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實驗步驟基 本 方 案 1 通 過 道 威 克 斯（DOWEX) 離 子 交 換 層 析 分 析 [3H] 肌醇磷酸材料備 選 方 案 通 過 HPLC 方 法 分 析 [3H] 肌醇磷酸附加材料[3 H ] InsP 樣 本（見基本方案，步 驟 6) 和標準品除 氣 的 H PLC 級水2mol/L 的甲酸銨，以磷酸調至 pH3.7基 本 方 案 2 通過薄層層析方法分析肌醇磷脂材 料1 % (m/V ) 草酸鉀/2m m ol/LED TA溶劑： 60 : 20 : 23 : 18 : 12 (V7 V /V7 V 7 V ) 氯仿/甲醇/丙酮/乙酸/水 ，或 45 :35 : 10 氯仿/甲醇/4mol/L NH4OH細 胞（如腫瘤細胞系、雜交瘤、克隆、凝集素刺激的細胞）無 磷 酸 鹽 的 培 養 基（如 GIBCO/BRL) 含 有 1 0 % (V /V ) 熱 滅 活 的 胎 牛 血 清(FCS) ， 用 ......閱讀全文
實驗步驟 一、材料 1. 胞質分裂阻滯微核試驗 2. 微核的著絲點檢測 (1)從硬皮病 C R E S T 亞型的患者中取得的血清樣本。 (2) F I T C 標記的兔抗人 I g G 二抗。 (3) 過氧化物酶
實驗步驟一、材料1. 胞質分裂阻滯微核試驗2. 微核的著絲點檢測(1)從硬皮病 C R E S T 亞型的患者中取得的血清樣本。(2) F I T C 標記的兔抗人 I g G 二抗。(3) 過氧化物酶標記的兔抗人 I g G 。(4) 二胺基聯苯溶液（D A B ): I m g /m L 溶于
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗 實驗步驟
實驗步驟基 本 方 案 1 塑 料 黏 附 和E A 玫 瑰 花結 富 集DC此種技術用于分離DC已經使用了很多年，其間只經過了微小的修改（Steinman衫aZ.， 1979)材 料（帶V 項 目 見 附 錄 1)膠原酶消化的脾臟細胞懸液（見輔助方案）高密度牛血清白蛋白（BSA) 溶液R P M
實驗步驟 一、常規操作方案 下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Bu
實驗步驟一、常規操作方案下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Burgess and K n u t h ， 1996)。其他類似的流程也可能
二、用 于 鑒 定 P T M 的富 集 技 術2.1 磷酸化絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基的可逆磷酸化也許是研究最為深人的 PT M 。蛋白質磷酸化信號網絡介導細胞對與不同的應激因子、生長因子、細胞因子以及細胞間相互作用作出響應。憐酸化還影響多種細胞進程，如增殖、凋亡 、遷移 、轉錄和蛋白質翻譯（W
2.2 糖基化糖 基 化 是 一 種 常 見 的 P T M , 并 且 已 經 證 明 能 夠 影 響 酶 的 活 性 、蛋 白 質 定 位 、穩 定 性 、信 號 轉 導 、細 胞 黏 附 和 蛋 白 質 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 經 發 現 在 腫 瘤 惡
1.將2 管 I m l 的 4000U /m l 膠 原 酶 D 稀 釋（足夠用于2 0 個脾臟）： Im l 加 入 9m l H B S S(稀 釋 至 400U /m l ，步 驟 8 使用）， I m l 加 入 39m l 的 H B S S (稀 釋 至 100U /ml)。置
三、畢赤酵母酵 母 作 為 另 一 種 表 達 重 組 蛋 白 的 強 有 力 的 傳 統 工 具 ，已 被 成 功 應 用 于 大 量 蛋 白 質 的表 達 。酵 母 既 具 有 大 腸 桿 菌 的 許 多 優 點 ，如 增 殖 時 間 短 、基 因 組 易 于 操 作 ，又 具 有 真
實驗步驟基 本 方 案 淋 巴 細 胞 的 CFSE 標記材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)實驗動物，人外周血或者培養的淋巴細胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 鹽 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 熱 滅 活 F B S 的 P B S
基 本 方 案 淋 巴 細 胞 的 CFSE 標記材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)實驗動物，人外周血或者培養的淋巴細胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 鹽 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 熱 滅 活 F B S 的 P B S5m m
