TEMVisualizationofMicrotubules
LEVEL IIMaterialsCoated grid for TEM0.1 M ammonium acetate5% ethanol saturated uranyl acetateTransmission electron microscopeProcedureAt the conclusion of a 37° C incubation from Exercise 9.6, remove one drop (approximately 20 microliters) of the extract, place it on a collodion or formvar and carbon-coated EM grid, and allow it to remain for about 20-30 seconds. 6Rinse the grid carefully with 0.1 M ammoniu......閱讀全文
TEM－Visualization－of－Microtubules
LEVEL IIMaterialsCoated grid for TEM0.1 M ammonium acetate5% ethanol saturated uranyl acetateTransmission electron microscopeProcedureAt the conclusio
細胞組分和細胞器——細胞骨架
Fixation and Immunofluorescence of the Cytoskeleton?(Mitchison Lab)??Recycling Tubulin?(Mitchison Lab)??Labeling Tubulin and Quantifying Labeling Stoi
顯微鏡技術——電子顯微技術
The Transmission Electron Microscope (TEM)?(HEI)An explanation of how the TEM works.??TEM Specimen Preparation?(HEI)??Serial Sectioning?(Walter Steffe
Viscosity－－Polymeriztion－of－Microtubules
LEVEL IIMaterialsTubulin (Brain extract from?Exercise 9.4)GTPATPViscometerWaterbath or incubator at 37° CProcedureCompute the amount of GTP (M.W. 523)
Isolation－of－Microtubules－(Bovine－Brain)
LEVEL IIMaterialsFreshly removed bovine brain?2Wire sieve (tea strainer)Microtubule buffer (MT buffer)0.1 M MES (2-(N-Morphilino)ethanesulfonic acid)1
Preparation－of－Segmented－and－Polarity－Marked－Microtubules
Segmented and polarity-marked microtubules are very useful for many different types of?in vitro?assays. Segmented microtubules are microtubules with a
Negative－Stain－Electron－Microscopy－of－Microtubules
Negative staining is a rapid, qualitative method for analyzing microtubule structure at the EM level. Because negative staining involves deposition of
Preparation－of－Segmented－and－Polarity－Marked－Microtubules
Preparation of Segmented and Polarity Marked Microtubules?Segmented and polarity-marked microtubules are very useful for many different types of?in vi
Fixation－and－Embedding－of－Microtubules－for－Electron－Microscopy
(This procedure can also be used for virtually any material that must be pelleted prior to fixation and thin sectioning)Primary fix:2% glutaraldehyde
Flow－Cell－Assays－with－Microtubules:－Motility/Dynamics－in－Fluorescence
Flow cell assays are very useful for studying microtubule motility, microtubule dynamics, kinetochore-microtubule interactions and action of severing/
Ultraviolet－irradiation－impairs－epiboly－via－microtubules－in－Zebrafish
IntroductionZebrafish have transparentembryos that develop outside the mother. They develop rapidly, so that at 24 hours after fertilization, the embr
TEM－Specimen－Preparation：Preparative－Techniques－for－the－TEM
For routine transmission electron microscopy (TEM), it is generally accepted that specimens should be thin, dry and contain molecules which diffract e
