融合基因的制備方法介紹
1、進行目的基因的克隆：根據基因序列互補原則，設計合適的引物序列，以cDNA為模板，利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。2、在載體中進行重組：通過限制內切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收，然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接，并克隆到高表達質粒載體中，構建重組質粒。3、將重組表達載體轉染宿主細胞并利用選擇標志進行篩選及測序。4、融合基因的誘導表達及表達蛋白的純化 。......閱讀全文
融合基因的制備方法介紹
1、進行目的基因的克隆：根據基因序列互補原則，設計合適的引物序列，以cDNA為模板，利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。2、在載體中進行重組：通過限制內切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收，然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接，并克隆到高表達質粒載體中，構建重組質粒。3、
融合蛋白的制備方法介紹
基于重復結構的融合蛋白大多為短肽，不具有復雜的空間結構，因此只需簡單的多肽合成過程即可獲得目標蛋白。由單個氨基酸合成多肽主要通過兩個氨基酸之間脫水形成肽鍵來實現，主要包括以下基本步驟:首先對兩性離子結構的氨基酸進行相應的氨基或羧基保護，其次將羧基活化為活性中間體，待耦合過程結束后，對肽鏈上氨基酸的保
融合蛋白的制備方法介紹
基于重復結構的融合蛋白大多為短肽，不具有復雜的空間結構，因此只需簡單的多肽合成過程即可獲得目標蛋白。由單個氨基酸合成多肽主要通過兩個氨基酸之間脫水形成肽鍵來實現，主要包括以下基本步驟:：首先對兩性離子結構的氨基酸進行相應的氨基或羧基保護，其次將羧基活化為活性中間體，待耦合過程結束后，對肽鏈上氨基
融合蛋白的制備方法
基于重復結構的融合蛋白大多為短肽，不具有復雜的空間結構，因此只需簡單的多肽合成過程即可獲得目標蛋白。由單個氨基酸合成多肽主要通過兩個氨基酸之間脫水形成肽鍵來實現，主要包括以下基本步驟:：首先對兩性離子結構的氨基酸進行相應的氨基或羧基保護，其次將羧基活化為活性中間體，待耦合過程結束后，對肽鏈上氨基酸的
融合蛋白的制備方法
基于重復結構的融合蛋白大多為短肽，不具有復雜的空間結構，因此只需簡單的多肽合成過程即可獲得目標蛋白。由單個氨基酸合成多肽主要通過兩個氨基酸之間脫水形成肽鍵來實現，主要包括以下基本步驟:：首先對兩性離子結構的氨基酸進行相應的氨基或羧基保護，其次將羧基活化為活性中間體，待耦合過程結束后，對肽鏈上氨基酸的
什么叫融合基因－融合基因介紹
1、所謂融合基因，是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連。置于同一套調控序列控制之下，構成的嵌合基因。融合基因的表達產物為融合蛋白。根據構成融合基因的種類，可以將融合基因分為...1、所謂融合基因，是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連。置于同一套調控序列控制之下，構成的嵌合基因。融合基因的表達產物為融
制備融合蛋白的過程介紹
1、進行目的基因的克隆：根據基因序列互補原則，設計合適的引物序列，以cDNA為模板，利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。 2、在載體中進行重組：通過限制內切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收，然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接，并克隆到高表達質粒載體中，構建重組質
融合基因的種類介紹
根據構成融合基因的種類，可以將融合基因分為四大類：（1）由報告基因和功能基因構成的融合基因。常用的報告基因有：GFP（綠色熒光蛋白）基因、GUS基因、LacZ基因和Luciferasese（蟲熒光素酶）基因等，主要目的是對功能基因進行示蹤，研究其功能及特性。 （2）由信號肽或單體蛋白的序列與功能基因
bcr/abl融合基因的基因檢測方法
Southern Blot即DNA印跡，可以對bcr-abl融合基因DNA重排進行分子生物學檢測。將經限制性內切酶酶切及瓊脂糖電泳分離的DNA片段轉移到固相雜交膜上，胚系DNA會產生特征性片段，但發生過基因重排的細胞DNA因酶切位點有所改變會產生有別于胚系的DNA酶切片段。大多數bcr基因的斷裂點集
關于融合基因的分類介紹
根據構成融合基因的種類，可以將融合基因分為四大類： （1）由報告基因和功能基因構成的融合基因。常用的報告基因有：GFP（綠色熒光蛋白）基因、GUS基因、LacZ基因和Luciferasese（蟲熒光素酶）基因等，主要目的是對功能基因進行示蹤，研究其功能及特性。 （2）由信號肽或單體蛋白的序列
細胞融合技術的融合方法介紹
同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合并，稱自發融合；異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合，稱誘發融合。仙臺病毒法融合①兩種細胞在一起培養，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚；②在37℃中，病毒與細胞膜發生反應，細胞膜受到破環，此時需要Ca2+和Mg2+，最適PH為8.0
bcr/abl融合基因的治療方法
CML治療的目的是控制血液學和遺傳學異常、消除癥狀、最大限度地延長生存。抑制劑既然酪氨酸激酶在CML的發生中起了關鍵作用，抑制其活性成為CML治療的一個新途徑。已經合成了較特異的abl酪氨酸激酶抑制劑，即STI-571（伊馬替尼，格列衛）。伊馬替尼是2-苯氨嘧啶衍生物，它可以選擇性地阻斷ATP與Ab
融合基因的技術方法和特點
所謂融合基因，是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連。置于同一套調控序列（包括啟動子、增 強子、核糖體結合序列、終止子等）控制之下，構成的嵌合基因。
融合蛋白的制備步驟