2 用阿糖胞苷微核實驗檢測人淋巴細胞 (V G 1 期 DNA 剪切修復損傷的方法在對暴露于各種遺傳毒物的人 G 。期淋巴細胞的 M N 進行檢測后發現，對于主要引起堿基損傷和 DNA 加合物而不是 DNA 鏈斷裂或者紡錘體損傷的化學物質和紫外輻射而言， MN 的形成與細胞毒性相比明顯程度較
實驗步驟一、膜的制備從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能高表達目的膜蛋白的組織或細胞系就很重要。最近，人們對于將細胞表面蛋白質作為鑒定不同
實驗步驟 一、膜的制備 從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。 大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能
實驗步驟 基本方案 1 誘導小鼠急性弓形蟲 T. gondii感染材 料T. gondii弓形蟲 M E 4 9 株 慢 性 感 染（1 個月以上）的 雌 性 小 鼠（C 57B L /6、 C B A /Ca 或 Swiss-Webster) (見輔助方案 2)。7 0 % (v/V )
二、尿液微量白蛋白測定1982年Viberti在研究糖尿病性腎病時，首先提出了微量白蛋白尿的概念，以區別于臨床蛋白尿，經后微量白蛋白尿這一概念界定為尿中白蛋白排出量在3.2-22.6mg/mmolGr(30-200mg/gGr)，或排出率在20-200μg/min這一范圍內。即超過尿蛋白正常范圍的上
3.2 免 疫 B 細胞的制備血清效價有意義(>1 : 1000)的免疫后動物可以提供抗原反應性B 細胞用于融合。這些細胞可以從脾臟或淋巴結中獲得。動物用吸人CO2 處死，在無菌操作下取組織，放 在 4°C無血清培養基中，最多可放lh 。用懾子或針頭輕輕打開組織脾臟或淋巴結的外包膜獲得
每次小便時，很多人只是將尿液沖走了事，并沒有意識到尿液能夠反映一個人的健康狀態。尿液是一個令人難以置信的復雜的生物流體。 醫生、營養學家和環境科學家不僅對尿液的物理性狀，如尿量、顏色、透明度、氣味、pH和比重等感興趣，也對尿液的化學成分特別感興趣，因為它們揭示了有關一個人的健康與否、他們所吃的
實驗步驟2.3 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞（MEF) 的 制 備最廣泛地用于支持 h E S 的伺養層細胞來自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎飼養細胞（MEFs) ，盡管它們可能是最原始的間葉細胞的
實驗步驟 一、蛋白質印跡法 蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯
由于微生物細胞含有大量水分（一般在80-90%以上），對光線的吸收和反射與水溶液的差別不大，與周圍背景沒有明顯的明暗差。所以，除了觀察活體微生物細胞的運動性和直接計算菌數外，絕大多數情況下都必須經過染色后，才能在顯微鏡下進行觀察。但是，任何一項技術都不是完美無缺的。染色后的微生物標本是死的，在染
由于微生物細胞含有大量水分（一般在80-90%以上），對光線的吸收和反射與水溶液的差別不大，與周圍背景沒有明顯的明暗差。所以，除了觀察活體微生物細胞的運動性和直接計算菌數外，絕大多數情況下都必須經過染色后，才能在顯微鏡下進行觀察。但是，任何一項技術都不是完美無缺的。染色后的微生物標本是死的，在染色過
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗 實驗步驟 一、層
預計在新奇的一級分子和生物仿制藥實體方面將會有突出的增長。一些進步的是改良的分析、開發和相互作用。現在已有許多用于去除關的方法，包括凍干、反向萃取、溶質析出，precipitation、透析(溶劑交換） 、超濾和層析技術。值得注意的是，在眾多微和設備發展的支持下，小型化和高通量的蛋白質分析取得了極大
六、CID、ECD和 ETD的對比基于質譜的蛋白質組學分析依賴于氣相中肽段在低碰撞能量下斷裂, 在質量譜圖中形成峰。進而通過峰圖確定肽段序列，再推斷出相關蛋白質。完成肽段斷裂最主要的方法就是碰撞誘導解離（collision induced dissociation，C I D ) ( S w
三、膜蛋白的純化一 旦 使 用 了 合 適 的 去 污 劑 將 膜 蛋 白 從 細 胞 膜 中 増 溶 出 來 ，就 可 以 分 離 目 標 蛋 白 質 了 。傳 統 色 譜 層 析 技 術 ，如 凝 膠 過 濾 、親 和 、離 子 交 換 和 層 析 聚 焦 （chromatofocusi
一、引言蛋 白 質 翻 譯 后 修 飾 (P T M ) 在 細 胞 生 物 調 節 中 發 揮 著 基 本 作 用 。 P T M 是 m R N A 翻譯 后 蛋 白 質 的 酶 促 共 價 化 學 修 飾 。蛋 白 質 化 學 修 飾 非 常 重 要 ，因 為 它 們 會 潛 在 地