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實驗方法原理 實驗材料 貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒 PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU 培養基篩選試劑4 dNTP 混合物MgCl2儀器、耗材 24 孔組織培養板杯狀超聲儀實驗步驟 實驗試劑準備詳見「其他」。1. 吸出匯片生長單層細胞的培養基。1.1 對于 XGPRT 篩選，用 BS-C-1 細胞。1.2 對于 TK 篩選，用 HuTK-143B 細胞。2. 用 37℃ 的 PBS 或胰酶/EDTA 洗細胞 1 次，以除去剩余血清。3. 用剛好覆蓋單層細胞、37℃ 的胰酶/EDTA（對于 150 cm2 培養瓶需要 1.5 ml）覆蓋細胞。消化 30 s （細胞應該分開），晃動培養瓶使細胞完全分開。4. 加入 8.5 ml 適當培養基。......閱讀全文
發現艾滋病31年后，首個用于未受感染人群預防的藥物在今年7月16日被美國FDA批準上市。10天后結束的第19屆世界艾滋病大會上，首位被治愈者現身，人們看到了控制艾滋病疫情的曙光。 記者昨天從北京佑安醫院獲悉，我國科技重大專項艾滋病疫苗Ⅱ期臨床試驗已于上周在該院啟動，首批31名
實驗方法原理將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9
實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料 pSCll／pRB21／pSC65／pLW
CaCl2 法 DOTAP 法 實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，
實驗方法原理將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9
實驗方法原理本方案用DNA點跡雜交檢測噬斑以鑒定重組病毒。像點跡雜交一樣，將感染細胞裂解物印跡在硝酸纖維素膜上（可參考「痘苗DNA檢測實驗」中「斑點雜交法」）。用可以識別外源基因表達蛋白的抗體與膜一起孵育，用125I 標記的蛋白 A 檢測結合的抗體，還可應用化學發光檢測系統，如 Amersham E
如果提取的痘苗病毒DNA用于轉染，則應在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分離。具體方法見本實驗。實驗材料純化的痘苗病毒試劑、試劑盒Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材分光光度計Sorval
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度離心的方法純化。純化的病毒可用于制備痘苗病毒 DNA ，用于不允許存在感染細胞蛋白污染的研究中，同時也可以用作高滴度的病毒儲液。對于大規模的純化（至少 1 L 的培養物），最好的方法是用 HeLa 細胞懸液作為感染的對象，而不要用單層培養的細胞。內容來源于《精編分子生物學
據科技日報北京12月1日電 在第20個世界艾滋病日到來之際，我國艾滋病研究又傳來振奮消息：DNA—天壇痘苗復合型艾滋病疫苗于今天在北京協和醫院開始第一組志愿者的疫苗接種，這標志著我國用一種全新方法研制的艾滋病疫苗進入Ⅰ期臨床試驗。該艾滋病疫苗是在國家863計劃課題及歐盟第五框架INCO項目的資助下，
實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒試劑、試劑盒 Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材 分光光度計Sorvall 離心機實驗步驟 1. 在 260 nm 處確定純化的疸苗病毒的光密
基本方案 實驗方法原理 實驗材料
除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞或 BHK-21 細胞代替 HeLa 細胞。實驗材料 痘苗病毒儲液HeLa S3 細胞（懸浮培養）試劑、試劑盒 胰酶Tris ? Cl蔗糖儀器、耗材 旋轉
大規模純化 實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是
據新華社電 中國疾病預防控制中心艾滋病預防控制中心首席專家邵一鳴昨天在北京表示，一種中國具有自主知識產權的艾滋病疫苗Ⅰ期臨床試驗第一階段已經結束，結果顯示疫苗“非常安全，效果非常好”。 由中國疾病預防控制中心與北京生物制品研究所聯合研制的DNA—天壇痘苗復合型艾滋病疫苗自2007年12月1日開
“在國家科技重大專項支持下，我國自主知識產權的艾滋病疫苗研究取得了進展，各項目按計劃完成了研究任務。”5月11日，在上海舉行的第五次中國科協論壇中國艾滋病疫苗高層論壇上，中國艾滋病疫苗聯盟執行委員會主席、中國疾病預防控制中心艾滋病首席專家邵一鳴教授透露。 匯集了
