western一抗用什么稀釋比較好
可以用加了脫脂奶粉的封閉液,也可以用TBST液。如果顯色用的是紅外熒光二抗,則只能用TBS液稀釋。......閱讀全文
western如何孵一抗
將抗體稀釋到推薦濃度,這要是看你放膜的容器大小,如果容器剛好和膜差不多,只要配少量的一抗溶液就可以完全覆蓋膜,但是如果容器較大,就需要事先看多少ml的溶液才能夠用。抗體溶液倒到膜上后,將容器放到一個水平搖床,或者是染色搖床上,緩慢的搖動。可以在4C過夜孵育,也可以在室溫孵育1h即可。
western-glut4一抗,二抗怎么配置
配制抗體的時候有兩樣東西比較關鍵:溶解抗體的溶液或稀釋液,通常如果只是溶解抗體,可能會建議用PBS或者TBS,提供中性環境,以幫助抗體的保存。如果已經是液體,只是需要稀釋做實驗的話,一般會用封閉液(BSA溶液,脫脂奶粉,注脫脂奶粉稀釋后的抗體無法再次使用),或者是洗液(TBST或PBST)。抗體的濃
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重復用么
保存得當的話,一抗工作液可重復利用2-3次一般不影響效果,但也不絕對,主要是看你的抗體本身如何,如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這么做了。二抗還是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot中的一抗如何選擇
一般選擇的原則是去文獻中找,看看別人做和你一樣的目的蛋白的時候用的都是哪家得抗體,都有介紹的,看看圖片效果怎么樣。多找出一些文獻,然后根據你掌握的信息選擇一種最便宜,最高效,特異性最好的抗體。一般做科研的人都是這么選擇抗體的,不能蒙著買,畢竟不便宜的。
western-blot-一抗用什么溶劑溶解
western blot 一抗一般都是以原液的形式保存的,不需要用溶劑溶解western blot 一抗使用的時候一般只需要稀釋,購買時廠家應該會提供一抗稀釋液。如果沒有一抗稀釋液可以用TBST或者PBST稀釋,這個要看具體使用的情況了
western-blot-一抗用什么溶劑溶解
western blot 一抗一般都是以原液的形式保存的,不需要用溶劑溶解western blot 一抗使用的時候一般只需要稀釋,購買時廠家應該會提供一抗稀釋液。如果沒有一抗稀釋液可以用TBST或者PBST稀釋,這個要看具體使用的情況了
如何在Western-Blot中選擇一抗?
說到免疫印跡最重要的就是抗體的選擇了。在免疫印跡中我們會用到一抗和二抗等抗體,本文著重給大家介紹一下一抗的選擇。一抗就是能和特異性抗原特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。抗體因其種屬來源不同可以分為多種類型,如鼠抗,兔抗,羊抗等等,那么在使用時我們應該怎么選擇呢?檢測任何一種目的蛋白都
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般根據抗體的特異性和親和度。一抗的濃度范圍比較大,從1:200到1:1000都有,這個要多做幾次才能確定。二抗的稀釋倍數打,一般用1:5000到1:10000就可以了。
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般抗體的說明上,都給出了一個范圍,一抗為1:200-2000,二抗為1:1000-10000。western blot 的原理:本質是抗原抗體反應。第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般抗體的說明上,都給出了一個范圍,一抗為1:200-2000,二抗為1:1000-10000。western blot 的原理:本質是抗原抗體反應。第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般根據抗體的特異性和親和度。一抗的濃度范圍比較大,從1:200到1:1000都有,這個要多做幾次才能確定。二抗的稀釋倍數打,一般用1:5000到1:10000就可以了。
western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少
一般抗體的說明上,都給出了一個范圍,一抗為1:200-2000,二抗為1:1000-10000。western blot 的原理:本質是抗原抗體反應。第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體
Western-Blot-一抗二抗去除液(酸性)使用說明
