關于外顯子捕獲的簡介
外顯子捕獲(exon trapping) 是構建一種載體，從其插入片段中識別和回收外顯子序列，從而克隆目的基因。捕獲外顯子的載體pETV—SD是一種反轉錄病毒穿梭載體，即可在不同種生物中如大腸桿菌和酵母，細菌和哺乳動物細胞等進行復制的載體。因為凡是有內含子和外顯子的基因在轉錄后都要經過RNA剪接，這就需要有剪接供體(splicing donor，SD)位點和剪接受體(splicing acceptor，SA)位點。因此，SA位點可作為基因的標志。pETV—SD載體的克隆位點上游有一個“外顯子捕獲序列”(exon trap cassette)，可用來識別載體的插入片段中有無SA位點。......閱讀全文
關于外顯子捕獲的簡介
外顯子捕獲(exon trapping) 是構建一種載體，從其插入片段中識別和回收外顯子序列，從而克隆目的基因。捕獲外顯子的載體pETV—SD是一種反轉錄病毒穿梭載體，即可在不同種生物中如大腸桿菌和酵母，細菌和哺乳動物細胞等進行復制的載體。因為凡是有內含子和外顯子的基因在轉錄后都要經過RNA剪接
關于外顯子捕獲的操作步驟介紹
(1)基因組DNA經“霰彈法”切成小片段后，克隆在位于“外顯子捕獲序列”下游的克隆位點上。 (2)將這些重組載體匯總后感染反轉錄病毒的專宿包裝細胞系(ecotropicretroviral packaging cell line)——ψ2細胞系。ψ2細胞提供蛋白質產物使載體(自身不能合成病毒蛋
外顯子捕獲與擴增
? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌菌株 HB101 質粒 pSPL3 COS-7 細胞 載體 pBluescriptⅡ 大腸桿菌 DH5α
外顯子捕獲的操作步驟
(1)基因組DNA經“霰彈法”切成小片段后，克隆在位于“外顯子捕獲序列”下游的克隆位點上。(2)將這些重組載體匯總后感染反轉錄病毒的專宿包裝細胞系(ecotropicretroviral packaging cell line)——ψ2細胞系。ψ2細胞提供蛋白質產物使載體(自身不能合成病毒蛋白質)成
外顯子捕獲的操作步驟
(1)基因組DNA經“霰彈法”切成小片段后，克隆在位于“外顯子捕獲序列”下游的克隆位點上。(2)將這些重組載體匯總后感染反轉錄病毒的專宿包裝細胞系(ecotropicretroviral packaging cell line)——ψ2細胞系。ψ2細胞提供蛋白質產物使載體(自身不能合成病毒蛋白質)成
外顯子捕獲與擴增（一）
實驗材料 大腸桿菌菌株 HB101 質粒 pSPL3COS-7 細胞載體 pBluescriptⅡ大腸桿菌 DH5α試劑、試劑盒 pSPL3 多克隆位點圖譜限制性內切核酸酶PvuⅡT4DNA 連接酶LB 瓊脂平板黏粒載體TESOC 培養基瓊脂糖凝膠LB 肉湯培養基PBS胰酶-EDTA 溶液D
外顯子捕獲與擴增1
本方案以哺乳動物穿梭載體 pSPL3 為例，描述了外顯子擴增的方法，內容分為以下五個階段。階段 1: 文庫的構建; 階段 2: 電穿孔法將文庫轉染 COS-7 細胞; 階段 3:mRNA 的提取; 階段 4: 反轉錄 PCR; 階段 5: 克隆分析。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：
外顯子捕獲與擴增（三）
凝膠瓊脂糖凝膠（1.5%m/V), 用 TBE 配制核酸與寡核苷酸寡核苷酸引物 [20 mmol/L,TE(pH8.0) 配制]分別提取自轉染有對照載體和重組載體的 COS-7 細胞的 RNA(階段 3)。培養基含 50ug/ml 氨芐青霉素的 LB 瓊脂平板專用設備自動微量加樣器所用的加樣器尖頭微
外顯子捕獲與擴增2
階段 3:mRNA 的提取材料緩沖液與溶液按合適比例稀釋貯存液。DEPC 處理水乙醇NaCl(5mol/L)酚酚：氯仿無二價陽離子的磷酸緩沖液（PBS)SDS(5%m/V)TMK 緩沖液10 mmol/LTris-HCl(pH7.5)10 mmol/LKCl1 mmol/LMgCl2Triton X
