PCR實驗指導與常見問題分析4
Fig. 25. Multiplex PCR of mixtures A-D comparing PCR programs with 2 (green) and 1 (yellow) minute extension time at 54° C annealing temperature. Comparison of equivalent lanes shows an improvement in yield when extension time is 2 minutes. Some faint unspecific bands appear, possibly due to the low buffer concentration (1x).Fig. 26. Same multiplex mixture was amplified on PCR programs differing only in the......閱讀全文
PCR實驗指導與常見問題分析4
Fig. 25.?Multiplex PCR of mixtures A-D comparing PCR programs with 2 (green) and 1 (yellow) minute extension time at 54° C annealing temperature. Comp
PCR實驗指導與常見問題分析5
MgCl2?concentrationRelationship between MgCl2?and dNTP concentrationdNTP concentrations of about 200μM each are usually recommended for the Taq polyme
PCR實驗指導與常見問題分析7
11. All products in my multiplex reaction are weak. How can I improve the yield?Decrease annealing time in small steps (2o C)Decrease extension temper
PCR實驗指導與常見問題分析6
Non-denaturing PAA gelsTo separate PCR products differing in only a few bp in length (for example, microsatellite markers), 6-10% PAA gels need to be
PCR實驗指導與常見問題分析3
Influence of annealing temperature and number of loci amplifiedLike any other PCR, multiplex reactions should be done at a stringent enough temperatur
PCR實驗指導與常見問題分析2
Fig. 11.?Example of the influence of extension temperature. Multiplex PCR with mixtrues A-B using two different PCR programs. Reactions on the right s
PCR實驗指導與常見問題分析1
CONTENTPCR guide: a discussion of the main parameters influencing the outcome of the PCR and multiplex PCR reaction in 16 pages/sections and using ove
PCR常見問題分析與對策
1.PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?2.假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白
DNA轉化實驗指導4
2B.??Transformation?1.?????Preparation of electrocompetent DH5a?cells:??autoclave 4 baffled 1 liter flasks containing 500 mL LB.??Remove a 1 mL aliquo
PCR中常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間?一般認為PCR產物應在48h以內完成電泳檢測，有些zui好于當日電泳檢測，大于48h后帶型就會出現不規則，甚至消失。?1? 假陰性，不出現擴增條帶???? PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節
PCR技術（五）：常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR實驗技巧4
④引物的額外序列與退火溫度?若有額外的序列信息要加到引物中，例如T7RNA聚合酶結合位點、限制酶切位點或者GC發夾結構可以使用加長的引物。一般說來，引物5'端添加無關序列不會影響引物特異序列的退火。有時候，引物中添加了大量與模板不配對的堿基，可以在較低退火溫度的條件下進行4到5個擴增循環；然
PCR克隆常見問題分析
??? 1、克隆PCR產物的最優條件是什么？??? 最佳插入片段：載體比需實驗確定。1:1（插入片段:載體）常為最佳比，摩爾數比1:8或8:1也行。應測定比值范圍。連接用5ul 2X連接液, 50ng質粒DNA,1Weiss單位的T4連接酶，插入片段共10ul。室溫保溫1小時，或4℃過夜。在
PCR實驗常見問題、原因分析及其解決方案
PCR產物的電泳檢測時間，一般為48h以內，有些最好于當日進行檢查，大于48h后帶型不規則甚至消失。但有時仍會與到這樣那樣的問題，影響檢測結果的判斷，具體歸類為以下常見的4點，描述如下：問題一：無擴增產物現象：正對照有條帶，而樣品則無。原因：1、模板:含有抑制物，含量低。2、Buffer對樣品不合適
熒光定量PCR實驗指南4
3.8 防止殘余（Carry-over）污染PCR易受污染的影響，因為它是一種敏感的擴增技術。小量的外源DNA污染可以與目的模板一塊被擴增。當前一次擴增產物用來進行新的擴增反應時，會發生共同來源的污染。這稱之為殘余污染。從其他樣品中純化的DNA或克隆的DNA也會是污染源（非殘余污染）。可以在PCR過
RNA提取與RTPCR(4)
2.8 小量RNA檢測方法的提高 當僅有小量RNA時，RT-PCR尤其具有挑戰性。在RNA分離過程中加入的作為載體的糖元有助于增加小量樣品的產量。可以在加入Trizol的同時加入無RNase的糖元。糖元是水溶性的，可以同RNA保持在水相中以輔助隨后的沉淀。對于小于50mg的組織或106個培養細胞
細胞培養常見問題與解答4
22.在High Five無血清培養基中去污劑的濃度是多少？ High Five無血清培養基中去污劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。 23.High Five細胞用多大的密度凍存？ 3.0x10E6 ce
PCR常見問題
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR常見問題
PCR產物的電泳檢測時間? 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。 假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
Northern雜交試驗指導手冊(4)
8.將樣品測試條和對照測試條按下列順序在上述準備的溶液中浸漬處理，兩步驟直接讓多余的溶液滴在吸水紙上。①. 封閉， 2min.→②. 抗體結合， 3min.→①. 封閉， 1min.→③. 洗膜, 1min. →④. 平衡， 1min. →⑤. 顯色反應（黑暗），5－30min.9.顯色反應30mi
PCR儀溫控性能及常見問題分析
??PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀-----------------------------------------
獻給初學者：PCR－常見問題分析
我們給大家匯總了 PCR 常見問題、出現的原因及解決對策，還有終極解決方案。 PCR 常見問題及解決方案 1沒有擴展條帶 可能的原因及對應的解決方案如下： 酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。
PCR儀溫控性能及常見問題分析
?PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀------------------------------------------
PCR儀溫控性能及常見問題分析
?PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀------------------------------------------
PCR儀溫控性能及常見問題分析
PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天來聊一聊定性PCR儀最為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀-----------------------------------------------
PCR實驗操作常見問題及解決方法
?1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與
PCR實驗操作常見問題及解決方法
1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反
知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。一代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過將PC
PCR實驗污染與對策
PCR反應的zui大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、污染原因1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)4
3． 由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進行分析。4． 步驟較少，耗時短。與Northern雜交相比，省去了轉膜和洗膜的過程。5． RNA-RNA雜交體穩定性高，無探針自身復性問題，無須封閉。6． 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交，無競