ECL 化學發光法是目前最常用、最靈敏的 Western Blot 檢測方法。由于這些底物不會在膜表面沉淀、牢牢結合在膜上,因此可以通過一抗二抗去除液(Stripping buffer)將親和結合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強烈而有效解離結合的抗體,也要足夠溫和使轉移的目標蛋白仍
做western-blot-的一抗孵育的原理
只是簡單的抗原抗體反應而已,抗體的氨基酸序列與抗原氨基酸序列相互匹配才能發生反應。所以不同的蛋白質要選擇與其相對應的抗體,是特異性反應。
做western-blot-的一抗孵育的原理
只是簡單的抗原抗體反應而已,抗體的氨基酸序列與抗原氨基酸序列相互匹配才能發生反應。所以不同的蛋白質要選擇與其相對應的抗體,是特異性反應。
western用過的一抗可以回收再用嗎
中間做過strip嗎?是不是strip的太劇烈了,把膜上的蛋白完全都剝掉了。嘗試用一些溫和的剝脫方法,降低溫度,降低SDS濃度和處理時間可能會有改善。另外如果膜上蛋白敏感,有降解等因素,也可能會導致檢測不到。需要確認一下。
western-一抗用什么稀釋比較好
可以用加了脫脂奶粉的封閉液,也可以用TBST液。如果顯色用的是紅外熒光二抗,則只能用TBS液稀釋。
western用過的一抗可以回收再用嗎
中間做過strip嗎?是不是strip的太劇烈了,把膜上的蛋白完全都剝掉了。嘗試用一些溫和的剝脫方法,降低溫度,降低SDS濃度和處理時間可能會有改善。另外如果膜上蛋白敏感,有降解等因素,也可能會導致檢測不到。需要確認一下。
western膜一抗放兩天行嗎
在四度冰箱中可以的,拿出來后一抗多洗一會沒事的,不然可能會背景有點深,我最長敷過四天呢,妥妥的。
western-blot中的一抗是甚么東西
一抗就是用來和你要檢測的蛋白發生免疫反應的抗體確定了需要檢測樣品的種屬,就可以選擇對應的一抗而二抗是根據一抗來選擇的,比如一抗是小鼠來源的,二抗就要是抗小鼠的
Western用的一抗,單抗好些還是多抗好些?
做Western來講,理論上單抗比多抗的特異性要好,但單抗種類較少,一般價格偏高,所以一般來說多抗足夠了。用于Western的抗體和用于ELISA的抗體,一般來說用于Western的抗體識別的是氨基酸序列特異性,而可用于ELISA的抗體要看抗原種類,有些是識別氨基酸序列特異性,有些是識別構象特異性,
沒有注明可以用來做Western-blot的一抗可以用來做Western-...
沒有注明可以用來做Western?blot的一抗,可以用來做Western?blot嗎?不一定,因為有的抗體是識別線性表位的,有的是識別構象型表位,識別構象型表位的抗體不能用于Western?blot,因為在Western?blot中抗體識別的是完全變性的蛋白質抗原,而蛋白質抗原的構象型表位變性時被
western-blot中一抗封閉時間過長會有什么后果
如果一抗封閉時間過長,非特異性的條帶也會被染上一抗,這樣再染二抗的時候,二抗和一抗結合,顯影后背景深且非特異性條帶會很多
western-blot中一抗封閉時間過長會有什么后果
如果一抗封閉時間過長,非特異性的條帶也會被染上一抗,這樣再染二抗的時候,二抗和一抗結合,顯影后背景深且非特異性條帶會很多
western-blot中一抗封閉時間過長會有什么后果
如果一抗封閉時間過長,非特異性的條帶也會被染上一抗,這樣再染二抗的時候,二抗和一抗結合,顯影后背景深且非特異性條帶會很多
western-blot中一抗封閉時間過長會有什么后果
如果一抗封閉時間過長,非特異性的條帶也會被染上一抗,這樣再染二抗的時候,二抗和一抗結合,顯影后背景深且非特異性條帶會很多
western-blot-一抗孵育4小時有影響嗎
western blot 一抗孵育4小時當然有影響的,一抗孵育時間太長容易導致非特異性吸附加深一般可以室溫孵育三十分,然后四度過夜。或者選擇室溫孵育2小時直接二抗。因為洗膜洗去的是未結合的抗體,抗體結合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景會深,但洗膜時間延長并不能完全去除背景。
western-blot-一抗孵育4小時有影響嗎
western blot 一抗孵育4小時當然有影響的,一抗孵育時間太長容易導致非特異性吸附加深一般可以室溫孵育三十分,然后四度過夜。或者選擇室溫孵育2小時直接二抗。因為洗膜洗去的是未結合的抗體,抗體結合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景會深,但洗膜時間延長并不能完全去除背景。