外顯子捕獲與擴增（二）
材料緩沖液與溶液按合適比例稀釋貯存液。無二價陽離子的磷酸緩沖液（PBS）酶及緩沖液胰酶-EDTA 溶液核酸與寡核苷酸DNA用于轉染的質粒 DNA 制備見本方案階段 1, 步驟 10~12。用作對照的質粒載體（步驟 3)培養基含 10% 熱滅活胎牛血清的 Dulbecco's modified
外顯子捕獲的概念和方法
外顯子捕獲(exon trapping) 是構建一種載體，從其插入片段中識別和回收外顯子序列，從而克隆目的基因。捕獲外顯子的載體pETV—SD是一種反轉錄病毒穿梭載體，即可在不同種生物中如大腸桿菌和酵母，細菌和哺乳動物細胞等進行復制的載體。因為凡是有內含子和外顯子的基因在轉錄后都要經過RNA剪接，這
分子遺傳學詞匯外顯子捕獲
中文名稱：外顯子捕獲外文名稱：exon trapping定義：外顯子捕獲(exon trapping) 是構建一種載體，從其插入片段中識別和回收外顯子序列，從而克隆目的基因。捕獲外顯子的載體pETV—SD是一種反轉錄病毒穿梭載體，即可在不同種生物中如大腸桿菌和酵母，細菌和哺乳動物細胞等進行復制的載體
安捷倫推出全新SureSelect人全外顯子UTR捕獲試劑
超乎尋常的效率;為次日測序準備好外顯子樣品 2012年11月8日，加利福尼亞州圣克拉拉市 ― 安捷倫科技公司(紐約證交所：A)11月8日宣布推出新一代靶向序列捕獲測序產品 SureSelect 人全外顯子 V5 以及 V5 + UTR。做為此項技術的發起機構，新型的全外顯子捕獲解決方案
NimbleGen大麥外顯子組捕獲快速定位多節矮稈突變基因
在農業生產中，性狀相關的基因定位對于科學育種十分重要，傳統的遺傳重組定位具有指導意義和實用價值，但傳統方法周期長、耗費大。隨著二代測序的發展，DNA測序速度大大加快、成本大大降低，使得通過測序法進行的基因定位（mapping-by-sequencing）成為越來越多動植物研究的主要手段。對合適的樣本
關于外顯子混編的介紹
當兩個轉座子被同一轉座酶識別而整合到染色體的臨近位置時，則它們之間的DNA將變得易于被轉座酶作用而轉座。如果它們之間的DNA中含有外顯子，則該外顯子將被切離，并可能插入另一基因之中。這種效應稱為外顯子混編。 即新的基因是由原來的基因打斷后的斷片混編而成的，或者是由編碼蛋白質結構域的基因片段混編
關于外顯子的應用機理介紹
應用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性（polymerasechainreaction-singlestrandconformationpolymorphsim,PCR-SSCP）及DNA直接測序技術檢測68例SAD患者和65名正常老年人的早老素-1基因第5外顯子。
關于外顯子的表達序列介紹
在反式剪接中,不同mRNA的外顯子可以被接合在一起。外顯子在剪接（Splicing）后仍會被保存下來,并可在蛋白質生物合成過程中被表達為蛋白質。外顯子是最后出現在成熟RNA中的基因序列,又稱表達序列。既存在于最初的轉錄產物中,也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。術語外顯子也指編碼相應RNA外
關于外顯子的結果應用介紹
結果發現68例SAD患者中有4例患者的SSCP發生泳動異常,DNA序列分析發現：這4例SAD患者的130號密碼子發了CTG→ATG錯義突變（388位點發生C→A突變）,使氨基酸由亮氨酸變為蛋氨酸（Leu130Met）；157號密碼子發生了GTG→CTG錯義突變（469位點發生G→C突變）,使氨基
電子捕獲檢測器簡介
電子捕獲檢測器（electron capture detector)，簡稱ECD。 電子捕獲檢測器也是一種離子化檢測器，它是一個有選擇性的高靈敏度的檢測器，它只對具有電負性的物質，如含鹵素、硫、磷、氮的物質有信號，物質的電負性越強，也就是電子吸收系數越大，檢測器的靈敏度越高，而對電中性（無電負性
安捷倫推出首款商業化測序外顯子靶向序列捕獲試劑盒
