重組質粒的連接、轉化及篩選
實驗材料 外源DNA 片段試劑、試劑盒 連接反應緩沖液T4 DNA 連接酶X-gal儲液IPTG儲液麥康凱選擇性培養基儀器、耗材 恒溫搖床臺式高速離心機恒溫水浴鍋電泳裝置電熱恒溫培養箱電泳儀移液槍eppendorf管......閱讀全文
重組質粒的連接、轉化及篩選
實驗材料 外源DNA 片段試劑、試劑盒 連接反應緩沖液T4 DNA 連接酶X-gal儲液IPTG儲液麥康凱選擇性培養基儀器、耗材 恒溫搖床臺式高速離心機恒溫水浴鍋電泳裝置電熱恒溫培養箱電泳儀移液槍eppendorf管
重組質粒的連接、轉化及篩選
第一節 概 述質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆 較小的DNA 片段(＜10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆 ,從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段, 然后體外使兩者相連接, 再用所得到重組質粒轉化細菌,即可完成。但在實
重組質粒的連接、轉化及篩選
重組質粒的連接、轉化及篩選主要用于獲得含有目的基因連接的重組子。實驗方法原理用特定的限制性內切酶切割載體DNA和外源DNA片段并進行純化，于體外使兩者相連接(若用T-載體，可直接用純化的PCR產物進行連接)，轉化宿主細菌后，利用藍白斑篩選原理對重組子進行挑選。由于載體上帶有Amp'和lacZ
重組質粒的連接、轉化及篩選
第一節 概 述質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆 較小的DNA 片段(＜10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆 ,從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段, 然后體外使兩者相連接, 再用所得到重組質粒轉化細菌,即可
重組質粒的連接、轉化及篩選
重組質粒的連接、轉化及篩選主要用于獲得含有目的基因連接的重組子。實驗方法原理用特定的限制性內切酶切割載體DNA和外源DNA片段并進行純化，于體外使兩者相連接(若用T-載體，可直接用純化的PCR產物進行連接)，轉化宿主細菌后，利用藍白斑篩選原理對重組子進行挑選。由于載體上帶有Amp'和lacZ
重組質粒的連接、轉化及篩選
材料、設備及試劑 一、 材料 外源DNA片段: 自行制備的帶限制性末端的DNA溶液,濃度已知; 載體DNA: T-vector(Ampr ,lacZ),自行提取純化,濃度已知; 宿主菌: E. coli DH5α,或JM系列等具有α-互補能力的菌株。 二、 設備 恒溫搖床，臺式高速離心機，恒
重組質粒的連接、轉化及篩選
實驗概要本技術以pBS質粒、E. coli DH5α為例介紹了重組質粒的連接、轉化及篩選。實驗原理本實驗所使用的載體質粒DNA為pBS，轉化受體菌為E.coli DH5α菌株。由于pBS上帶有Ampr 和lacZ基因，故重組子的篩選采用Amp抗性篩選與α-互補現象篩選相結合的方法。因pBS帶有Amp
重組質粒（dna－recombinant－plasmid）的連接、轉化及篩選2
第二節 材料、設備及試劑一、 材料外源DNA 片段: 自行制備的帶限制性末端的DNA 溶液,濃度已知; 載體DNA : pBS質粒(Ampr ,lacZ),自行提取純化,濃度已知; 宿主菌: E. coli DH5α,或JM系列等具有α-互補能力的菌株。二、 設備恒溫搖床，臺式高速離心機，恒溫水浴鍋
重組質粒（dna－recombinant－plasmid）的連接、轉化及篩選1
第一節 概 述質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆 較小的DNA 片段(＜10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆 ,從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段, 然后體外使兩者相連接, 再用所得到重組質粒轉化細菌,即可完成
重組質粒的轉化、篩選和鑒定
一、實驗目的1、學習克隆工作中最常用的雙酶切；2、學習將外源基因與質粒連接方法及操作技術；3、學習氯化鈣法制備大腸桿菌感受態細胞的技術；4、了解細胞轉化的概念及其在分子生物學研究中的意義。5、外源質粒DNA轉入受體菌細胞的技術以及篩選轉化體的技術。6、學習鑒定重組子的方法。二、 實驗原理重組子的建立
重組質粒的轉化、篩選和鑒定操作
摘要： 學習克隆工作中最常用的雙酶切,將外源基因與質粒連接方法及操作技術. 一、實驗目的： ?1、學習克隆工作中最常用的雙酶切；2、學習將外源基因與質粒連接方法及操作技術；3、學習氯化鈣法制備 大腸桿菌 感受態細胞的技術；4、了解細胞轉化的概念及
重組質粒的篩選與鑒定
摘要： 可以在蛋白質水平和目的基因功能水平等各個層次鑒定重組子。可以在 蛋白質 水平和目的基因功能水平等各個層次鑒定重組子.基因水平的鑒定有酶切鑒定、 PCR 鑒定、核酸雜交和基因序列分析等.蛋白質水平鑒定有插入失活雙 抗生素 對照篩選(例如 Te
重組片段的轉化及克隆和篩選
一、目的與原理轉化是指以質粒DNA或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。轉化技術在基因工程領域中占有極重要的地位。目前用得較多的轉化技術為將人工構建的重組質粒到如受體細胞，使重組質粒在受體細胞中穩定地復制和表達。二、材料和方法1.材料：大腸桿菌2.儀器：離心機，恒溫搖床，恒溫水浴，超凈工作臺，冰柜
重組質粒(dna－recombinant－plasmid)的連接
質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA 片段( ＜10kb) 且結構簡單，質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆，從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段，然后體外使兩者相連接，再用所得到重組質粒轉化細菌，即可完成。但在實際工作中，
重組質粒的電轉化法