在5月11日上海舉行的第五次中國科協論壇中國艾滋病疫苗高層論壇上，中國疾病預防控制中心艾滋病首席專家、中國艾滋病疫苗聯盟執行委員會主席邵一鳴透露，在國家科技重大專項支持下，我國自主知識產權的艾滋病疫苗計劃取得階段性進展。 邵一鳴介紹，由10余家研究所、高校和疫苗企業組成的團
科學通報，中國科學C輯:生命科學，這兩份期刊均是由中國科學院和國家自然科學基金委員會共同主辦的，我國學術期刊中的知名品牌，被國內外各主要檢索系統收錄，如國內的《中國科學論文與引文數據庫》(CSTPCD)、《中國科學引文數據庫》(CSCD)等;美國的SCI、CA、EI，英國的SA，日本的《科技文獻
形成中國4G標準提案 “中國在具有自主知識產權的第三代移動通信(3G)技術標準——TD-SCDMA的基礎上，研究開發出TD-LTE技術，形成了4G(TD-LTE-Advanced)技術標準提案，并已成為國際電信聯盟(ITU)確定的國際4G候選技術標準之一。”國家科技重大專項“新一代寬帶
實驗方法原理以前，用 HindIII 限制性內切核酸酶消化鑒定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重組病毒的 TK 基因中，TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。這樣在重組病毒中，如果插入片段上沒有 HindIII 內切酶位點，則J片段就會增大。如果缺乏 HindIII 5
一、天然抗原 根據抗原性物質與機體的親緣關系可分為“自己”（self)與“非已”（non-self)抗原。即與機體種系發生關系愈遠，其遺傳性差異越大，其免疫原性也愈強。 （一)“自己”抗原 正常自身組織成分及體液組分處于免疫耐受狀態，不能激發免疫應答，但如打破自身耐受，則可引起自
（轉載自：藥明康德公眾號） 自18世紀末首次誕生以來，疫苗就成為了人們健康的“護身符”，它的出現使無數人能更好地預防疾病。在這次疫情中，用疫苗來預防新型冠狀病毒導致的疾病，也是大眾翹首以盼的方向之一。據不完全統計，全球范圍內已經有超過20家創新生物技術和醫藥公司在進行新型冠狀病毒疫苗的研發。
（四）分子病毒學的研究時期 自從1953年DNA雙螺旋結構理論建立以來，由于分子生物學的迅速發展，新技術和新方法的應用，使得病毒學的研究步入了分子病毒學的發展時期。50年代至60年代是分子生物學的奠基時代，而病毒特別是噬菌體和植物病毒為此做出了巨大的貢獻,因此分子病毒學也正是分子生物學的發展過程中
重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染 兩種重組痘苗病毒共感染細胞 實驗方法原理
實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質粒載體開始，然后用重組質粒通過脂質體介導轉染已經被vTF7-3（可以持續表達T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的細胞。收獲后，基因產物在細胞內的表達可以用脈沖標記的方法或用「重組痘苗病毒及其產物的鑒定實驗」中敘述的方法分
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體 T7 RNA 聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶啟動子（PT7）的控制下。應用脂質體轉染，重組質粒進入感染了 vTF7-3 的細胞質中，而 vTF7-3 是一種能編碼噬菌體T7 RNA聚合酶的重組痘苗病
實驗方法原理VOTE是最近發展的痘苗病毒/T7 RNA聚合酶混合表達系統，將外源基因克隆到質粒 pVOTE. 1或 pVOTE. 2 中，通過同源重組將其整合到痘苗病毒 vT7lacOI 基因組中，制備重組病毒儲液。在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）存在的條件下，用重組病毒感染細胞，外源基因
四、微生物學診斷 （一)病毒分離 采取病人唾液，脊髓液及口腔、宮頸、陰道分泌液，或角膜結膜刮取物等接種易感細胞中培養1～2天，出現細胞腫用脹，變圓，相互融合等病變，可作初步診斷。然后用免疫熒光法（IFA)，酶聯免疫吸附試驗（ELISA)進行鑒定，確診HSV。必要時進行分型。 （二
原子力顯微鏡以其操作方便，對樣品處理要求不高，原子級分率低，樣本可在空氣中成者液體中直接觀察，可檢測的樣品范圍廣等優點，贏得了越越廣闊的應用，利用AFM可以觀察生物制品的形態結構、檢測生物力、觀察品體的三結構及插體的生長等，這勢必會進一步推動生命科學，材料科學的一步發展。 一、生命科學中的
近日，行業媒體GEN網站統計了基因治療發展的程度。據Informa Pharma Intelligence的Trialtrove數據庫記錄，目前有729種基因療法，其中近三分之二（461種）為臨床前研究。這些療法已經在1,855項臨床試驗中進行了評估，大部分為早期階段。 基因治療扎堆最多的