安捷倫科技針對模式生物，推出世界首款 商業化下一代測序外顯子靶向序列捕獲試劑盒???? 2011 年 1 月 19 日，北京——安捷倫科技公司（紐約證交所：A）今日推出 ，這是全球首款可用于模式生物外顯子靶向序列捕獲的商業化系統，用以簡化下一代測序實驗。 ???? 日本 RIKEN
關于全外顯子測序技術
在過去10年里，隨著高通量測序技術的出現與發展，科研與臨床醫學領域的遺傳學檢測范圍不斷擴大，檢測速度不斷加快。時至今天，DNA測序技術不僅推進了遺傳學研究，也被用于各種遺傳疾病的檢查。特別是利用全外顯子組測序（whole exomesequencing，WES）與全基因組測序（wholegenome
關于電子捕獲層析的應用介紹
電子捕獲層析法具有選擇性較好、靈敏度高、檢測限低、易于操作和維修等特點，是分析痕量電負性有機化合物最有效的檢測器，也是當今GC分析各種基質中PCBs廣泛使用的一種檢測器。美國EPA8080A方法將氣相色譜電子捕獲檢測檢測法作為檢測多氯聯苯的標準方法。然而，電子捕獲層析法不能區分PCBs與象4-4
關于外顯子的基本信息介紹
斷裂基因中的編碼序列。外顯子（expressed region）是真核生物基因的一部分。它在剪接（Splicing）后會被保存下來,并可在蛋白質生物合成過程中被表達為蛋白質。外顯子是最后出現在成熟RNA中的基因序列,又稱表達序列。 既存在于最初的轉錄產物中,也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序
電子捕獲檢測器的相關原理簡介
它是利用放射性同位素作為放射源轟擊載氣生成正離子和自由電子，在所施電場的影響下，電子向正極移動，形成了一定的離子流，稱為基流。 當載氣帶著微量的電負性組分（含鹵素、硫、磷、氰基等的化合物）進入時，這些親電子的組分將捕獲電子形成負離子而使基流下降，從而產生檢測信號；生成的負離子與載氣正離子復合成
關于外顯子基因識別的基本介紹
許多基因中遺傳上的“無義”片段——即內含子,會妨礙基因指導蛋白質的合成。現在,一篇發表于3月11日期的《自然遺傳學》雜志上的文章提出了基因識別這些內含子的新機制。 細胞產生一種蛋白質時,首先需要將編碼蛋白質的基因轉化成RNA分子,接下來,通過細胞的剪接機制除去有潛在破壞作用的內含子,再把基因序
氣相色譜電子捕獲檢測器的簡介
早期電子捕獲檢測器由兩個平行電極制成。現多用放射性同軸電極。在檢測器池體內，裝有一個不銹鋼棒作為正極，一個圓筒狀-放射源（3H、63Ni）作負極，兩極間施加流電或脈沖電壓。 工作原理：當純載氣（通常用高純N2）進入檢測室時，受射線照射，電離產生正離子（N2+）和電子e-，生成的正離子和電子在電
關于電子捕獲層析的基本信息介紹
電子捕獲檢測器是分析痕量電負性較強的有機化合物最有效的檢測器，也是放射性離子化檢測器中應用最廣的一種檢測器。電子捕獲層析的作用機理是:利用電負性化合物對放射性電子射線的不同電子俘獲能力。外加一定場強時，放射源的初級電子在電場作用下向正極(收集極)移動，經與載氣分子碰撞，產生更多的次級電子與正離子
關于電子捕獲層析的電子轟擊源的介紹
電子捕獲層析的電子轟擊源（EI）是應用最多的離子源。有機分子被一束電子流（能量一般為70eV）轟擊，失去一個外層電子，形成帶正電荷的分子離子（M+），M+進一步碎裂成各種碎片離子、中性離子或游離基，在電場作用下，正離子被加速、聚焦、進入質量分析器分析。EI源的特點是穩定，電離效率高，能量分散小，
關于電子捕獲檢測器的分類介紹
用于ECD的分類方法很多，熟悉這些分類方法，可以更加了解它們的操作特性，以便在不同分析需要時合理選用。 1．按使用離子源分類 用于ECD的電離源，有放射性同位素源和無放射性兩大類。非放射性ECD雖然已有商品，并有無放射性的優點，但在操作中要用高純度的He以及加添某些稀有氣體作載氣，ECD結構
外顯子混編的功能
即新的基因是由原來的基因打斷后的斷片混編而成的,或者是由編碼蛋白質結構域的基因片段混編而成。這種基因片段可能就是外顯子,因此稱為外顯子混編。