PCR實驗指導與常見問題分析2
Fig. 11. Example of the influence of extension temperature. Multiplex PCR with mixtrues A-B using two different PCR programs. Reactions on the right side (green) were performed in identical cycling conditions with Fig. 9, whereas reactions on the left side (yellow) were performed using cycling conditions in which extension temperature was dropped from 72 o C to 65 o C. Reaction worked more ef......閱讀全文
PCR實驗指導與常見問題分析2
Fig. 11.?Example of the influence of extension temperature. Multiplex PCR with mixtrues A-B using two different PCR programs. Reactions on the right s
PCR實驗指導與常見問題分析5
MgCl2?concentrationRelationship between MgCl2?and dNTP concentrationdNTP concentrations of about 200μM each are usually recommended for the Taq polyme
PCR實驗指導與常見問題分析7
11. All products in my multiplex reaction are weak. How can I improve the yield?Decrease annealing time in small steps (2o C)Decrease extension temper
PCR實驗指導與常見問題分析4
Fig. 25.?Multiplex PCR of mixtures A-D comparing PCR programs with 2 (green) and 1 (yellow) minute extension time at 54° C annealing temperature. Comp
PCR實驗指導與常見問題分析6
Non-denaturing PAA gelsTo separate PCR products differing in only a few bp in length (for example, microsatellite markers), 6-10% PAA gels need to be
PCR實驗指導與常見問題分析3
Influence of annealing temperature and number of loci amplifiedLike any other PCR, multiplex reactions should be done at a stringent enough temperatur
PCR實驗指導與常見問題分析1
CONTENTPCR guide: a discussion of the main parameters influencing the outcome of the PCR and multiplex PCR reaction in 16 pages/sections and using ove
PCR常見問題分析與對策
1.PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?2.假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白
PCR中常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間?一般認為PCR產物應在48h以內完成電泳檢測，有些zui好于當日電泳檢測，大于48h后帶型就會出現不規則，甚至消失。?1? 假陰性，不出現擴增條帶???? PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節
PCR常見問題總（2）
克隆PCR產物1)克隆PCR產物的最優條件是什么？最佳插入片段：載體比需實驗確定。1：1（插入片段：載體）常為最佳比，摩爾數比1：8或8：1也行。應測定比值范圍。連接用5ul 2X連接液, 50ng質粒DNA,1Weiss單位的T4連接酶，插入片段共10ul。室溫保溫1小時，或4℃過夜。在這2種溫度
PCR技術（五）：常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
DNA轉化實驗指導2
1B.??Cloning?1.?????A caveat on dephosphorylation: the most common reason for failure to obtain colonies is a result of adding too much BAP or CIP to
PCR實驗技巧2
5. touchdown PCR?原理很簡單,但的確是一個很有用的方法。舉個例子，ANNEALING TEMP. 55度?94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s?72 1min 2cycles 94 30s 58 30s 72 1min
PCR克隆常見問題分析
??? 1、克隆PCR產物的最優條件是什么？??? 最佳插入片段：載體比需實驗確定。1:1（插入片段:載體）常為最佳比，摩爾數比1:8或8:1也行。應測定比值范圍。連接用5ul 2X連接液, 50ng質粒DNA,1Weiss單位的T4連接酶，插入片段共10ul。室溫保溫1小時，或4℃過夜。在
PCR實驗常見問題、原因分析及其解決方案
PCR產物的電泳檢測時間，一般為48h以內，有些最好于當日進行檢查，大于48h后帶型不規則甚至消失。但有時仍會與到這樣那樣的問題，影響檢測結果的判斷，具體歸類為以下常見的4點，描述如下：問題一：無擴增產物現象：正對照有條帶，而樣品則無。原因：1、模板:含有抑制物，含量低。2、Buffer對樣品不合適
RTPCR原理與實驗操作步驟2
二、實驗器具的處理與準備1、塑料制品：（包括槍頭、EP管、勻漿管等）先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料制品逐個浸泡其中，其中小槍頭需要吸管打入DEPC水，過夜，然后高壓，再烤干備用，實驗前將槍頭等放入吸頭臺，再高壓一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸過夜，沖洗干凈，蒙錫紙烤干備用（DEPC水泡）
RtPCR實驗準備及與操作步驟2
六、需購置的Rt-PCR材料：（生工. Tel. 2236106.）Taq酶（含MgCl2 Buffer） 200u 70.00dNTP: 1支oligo(dT)15: 1 OD 40.00 promegaM-MLV: 1支 250.00 promega (Buffer)RNasin: 1支 110
熒光定量PCR實驗指南2
2.3TaqmanMGB探針設計介紹MGB探針的優點：2MGB探針較短(14-20bp)，更容易找到所有排序序列的較短片段的保守區。2短片段探針(14-20bp)加上MGB 后，Tm值將提高10℃，更容易達到熒光探針Tm值的要求。2MGB探針的設計原則2探針的5’端避免出現G，即使探針水解為單個堿基
PCR儀溫控性能及常見問題分析
??PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀-----------------------------------------
PCR儀溫控性能及常見問題分析
?PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀------------------------------------------
PCR儀溫控性能及常見問題分析
?PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀------------------------------------------
PCR儀溫控性能及常見問題分析
PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天來聊一聊定性PCR儀最為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀-----------------------------------------------
獻給初學者：PCR－常見問題分析
我們給大家匯總了 PCR 常見問題、出現的原因及解決對策，還有終極解決方案。 PCR 常見問題及解決方案 1沒有擴展條帶 可能的原因及對應的解決方案如下： 酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。
PCR常見問題
PCR產物的電泳檢測時間? 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。 假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR常見問題
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR實驗操作常見問題及解決方法
?1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與
PCR實驗操作常見問題及解決方法
1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反
知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。一代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過將PC
RNA提取與RTPCR(2)
融解RNA一般使用TE。 保存RNA應該盡量低溫。為了防止痕量RNase的污染，從富含RNase的樣品（如胰臟、肝臟）中分離到的 RNA需要貯存在甲醛中以保存高質量的RNA，對于長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA，在水中貯存一個星期就基本降解了，而從大鼠脾臟中提取的 RNA，在水
PCR技術的原理與方法（2）
?PCR反應的成分和作用?總體積：一般為25μl～100 μl?（一）無Mg2?buffer：由純水、kcl、Tris組成。Tris用于調節反應體系pH值，使Taq酶在偏堿性環境中反揮活性。kcl可降低退火溫度，但不能超過50 mmol/L，否則會抑制DNA聚合酶活性。?（二）Mg2?:終濃度為1.