體外轉染——GenMuteTM－siRNA體外轉染的優化
GenMuteTM siRNA轉染試劑（Cat#SL100568）是市場上最有力的siRNA傳遞工具之一。最佳的siRNA濃度范圍是1.0nM到10nM，過多的siRNA可能導致沉默效果差的“洪水效應”。我們實驗室已經使用GenMuteTM轉染試劑成功敲除了內源表達的生長因子。以24孔板為例，如下步
siRNA的制備方法
化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的siRNA的情況
siRNA的制備方法
化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的siRNA的情況
siRNA制備方法介紹
體外制備1.化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3―4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的si
siRNA的轉染方法
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至關
siRNA－的設計方法
關于設計siRNA以及siRNA設計對siRNA功能的影響，至今還沒有可靠的規律。雖然我們可以通過對mRNA實驗分析準確的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置，但這個過程十分耗時且昂貴，不推薦常規實驗使用。一種做法是每個目標序列設計3－4對siRNAs，實驗選擇較有效的siRNA。?????目前
siRNA的設計方法
關于設計siRNA以及siRNA設計對siRNA功能的影響，至今還沒有可靠的規律。雖然我們可以通過對mRNA實驗分析準確的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置，但這個過程十分耗時且昂貴，不推薦常規實驗使用。一種做法是每個目標序列設計3-4對siRNAs，實驗選擇較有效的siRNA。方法一、根據T
siRNA用戶手冊
The siRNA user guide??(revised May 6, 2004)?Selection of siRNA duplexes from the target mRNA sequenceUsing Drosophila melanogaster lysates (Tuschl et
簡述siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞
siRNA的轉染方法
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞 中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞 膜并通過胞飲進入目的細胞 的細胞 質。沉淀物的大小和質量對
siRNA個人經驗小結
在活體RNAi關鍵點：類似藥物屬性的引入，如穩定性、細胞內的傳送、組織的生物可溶性進入合成的siRNA。授予siRNA類似藥物的屬性化學穩定性的膽固醇共聚的siRNA 顯著的改善了其在體內和體外的藥物屬性。化學穩定性增強的方法：對正義和反義鏈進行部分的phosporothioate backbone