首先，將0.1cm的電擊杯放在冰上進行預冷，凍存的感受態細胞取出冰上溶解。2然后，用100微升的感受態細胞加入1微升純化的連接液，或者加入0.5微升未純化的連接液，小心混勻，在冰上放置二十分鐘。3然后，將混合液加入預冷的電擊杯中，注意擦干杯外的水，防止電火花，放入電轉化儀的反應槽內，接上電源。4然后
重組質粒的篩選（抗生素平板篩選和α互補篩選）
重組DNA轉化受體細胞后，須在不同水平上進行篩選，以區別轉化子與非轉化子、重組子與非重組子以及鑒定所需的特異性重組子。在轉化過程中，并非每個受體細胞都被轉化；即使獲得轉化細胞，也并非都含有目的基因，所以需采用有效方法進行篩選。篩選的方法包括根據遺傳表型篩選、限制性內切酶分析篩選、核酸探針篩選、PCR
重組質粒（dna－recombinant－plasmid）的篩選實驗步驟
實驗儀器控溫搖床水浴鍋 冰箱（-20,‐70℃） 超凈工作臺 培養箱 實驗試劑 Amp LB IPTG X-Gal 平皿 玻棒 三角瓶 離心管 移液器 tip 實驗步驟： 20人／班 1平皿／人 挑取可疑的白色菌落，移植于2mL的LB中，250轉/分搖菌、37℃培養過夜。以快
重組DNA的轉化和藍白篩選
體外連接的重組DNA分子導入合適的受體細胞才能進行大量復制，增殖和表達，其首要目的是獲得大量的克隆基因。雖然PCR技術，體外轉錄及翻譯系統能部分達到大量擴增的目的，但畢竟受到體外操作的許多限制。重組質粒導入宿主細胞最常用的方法之一就是轉化（transformation）。轉化這一概念來源于遺傳學：細
重組質粒轉化感受態大腸桿菌
實驗概要? ? ? ? ? ? ? 細菌處于容易吸收外源DNA的狀態叫感受態。轉化(Transformation)是指重組質粒導入受體細胞的過程，使之獲得新的遺傳性狀的一種手段。其原理是細菌處于0℃，CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形。轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附于
質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗
實驗方法原理 熱激法：大腸桿菌在0 ℃ CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基－鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，經42 ℃短時間熱沖擊處理，促進細胞吸收DNA復合物，在豐富培養基上生長數小時后，球狀細胞復原并分裂增殖。在被轉化的細胞中，重組子基因得到表
DNA的重組連接
目的：了解T4DNA連接酶的幾種生物學功能及用途；學習在T4DNA連接酶的作用下，載體與目的基因的幾種不同的連接方式以及在標準的連接反應體系中，質粒載體和插入的外源DNA的比率關系和各自的用量；掌握用Pmd18-Tvector與PCR產物進行T-A克隆的機理及其應用。原理：外源DNA片段和線狀質粒載
重組質粒的構建
[實驗原理]外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中，將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA
質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗——電轉化法
實驗方法原理電轉化法：外加于細胞膜上的電場造成細胞膜的不穩定，形成電穿孔，不僅有利于離子和水進入細菌細胞，也有利于孔DNA等大分子進入。同時DNA在電場中形成的極性對于它運輸進細胞也是非常重要的。實驗材料外源片段與載體的連接產物大腸桿菌感受態細胞試劑、試劑盒X-galAmpLA培養基水抗生素儀器、耗
質粒轉化
[ 基本原理 ] 將質粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉化（ Transformation ）。此感受態細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態細菌的制備，見前）。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面，經 42℃ 短時間熱沖
基因的重組連接技術
DNA酶切片段的連接是分子生物學實驗中又一關鍵技術，該技術是基因重組，基因改造的重要中間環節。兩DNA片段相鄰的5'磷酸和3'羥基間可由連接酶催化形成磷酸二酯鍵，這個連接反應在體外一般都有大腸桿菌DNA聯接酶和T4DNA聯接酶催化，但分子生物學實驗中主要采用T4DNA聯接酶，因該酶在
DNA重組技術－連接
實驗概要? ? ? ? 體外連接獲得重組分子，用于轉化受體細胞。實驗原理? ? 質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA片段(＜10kb)且結構簡單，質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆，從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA和目的DNA片段， ?然后體外使
質粒轉化的定義
中文名稱質粒轉化英文名稱plasmid transformation定 義將外源質粒導入原核細胞的過程。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
質粒DNA的轉化
實驗概要本實驗將人Bcl-2重組質粒轉化DH5α擴增菌，轉化后在含Amp的培養基上進行篩選，生長的菌落即為含重組質粒的工程菌。含人Bcl-2重組質粒的DH5α菌用于質粒DNA的擴增，獲得的質粒將作為限制性內切酶的酶切底物DNA。實驗原理轉化是將外源DNA分子導入到受體細胞，使之獲得新的遺傳特性的一種
質粒轉化步驟
質粒的轉化，滿滿干貨原理：在受體細胞經過化學試劑或者電擊處理等方法處理后，受體細胞的膜通透性發生改變，質粒DNA或者以其為載體的重組DNA分子，進入到細菌體內而實現擴增。感受態細胞：是指細胞自然或者經過誘導處于容易吸收外源DNA的一種生理狀態。在基因工程中，用于轉化的受體菌（Restriction-
質粒轉化步驟
質粒的轉化，滿滿干貨原理：在受體細胞經過化學試劑或者電擊處理等方法處理后，受體細胞的膜通透性發生改變，質粒DNA或者以其為載體的重組DNA分子，進入到細菌體內而實現擴增。感受態細胞：是指細胞自然或者經過誘導處于容易吸收外源DNA的一種生理狀態。在基因工程中，用于轉化的受體菌（Restriction-