為何實際檢測到的WB條帶與預期的有所區別?
WB是根據蛋白質的大小來分離蛋白的,通常小分子量蛋白在凝膠中的遷移速度要快。但是遷移率也是受到其他因素影響的,這就造成了實際檢測到的條帶與預期條帶的不一致。主要有以下幾種常見因素:翻譯后修飾-比如磷酸化、糖基化等,這些修飾會增加蛋白質的分子量翻譯后剪切- 比如很多蛋白是以前體蛋白的形式合成的,在執行功能時需要進行剪切成活化的形式,如pro-caspases不同剪切體 – 有些來源于同一基因的蛋白有不同的剪切方式,每個剪切方式得到的蛋白大小都是不同的相對電荷(Relative charge) – 氨基酸的組成(charged vs non-charged)多聚體-如二聚體或三聚體。這些多聚體的形式通常會抵制WB時所做的還原條件,因此造成檢測的條帶偏大。......閱讀全文
為何實際檢測到的WB條帶與預期的有所區別?
WB是根據蛋白質的大小來分離蛋白的,通常小分子量蛋白在凝膠中的遷移速度要快。但是遷移率也是受到其他因素影響的,這就造成了實際檢測到的條帶與預期條帶的不一致。主要有以下幾種常見因素:翻譯后修飾-比如磷酸化、糖基化等,這些修飾會增加蛋白質的分子量翻譯后剪切- 比如很多蛋白是以前體蛋白的形式合成的,在執行
為什么有些目的蛋白-WB-很難檢測到目標條帶?
很多時候檢測不到目的條帶的問題竟都是出在樣本制備這一步。質粒有沒有轉染到細胞中去,轉進去后有無表達,表達量是否足以用 WB 檢測,目的蛋白是否容易降解?想要得到最佳實驗結果,了解清楚這些問題比一遍一遍優化和改進 WB 操作本身更為重要。相信若非首次接觸 WB 實驗的科研同行,每人都應有一套成熟的實驗
wb條帶怎么分析粗細深淺
根據蛋白質表達量分析。wb就是艾滋病抗體確證試驗,主要是監測env的條帶,只要出現兩個env條帶,就可以判定是陽性,所以主要是檢測env條帶。wb條帶粗細深淺表示蛋白質表達量,所以粗細深淺根據蛋白質表達量分析。蛋白質表達量是包含蛋白質的聚集體形態、單體形態和含有fc的片段的加和值。
wb條帶放三天顯影
顯影。wb條帶放三天看到明顯的熒光條帶,先壓三十秒。顯影時,把膠片完全浸入顯影液,用透明的或者白色的盒子,看到顯影,看到膠片上有黑色條帶。wb就是艾滋病抗體確證試驗,監測env的條帶,出現兩個env條帶,判定是陽性檢測env條帶。
wb條帶周邊發黑中間白
wb條帶周邊發黑中間白的原因是過高的蛋白上樣量或一抗和二抗濃度過高都會促使底物過快的消耗,導致我們在做化學發光檢測時,發光底物已經消耗殆盡而形成空斑。要解決條帶中出現整條白色空斑,需要減少蛋白上樣量、稀釋一抗和二抗的濃度。如果條帶中出現白圈的話,是轉膜時候,膜與膠之間有氣泡,需要在制作“三明治”時,
WB條帶是白色怎么補救
WB條帶是白色無法補救。WB做出來是白色的條帶,一抗、二抗均已稀釋也不管用。二抗濃度或者目的條帶豐富過高,很快消耗了底物,所以形成了白色條帶。WB在做的時候需要稀釋二抗濃度就可以了。
magej分析wb條帶如何水平
1、首先,打開ImageJ,并且導入要分析的條帶。隨后在Image-Type中選擇8-bit。在Process-subtractbackground中設置rollingballradius=50pixel,記得勾選lightbackground哦。2、其次,進行分析參數的設置。這里選擇Analyze
WB條帶是白色怎么補救
WB條帶是白色無法補救。WB做出來是白色的條帶,一抗、二抗均已稀釋也不管用。二抗濃度或者目的條帶豐富過高,很快消耗了底物,所以形成了白色條帶。WB在做的時候需要稀釋二抗濃度就可以了。
WB-結果上樣泳道之間出現條帶的原因
曝光時間從30秒開始 就有了,只是淺些罷了。它比目的條帶出現的快,這張圖曝光時間是5分鐘,目的條帶有,同時泳道之間的條帶也出現了!沒法比較目的條帶了
wb條帶反白可以洗了重新孵嗎
可以洗了重新孵。孵育抗體要低速,洗膜可以相對快一點。將抗體洗掉,再用內參抗體重新雜交,結果顯示信號一致,就可以認為上樣量一致。條帶中間出現白色反白原因是中心部位高濃度HRP將底物消耗過快,中間部位底物消耗完后無法發光。
wb條帶反白可以洗了重新孵嗎
可以洗了重新孵。孵育抗體要低速,洗膜可以相對快一點。將抗體洗掉,再用內參抗體重新雜交,結果顯示信號一致,就可以認為上樣量一致。條帶中間出現白色反白原因是中心部位高濃度HRP將底物消耗過快,中間部位底物消耗完后無法發光。
wb跑出雙條帶可以用嗎
wb跑出雙條帶可以用。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。
wb壓出的片子條帶都是黑的是怎么回事
