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  • DNA測序原理、儀器試劑和操作步驟2

    【操作步驟】1.PCR測序反應(1) 取0.2ml的PCR管,用記號筆編號,將管插在顆粒冰中,按下表加試劑: 所加試劑測定模板管標準對照管 BigDye Mix 1μl 1μl 待測的質粒DNA 1μl- pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA-1μl 待測DNA的正向引物1μl- M13(-21)引物-1μl 滅菌去離子水2μl 2μl 總反應體積5μl,不加輕礦物油或石蠟油,蓋緊PCR管,用手指彈管混勻,稍離心。 (2) 將PCR管置于9600或2400型PCR儀上進行擴增。98℃變性2min后進行PCR循環,PCR循環參數為96℃ 10s,50℃ 5s,60℃4min,25個循環,擴增結束后設置4℃保溫。 2.醋酸鈉/乙醇法純化PCR產物 (1) 將混合物離心,將擴增產物轉移到1.5ml EP管中。 (2) 加入25μ......閱讀全文

    DNA測序原理、儀器試劑和操作步驟2

    【操作步驟】1.PCR測序反應(1) 取0.2ml的PCR管,用記號筆編號,將管插在顆粒冰中,按下表加試劑: 所加試劑測定模板管標準對照管 BigDye Mix 1μl 1μl 待測的質粒DNA 1μl- pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA-1μl 待測

    DNA測序原理、儀器試劑和操作步驟1

    DNA序列測定分手工測序和自動測序,手工測序包括Sanger雙脫氧鏈終止法和Maxam-Gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今DNA序列分析的主流。美國PE ABI公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA測序儀,其中310型是臨床檢測實驗室中使用最

    DNA酶切及凝膠電泳實驗原理、儀器試劑和操作步驟

    【實驗原理】DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖-磷酸骨架在結構上的重復性質,相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此他們能以相同的速度向正極方向移動。在一定的電場強度下,DNA 分子的遷移速度取決于分子

    操作步驟/DNA測序儀

    pcr測序反應(1) 取0.2ml的pcr管,用記號筆編號,將管插在顆粒冰中,按下表加試劑:所加試劑 測定模板管 標準對照管bigdye mix 1μl 1μl待測的質粒dna 1μl -pgem-3zf (+) 雙鏈dna - 1μl待測dna的正向引物 1μl -m13(-21)引物 - 1μl

    DNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗原理、儀器試劑和操作步驟

    一、原理DNA在堿性的溶液中帶有負電荷,因此,在電場作用下朝正極移動。在瓊脂糖凝膠中電泳時,由于瓊脂糖凝膠具有一定孔徑,長度不同的DNA分子由于所受凝膠的阻遏作用大小不一,遷移的速度不同,從而可以按照分子量大小得到有效分離。溴化乙錠可插入到DNA分子的雙鏈中。在紫外光的照射下,插入溴化乙錠的DNA呈

    免疫沉淀實驗原理、儀器試劑和操作步驟

    (一)原理免疫沉淀是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與蛋白 A/G(Protein A/G)或二抗偶聯的agaose或Sepharose珠子孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物,沉淀經洗滌后,重懸于電泳上

    雙脫氧鏈終止法測定DNA序列實驗原理、操作步驟和儀器...2

    3.制備電泳凝膠及電泳(1)制備膠模:取雙塊制膠玻板,先用泡沫海綿沾“洗潔凈”液仔細擦洗,用水徹底淋洗,干燥后繼用酒精清洗,晾干,再用硅烷劑(repel- silane)將玻板的—面擦一遍,蒸餾水淋洗,干燥 (注意:清洗時應戴一次性手套操作)。將其中一塊玻板平置臺上(硅烷處理過的—面朝上),兩側各放

    DNA測序儀的操作步驟

      醋酸鈉/乙醇法純化pcr產物  (1) 將混合物離心,將擴增產物轉移到1.5ml ep管中。  (2) 加入25μl醋酸鈉/乙醇混合液,充分振蕩,置冰上10min以沉淀dna。12 000r/min于4℃離心30 min,小心棄上清。  (3) 加70%(v/v)的乙醇50μl洗滌沉淀2次。12

    DNA測序儀的操作步驟

      pcr測序反應  (1) 取0.2ml的pcr管,用記號筆編號,將管插在顆粒冰中,按下表加試劑:  所加試劑 測定模板管 標準對照管  bigdye mix 1μl 1μl  待測的質粒dna 1μl -  pgem-3zf (+) 雙鏈dna - 1μl  待測dna的正向引物 1μl -  

    細胞傳代培養原理、儀器試劑和操作步驟

    一、原理細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。二、材料和試劑1、細胞:貼壁細胞株2、試劑

    酵母RNA的提制實驗原理、儀器試劑和操作步驟

    一、目的:學習和掌握從酵母中提制RNA 的原理和方法,從而加深對核酸性質的認識。二、原理:提取和制備RNA 的首要問題是選RNA 含量高的材料。微生物是工業上大量生產核酸的原料,其中RNA 的提制以酵母最為理想,因為酵母核酸中主要是RNA(2.67~10.0%),DNA 很少(0.03~0.51