具體步驟為：1、進行目的基因的克隆：根據基因序列互補原則，設計合適的引物序列，以cDNA為模板，利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。2、在載體中進行重組：通過限制內切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收，然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接，并克隆到高表達質粒載體中，構建重
關于bcr/abl融合基因的基因結構介紹
人abl基因位于9號染色體長臂，有1b、1a和2～11共12個外顯子。轉錄始自1b或1a，形成的兩種mRNA長度分別為7kb和6kb，合成的兩種蛋白質分子量均約為145，前者定位于細胞膜，而后者主要在細胞核內。abl主要結構有N端的肉瘤同源2(srchomology，SH2）、SH1。SH2結合
bcr/abl融合基因的抑制劑的治療方法介紹
既然酪氨酸激酶在CML的發生中起了關鍵作用，抑制其活性成為CML治療的一個新途徑。已經合成了較特異的abl酪氨酸激酶抑制劑，即STI-571（伊馬替尼，格列衛）。伊馬替尼是2-苯氨嘧啶衍生物，它可以選擇性地阻斷ATP與Abl激酶結合位點，有效地抑制bcr-abl激酶底物中酪氨酸殘基的磷酸化，使該
基因探針的制備－方法
進行分子突變需要大量的探針拷貝，后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針進，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外重組
關于禽流感基因探針制備方法介紹
將禽流感病毒H9N2亞型毒株核蛋白(NP)基因3′端較為保守的、約350bp的編碼序列通過限制性內切酶Hae¸切割、分離后,用隨機引物法制備Digoxigenin2112dUTP標記探針。測定該探針的濃度為100Lgöml。特異性試驗發現該探針只能與實驗室構建的、含有NP基因的
細胞融合的方法介紹
細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如滅活的仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。
融合蛋白的設計方法介紹
融合蛋白的設計大致分為基于重復結構、基于生長因子以及基于細胞粘附分子3類。第1類融合蛋白中最典型的是來源于彈性蛋白( Elastin-Like Polymers，ELPs) 及絲素蛋白( Silk-Like Polymers，SLPs) 的融合蛋白。ELPs 是一種由數個重復的氨基酸序列組成的細胞外
細胞融合的方法介紹
細胞融合的方法動物細胞雜交或細胞融合 將兩個不同種的親本細胞A和B，以滅活的仙臺病毒或聚乙二醇(PEG)為融合誘導劑，使A和B兩細胞融合成為一個具兩個遺傳性不同核的異核體（如遺傳性相同的核融合在一起叫同核體）。隨后異核體經有絲分裂成為兩個具有A和B兩親本的雜種融合核。AB雜種經多次分裂，B親本的染
融合基因的分類
根據構成融合基因的種類，可以將融合基因分為四大類：（1）由報告基因和功能基因構成的融合基因。常用的報告基因有：GFP（綠色熒光蛋白）基因、GUS基因、LacZ基因和Luciferasese（蟲熒光素酶）基因等，主要目的是對功能基因進行示蹤，研究其功能及特性。 （2）由信號肽或單體蛋白的序列與功能基因
融合基因的概念
融合基因是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連，置于同一套調控序列（包括啟動子、增強子、核糖體結合序列、終止子等）控制之下，構成的嵌合基因。
融合基因的定義
所謂融合基因，是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連．置于同一套調控序列（包括啟動子、增 強子、核糖體結合序列、終止子等）控制之下，構成的嵌合基因。
融合基因的定義
融合基因是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連,置于同一套調控序列(包括啟動子、增強子、核糖體結合序列、終止子等)控制之下,構成的嵌合基因。融合基因的表達產物為融合蛋白。
融合基因的定義
融合基因是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連,置于同一套調控序列(包括啟動子、增強子、核糖體結合序列、終止子等)控制之下,構成的嵌合基因。融合基因的表達產物為融合蛋白。
基因芯片的制備方法
基因芯片的片基主要有硅片、玻璃片、硝酸纖維膜、聚丙烯膜等寡核苷酸芯片以人工合成的寡核苷酸片斷作為探針,制備方法主要有原位合成法和合成后點樣法。而 cDNA 芯片以長片斷的 PCR 產物作為探針,制備方法主要為合成后點樣法。(1)原位合成法? 制備寡核苷酸芯片原位合成法設備昂貴,技術復雜。(2)合成后
融合蛋白的制備具體步驟
1、進行目的基因的克隆：根據基因序列互補原則，設計合適的引物序列，以cDNA為模板，利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。2、在載體中進行重組：通過限制內切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收，然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接，并克隆到高表達質粒載體中，構建重組質粒。3、
構建融合蛋白的基本方法介紹
構建融合蛋白的基本方法是將具有特定功能的天然或人工編碼的多肽序列模塊化，并使用基因編碼的DNA序列模板合成，隨后將第1個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第2個蛋白基因，以實現兩個基因的共同表達。通過控制每一個功能肽模塊在整體蛋白材料中的確切位置和密度，人們便能夠根據實際需要改變融合蛋白的
關于細胞融合的方法介紹
同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合并，稱自發融合；異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合，稱誘發融合。 一、仙臺病毒法融合 ①兩種細胞在一起培養，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細胞 膜上。并使兩細胞相互凝聚； ②在37℃中，病毒與細胞膜發生反應，細胞膜受到破環，此時需 要Ca2+