TEM原理
原 理透射電鏡和光學顯微鏡的各透鏡及光路圖基本一致，都是光源經過聚光鏡會聚之后照到樣品，光束透過樣品后進入物鏡，由物鏡會聚成像，之后物鏡所成的一次放大像在光鏡中再由物鏡二次放大后進入觀察者的眼睛，而在電鏡中則是由中間鏡和投影鏡再進行兩次接力放大后最終在熒光屏上形成投影供觀察者觀察。電鏡物鏡成像光路圖
TEM物鏡
物鏡（object lens）????????處于樣品室下面，緊貼樣品臺，是電鏡中的第1個成像元件，在物鏡上產生哪怕是極微小的誤差，都會經過多級高倍率放大而明顯地暴露出來，所以這是電鏡的一個最重要部件，決定了一臺電鏡的分辨本領，可看作是電鏡的心臟。????????（1）特點?物鏡是一塊強磁透鏡，焦距
TEM樣品
1. 樣品一般應為厚度小于100nm的固體。2. 感興趣的區域與其它區域有反差。3. 樣品在高真空中能保持穩定。4. 不含有水分或其它易揮發物，含有水分或其他易揮發物的試樣應先烘干除去。5. 對磁性試樣要預先去磁，以免觀察時電子束受到磁場的影響。TEM樣品常放置在直徑為3mm的200目樣品網上，在樣
TEM系統組件
TEM系統組件TEM系統由以下幾部分組成：l 電子槍：發射電子。由陰極，柵極和陽極組成。陰極管發射的電子通過柵極上的小孔形成射線束，經陽極電壓加速后射向聚光鏡，起到對電子束加速和加壓的作用。l 聚光鏡：將電子束聚集得到平行光源。l 樣品桿：裝載需觀察的樣品。l 物鏡：聚焦成像，一次放大。l 中間鏡：
TEM系統組件
TEM系統組件TEM系統由以下幾部分組成：l?電子槍：發射電子。由陰極，柵極和陽極組成。陰極管發射的電子通過柵極上的小孔形成射線束，經陽極電壓加速后射向聚光鏡，起到對電子束加速和加壓的作用。l?聚光鏡：將電子束聚集得到平行光源。l?樣品桿：裝載需觀察的樣品。l?物鏡：聚焦成像，一次放大。l?中間鏡：
TEM原－理
原 理透射電鏡和光學顯微鏡的各透鏡及光路圖基本一致，都是光源經過聚光鏡會聚之后照到樣品，光束透過樣品后進入物鏡，由物鏡會聚成像，之后物鏡所成的一次放大像在光鏡中再由物鏡二次放大后進入觀察者的眼睛，而在電鏡中則是由中間鏡和投影鏡再進行兩次接力放大后最終在熒光屏上形成投影供觀察者觀察。電鏡物鏡成像光路圖
TEM樣品制備
樣品制備由于透射電子顯微鏡收集透射過樣品的電子束的信息，因而樣品必須要足夠薄，使電子束透過。l?試樣分類：復型樣品，超顯微顆粒樣品，材料薄膜樣品等。l?制樣設備：真空鍍膜儀，超聲清洗儀，切片機，磨片機，電解雙噴儀，離子薄化儀，超薄切片機等。?▽?超細顆粒制備方法示意圖來源：公開資料?▽?材料薄膜制備
TEM照相室
照相室????????在觀察中電子束長時間轟擊生物醫學樣品標本，必會使樣品污染或損傷。所以對有診斷分析價值的區域，若想長久地觀察分析和反復使用電鏡成像結果，應該盡快把它保留下來，將因為電子束轟擊生物醫學樣品造成的污染或損傷降低到最小。此外，熒光屏上的粉質顆粒的解像力還不夠高，尚不能充分反映出電鏡成像
TEM照明系統
照明系統（illuminating system）照明系統主要由電子槍、聚光鏡兩部分組成。電子槍有熱發射、冷發射和場發射三種?。最普通的電子槍是熱發射型電子槍，即一根發叉形鎢絲，通電流加熱后，發射出電子束成為電鏡的光源。 聚光鏡的作用是將電子槍發射出的電子束會聚在試樣平面上。改變聚光鏡電
TEM工作程序
工作程序（1）開啟主機電源開關，待熒光屏顯示操作數據后再進行下一步。（2）逐級加高壓致所需電壓，每加一級高壓，必須等高壓表中指示針停止擺動才能加下一級。如指示針移出量程，必須從zui低移級加起。（4）??? 根據說明書要求進行合軸操作，使儀器處于zui佳操作狀態。（4）根據說明書的操作要求進行觀察、
TEM系統組件
TEM系統由以下幾部分組成： l 電子槍：發射電子。由陰極，柵極和陽極組成。陰極管發射的電子通過柵極上的小孔形成射線束，經陽極電壓加速后射向聚光鏡，起到對電子束加速和加壓的作用。 l 聚光鏡：將電子束聚集得到平行光源。 l 樣品桿：裝載需觀察的樣品。 l 物鏡：聚焦成像，一次放大。 l
TEM樣品制備
由于透射電子顯微鏡收集透射過樣品的電子束的信息，因而樣品必須要足夠薄，使電子束透過。 試樣分類：復型樣品，超顯微顆粒樣品，材料薄膜樣品等。 制樣設備：真空鍍膜儀，超聲清洗儀，切片機，磨片機，電解雙噴儀，離子薄化儀，超薄切片機等。
TEM球差
球差不完美透鏡導致的直接結果就是引入了讓顯微學者最頭疼的球差。電子的聚焦是靠洛倫茲力來實現的，在洛倫茲力的作用下，電子以旋進的方式聚焦。在TEM里有一條光軸，就和光學顯微鏡中的光軸一樣，偏離光軸時，透鏡對光的聚焦能力和靠近光軸的聚焦能力是不同的。當然了，原則上是希望穿過透鏡的光都能聚焦到焦點上。這點
TEM樣品制備
樣品制備由于透射電子顯微鏡收集透射過樣品的電子束的信息，因而樣品必須要足夠薄，使電子束透過。l 試樣分類：復型樣品，超顯微顆粒樣品，材料薄膜樣品等。l 制樣設備：真空鍍膜儀，超聲清洗儀，切片機，磨片機，電解雙噴儀，離子薄化儀，超薄切片機等。▽超細顆粒制備方法示意圖來源：公開資料▽材料薄膜制備過程示意
TEM基本操作
A.聚光鏡對中：一般的透射電鏡拍攝需要插入一級聚光鏡光闌，剛插入時電子束可能不在熒光屏中心，如圖二（a）；這時需要先會聚電子束于一點，調節電子束平移至中心，再散開光斑，調節光闌旋鈕使之仍在中心，反復幾次后，電子束與熒光屏能同心收縮，B.合軸：在電鏡高壓穩定之后，應該進行系統的合軸調整，一般情況下在a
tem是什么
tem是指透射電子顯微鏡。透射電子顯微鏡，簡稱TEM，可以看到在光學顯微鏡下無法看清的小于0.2um的細微結構，這些結構稱為亞顯微結構或超微結構。要想看清這些結構，就必須選擇波長更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率。目前TEM的分辨力可達0.2nm。電子顯微鏡與光學顯微鏡的成像原理基本一樣，所不同的是前
TEM成像原理
樣品放進樣品室時最終是怎樣成像的呢?成像原理：電子束最先通過聚光鏡,聚光鏡無放大作用,而有聚積電子束調節亮度的作用,經聚光鏡的調節將電子束的直徑調節在約2μm左右。這樣細的電子束透過樣品時，電子與樣品中的原子發生碰撞，從而產生電子散射。（不同的結構成分對電子有著不同的散射程度，結構致密的，特別是被重
TEM真空系統
真空系統 電鏡的真空系統由機械泵、油擴散泵、真空管道、閥門及檢測系統組成。在電子顯微鏡中，電子由電子槍發出經過樣品，打到熒光屏上。電子束的穿透力很弱，只有在高真空的情況下才能達到一定的行程。整個路程中，應該沒有空氣分子的碰撞，這就要求必須將電子束通道、既鏡筒抽成高真空。鏡筒高真空的好壞，直接影響到電