    感受態菌的制備原理、儀器試劑和操作步驟

    1.目的學會CaCl2法制備大腸桿菌感受態細胞。2.原理細菌在0℃ CaCl2低滲溶液中脹成球形,丟失部分膜蛋白,成為容易吸收外源DNA的狀態。3.器材旋渦混合器,微量移液取樣器,移液器吸頭,50ml 微量離心管,1.5ml 微量離心管,雙面微量離心管架,臺式冷凍離心機,制冰機,恒溫搖床,分光光度計

    Western印跡法(試劑配制和操作步驟)2

    (二)使用液單去污劑裂解液(50mmol/L Tris?HCl pH8.0,150mmol/L NaCl,1%TritonX-100,100?g/ml PMSF):1mol/L Tris?HCl(pH8.0) 2.5mlNaCl 0.438gTritonX-100 0.5ml蒸餾水至 50ml混勻后

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    一、準備工作1. BigDye測序反應試劑盒 主要試劑是BigDye Mix,內含PEZL四色熒光標記的ddNTP和普通dNTP,AmpliTaq DNA polymerase FS,反應緩沖液等。2. pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA對照模板 0.2 g/L,試劑盒配套試劑。3. M13(-2

    DNA提取試劑盒的工作原理及操作步驟

    一、RNA和DNA提取:裂解:裂解公式可能因您要提取 DNA 還是 RNA 而異,但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes(離液劑)的作用:Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑:除了離液劑外,裂解緩沖液中通常還有一些去

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    7.探針的制備1.在1.5ml離心管中配制以下反應液:模板DNA(25 ng)     1ulRandom Primer 2ul滅菌水 11ul總體積:14ul2.95°C加熱3分鐘后,迅速放置于冰冷卻5min。3.在離心管中按下列順序加入以下溶液:10×Buffer 2.5uldNTP Mixtu

    DNA測序原理和方法

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    DNA測序方法中自動測序法的操作步驟

    基因分析儀(即DNA測序儀),采用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯酰胺平板電泳,應用該公司專利的四色熒光染料標記的ddNTP(標記終止物法),因此通過單引物PCR測序反應,生成的PCR產物則是相差1個堿基的3'末端為4種不同熒光染料的單鏈DNA混合物,使得四種熒光染料的測序PCR產物可在一根毛

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    ABI-310型DNA測序儀的測序原理和操作規程

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    限制性內切酶切割DNA的原理、儀器試劑和步驟

    一、實驗目的1.通過對DNA的酶切,學會設計構建體外重組DNA分子;2.根據目的基因合理選擇載體與限制性內切酶;3.掌握DNA的酶切技術。 二、實驗原理 限制性內切酶是從細菌中分離出來的一種能在特異位點切割DNA分子的核酸內切酶,目前已從多種細菌中分離出超過400種,識別各自不同的核苷

    DNA的酶切實驗原理和操作步驟

    一、實驗目的 本實驗學習、了解限制性內切酶的特性,學習根據具體目的設計適當的酶切體系并實施之。 二、實驗原理 利用限制性內切酶切割DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一。成功的酶切為后續工作提供了有效的實驗材料。限制性內切酶是細菌體內限制修

    重組DNA的轉化實驗原理和操作步驟

    實驗目的制備出感受態細胞,把體外重組的DNA引入受體細胞,使受體菌具有新遺傳性,并從中選擇出轉化子。實驗原理感受態就是細菌吸收轉化因子的生理狀態,只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子。pUC18的LacZ基因區域當有DNA片段插入時,LacZ基因失活,轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和

    質粒DNA的酶切原理和操作步驟

    1.目的學會用限制性內切酶切割質粒DNA。2.原理II型限制性內切酶能識別雙鏈DNA內部的特殊序列并在識別位點處將雙鏈切斷,形成粘性末端或齊平末端,通過電泳酶切后的DNA混合物能夠確認和分離酶切片段。3.器材旋渦混合器,微量移液取樣器,移液器吸頭,1.5ml微量離心管,雙面微量離心管架,水漂,恒溫水

    PCR擴增DNA(PCR-Amplify-DNA)實驗原理、材料和操作步驟

    【實驗原理】聚合酶鏈反應(polymerasechainreaction,PCR)是一種體外 DNA擴增技術,1985年由Mullis等人創立。該技術能在幾小時的實驗操作中,將人為選定的一段DNA擴增幾百萬倍,具有靈敏度高、特異性強、操作簡便和應用廣泛等優點,目前已成為分子生物學及基因工程中極為

    DNA測序方法鳥槍法的操作步驟

    “鳥槍法”是一種由生物基因組提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超聲波等)或酶化學方法(如限制性內切核酸酶)將生物細胞染色體DNA切割成為基因水平的許多片段,繼而將這些片段與適當的載體結合,將重組DNA轉入受體菌擴增,獲得無性繁殖的基因文庫,再結合篩選方法,從眾多的轉化子菌株中選出含有某

    雙脫氧鏈終止法測定DNA序列實驗原理、操作步驟和儀器...3

    3.單鏈模板的分離(1)沉淀M13:在上述M13培養物上清中,加入0.2倍體積的3.5mol/L醋酸銨/20%多聚乙二醇溶液,顛倒混勻數次,置冰浴30分鐘。離心15-30分鐘(11000g)可見白色噬菌體沉淀。小心除去上清液,可將試管倒置并吸去多余液體。(2)分離純化模板:向沉淀中加入TE緩沖液10

    人体艺术视频