出現黑點和黑斑,原因:膜上其他部位與一抗或者二抗非特異性結合,解決辦法:封閉牛奶一定要純,封閉結束之后要洗,我們常常是等到要封閉的時候發現沒有牛奶,然后匆匆忙忙用PBST/TBST配置,配的匆忙的時候往往不管是否已經完全溶解。如果沒有完全溶解的情況下加牛奶倒膜上,會導致很多不溶性顆粒附著在膜上,這就
wb壓出的片子條帶都是黑的是怎么回事
出現黑點和黑斑,原因:膜上其他部位與一抗或者二抗非特異性結合,解決辦法:封閉牛奶一定要純,封閉結束之后要洗,我們常常是等到要封閉的時候發現沒有牛奶,然后匆匆忙忙用PBST/TBST配置,配的匆忙的時候往往不管是否已經完全溶解。如果沒有完全溶解的情況下加牛奶倒膜上,會導致很多不溶性顆粒附著在膜上,這就
wb兩個條帶顯影怎么弄
打開Imagelab,打開一張Imagelab電泳圖片。點擊泳道和條帶,找到泳道下手動功能,輸入泳道號,我們一共有8個條帶。
單克隆抗體做wb會有多個條帶么
單抗指的是只識別一個抗原決定簇。以前做組織蛋白的時候單抗也會出現雜帶,一般就一條很弱的雜帶。
wb做出來目的條帶有兩條
估計跟常溫放置有關系,要是多余的那個條帶比你的目的蛋白條帶小的話,那么可能就是目的蛋白降解了,你可以重新電轉再雜交試試。電轉后的膜最好要4℃保存。而且,你也可以查查目的蛋白的相關資料,看這個蛋白是不是有不同的多聚體形式,也有可能是這種情況導致的。
單克隆抗體做wb會有多個條帶么
單抗指的是只識別一個抗原決定簇。以前做組織蛋白的時候單抗也會出現雜帶,一般就一條很弱的雜帶。
wb做出來目的條帶有兩條
估計跟常溫放置有關系,要是多余的那個條帶比你的目的蛋白條帶小的話,那么可能就是目的蛋白降解了,你可以重新電轉再雜交試試。電轉后的膜最好要4℃保存。而且,你也可以查查目的蛋白的相關資料,看這個蛋白是不是有不同的多聚體形式,也有可能是這種情況導致的。
單克隆抗體做wb會有多個條帶么
單抗指的是只識別一個抗原決定簇。以前做組織蛋白的時候單抗也會出現雜帶,一般就一條很弱的雜帶。
抗體常見問題解答
Q&A 常見問題: 如何選擇合適的一抗? 如何選擇合適的二抗? 如何選擇合適的同型對照? 如何選擇陽性對照? 如何確定一抗的稀釋比例? 如何選擇合適的抗原修復方式? 為何WB檢測條帶大小與預期有差別? 抗體能夠用于其他種屬/實驗
抗體常見問題解答
常見問題: 如何選擇合適的一抗? 如何選擇合適的二抗? 如何選擇合適的同型對照? 如何選擇陽性對照? 如何確定一抗的稀釋比例? 如何選擇合適的抗原修復方式? 為何WB檢測條帶大小與預期有差別? 抗體能夠用于其他種屬/實驗方法?
韋布空間望遠鏡探測到超預期的黑洞數量
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/8/506156.shtm
WB跑膠后沒有條帶是什么原因
提取細胞蛋白加1ml裂解液實在是有點多,你可以減少到200-300ul試試,提取蛋白后做個BCA蛋白定量,在做后續的考藍染色,確定蛋白沒有問題再電泳轉膜
(WB)實驗最后顯色過程中總是沒有條帶
沒有條帶的原因很多:可能沒封閉好,一抗是不是回收次數太多了,二抗不好用,TBST長毛了,等等。這個還有做外包的呀,我們這邊實驗室western是最普遍的實驗了。
WB目標蛋白旁又出現條帶是什么原因
可能原因很多:1 同源蛋白;2 表位相似的雜帶;3 自身蛋白的修飾,糖基化,磷酸化等;4 降解
WB條帶大小和蛋白預測八字不合?
實驗室玄學千千萬,預測和結果不符占一半。WB實驗是各位小伙伴們,時常光顧的一個實驗。但就是這樣一個初級又常用的實驗,卻會出現各種稀奇古怪的問題。怎么我的條帶每次都不一樣!?比如在WB實驗鑒定蛋白時,我們得到的蛋白質條帶大小常常會和預測值有所偏差。這是身患“強迫癥”的小伙伴們不能忍的。猛男落淚,誰來看
為什么我的wb做出來目的條帶有兩條
估計跟常溫放置有關系,要是多余的那個條帶比你的目的蛋白條帶小的話,那么可能就是目的蛋白降解了,你可以重新電轉再雜交試試。電轉后的膜最好要4℃保存。而且,你也可以查查目的蛋白的相關資料,看這個蛋白是不是有不同的多聚體形式,也有可能是這種情況導致的。
日本核危機比預期嚴重-中韓再測到微量放射物
日本原子能安全保安院2011年3月23日發布的照片顯示了福島第一核電站內部建筑物受損情況。圖為福島第一核電站1號反應堆控制室。 日本核危機續惡化,東京電力公司28日下午宣布,1~3號機組渦輪機房地下室向海邊延伸的地道與地面坑道中發現積水,其中2號機組積水表面的輻射量高達每小時1000毫西弗以上
為什么wb做出來目的條帶有兩條
估計跟常溫放置有關系,要是多余的那個條帶比你的目的蛋白條帶小的話,那么可能就是目的蛋白降解了,你可以重新電轉再雜交試試。電轉后的膜最好要4℃保存。而且,你也可以查查目的蛋白的相關資料,看這個蛋白是不是有不同的多聚體形式,也有可能是這種情況導致的。