蛋白酶K的功能及使用方法
蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩定,還具有降解天然蛋白質的能力,因而它應用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體 DNA,蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(pH 4-12.5)均有活性。推薦反應緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。蛋白酶K配制標準:20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinase K):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,有效保證12月。孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵......閱讀全文
蛋白酶K的功能及使用方法
蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩定,還具有降解天然蛋白質的能力,因而它應用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體 DNA,蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的
蛋白酶K的功能及使用方法
蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩定,還具有降解天然蛋白質的能力,因而它應用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體 DNA,蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的
介紹蛋白酶K的使用方法
蛋白酶K(ProteinaseK),來源于林伯氏白色念球菌(TritirachiumalbumLimber)的蛋白酶K基因,屬于絲氨酸蛋白酶類,具有極高的酶活性和廣泛的底物特異性。 蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的樣品處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,能增加探針與靶核酸結合的機會
蛋白酶K的使用方法、作用及配制
蛋白酶K是一種從白色念 珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶,具有很高 的比活性,是DNA提取的關鍵試劑。該酶在較廣的pH范圍(4?12.5)內及高溫 (50?70°C)均有活性,用于質粒或基因組 DNA、RNA的分離。在DNA提取中,主要作用是酶解與核酸結合的組蛋白,使 DNA游離在溶液中,隨后用不同方法
蛋白酶K的應用
蛋白酶K已廣泛應用在皮革、毛皮、絲綢、醫藥、食品、釀造等方面。皮革工業的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶,既節省時間,又改善勞動衛生條件。蛋白酶還可用于蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清。臨床上可作藥用,如用胃蛋白酶治療消化不良,用酸性蛋白酶治療支氣管炎,用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶對外科
蛋白酶k的作用
值得注意的是,蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白
蛋白酶K的妙用
蛋白酶 K,威力巨大的廣譜蛋白酶,95C 加熱10 分鐘,則完全失活。數年前首次使用它,是替代 DEPC 處理 RNA 抽提用的離心管和槍頭,效果不錯;后來又用于處理 RNase-Free的水,效果也是一級棒。從此就再也不用 DEPC 了。現在將它的細節公開,與大家分享。 配制 RNA 裂解試劑時,
蛋白酶K的生理作用
值得注意的是,蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白
蛋白酶K的保存方法
保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,有效保證12月。孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。
蛋白酶K生物試劑的妙用
蛋白酶K/Proteinase K???層析純,30u/mg?????100毫克蛋白酶 K,威力巨大的廣譜蛋白酶,95C 加熱10 分鐘,則完全失活。數年前首次使用它,是替代 DEPC 處理 RNA 抽提用的離心管和槍頭,效果不錯;后來又用于處理 RNase-Free的水,效果也是一級棒。從此就