哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、試劑盒PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE儀器、耗材離心機搖床研缽實驗步驟1. 切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結。 2. 將200 mg~1 g 的組織用預冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。 3. 500 g 離心細胞5 min，棄上請。貼壁生長細胞先用胰酶消化。4. 細胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸，500 g 離心5 min，棄上清，重復1次。5. 用1體積 的消化緩沖液重懸細胞。......閱讀全文
胸腺DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了濃鹽法小牛胸腺DNA制備的原理及操作步驟。實驗原理DNA在生物體內是以與蛋白質形成復合物的形式存在的，因此提取出脫氧核糖核酸蛋白復合物（DNP）后，必須將其中的蛋白質除去。小牛胸腺，魚類精子和植物種子的胚等含有豐富的DNA，可作為提取DNA的良好材料。動物和植物組織的脫氧核糖核蛋
酵母DNA微量制備
實驗概要本實驗介紹了分別從40ml和5ml酵母培養液中制備酵母DNA的操作流程。實驗步驟1. 酵母DNA微量制備(40ml)?? 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量(過夜)。?? 2) 將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS-
哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段：①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段；③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段；④從mRNA反轉錄產生cDNA。
質粒DNA的制備方法
有多種分離質粒的方法，如堿裂解法、煮沸裂解法、層析柱過濾法等。
質粒DNA的大量制備
實驗概要本方法用于從細菌中提純大量質粒DNA。主要試劑1. STE 0.1mol/L NaCl 10mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 2. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液TE酵母
快速制備酵母DNA法
實驗概要本實驗制備了酵母轉化質粒，快速從轉化酵母菌中分離了用于Southern分析的基因組DNA。主要試劑2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
酵母菌DNA制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材?玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1.? 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2.? 將1.5 ml 的過夜培養
質粒DNA大量制備實驗
堿裂解法 平衡離心法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。
酵母DNA的小量制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
制備互補DNA的方法
制備互補DNA，往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質，則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細胞而論，此細胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原)，則可從沉淀
DNA芯片的制備方式
DNA芯片又叫做基因芯片（gene chip）或基因微陣列（microarray），寡核酸芯片，或DNA微陣列，它是通過微陣列技術將高密度DNA片段陣列以一定的排列方式使其附著在玻璃、尼龍等材料上面。由于常用計算機硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。
質粒DNA的小量制備
實驗概要本方法用于從細菌中制備提純少量質粒DNA。主要試劑1. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris．Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 溶液Ｉ可成批配制，每瓶約100ml，在6.895×104Pa高壓下蒸氣滅菌15分鐘，貯存于4℃。2. 溶液Ⅱ 0.2
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料 酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒 異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液T
質粒DNA大量制備實驗
實驗方法原理?這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒?葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS異丙醇乙醇乙酸甲儀器、耗材?離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟?1.? 往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的L
λ噬菌體DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了λ噬菌體DNA的制備、操作步驟和注意事項。實驗原理λ噬菌體是最早使用的克隆載體，λ噬菌體的基因組是一長度約為50kb的雙鏈DNA分子，它在宿主細胞有兩種生活途徑：其一是裂解生長，環狀DNA ? 分子在細胞內多次復制，合成大量噬菌體基因產物，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進行下一次
“DNA探針”的制備過程
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別
制備DNA測序模板實驗——制備單鏈M13噬菌體DNA
本實驗包含了用于制備適用于雙脫氧測序的模板及適用于末端標記和化學測序的DNA的實驗方案。所有用于雙脫氧測序的雙鏈模板在與引物退火前必須變性，在一般應用上，堿變性在測序中的效果比熱變性好。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1
制備DNA測序模板實驗——小量裂解物中制備λ噬菌體DNA
實驗材料重組λ噬菌體試劑、試劑盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA異丙醇乙酸鈉TE儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1. ?在新鮮配制的λ頂層瓊脂糖和λ瓊脂糖平板上，通過在平板上裂解適于λ噬菌體生長的大腸桿菌菌株，制備重組λ噬菌體毒種原液。2. ?取700 μl 毒種液加入無菌的1.5
鮭精擔體DNA制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 鮭精DNA 試劑、試劑盒
質粒DNA的小量制備實驗——
實驗采用國產的質粒小量抽提試劑盒。它是一種新型的離子交換柱，在特定的條件下，使質粒能在離心過柱的瞬間，結合到質粒純化柱上，在一定條件下又能將質粒充分洗脫，從而實現質粒的快速純化。實驗材料DNA試劑、試劑盒LB培養基卵清溶菌酶異丙醇TE儀器、耗材離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟一、實驗步驟1. ?接種一
人外周血白細胞DNA制備
實驗概要本實驗從人外周血中制備了白細胞DNA，介紹了制備基本原理及操作步驟。實驗原理從全血制備白細胞DNA，可用非離子去污劑Triton ? X-100直接破裂血中紅細胞和白細胞的細胞膜，釋出血紅蛋白及細胞核，在反應體系中含一定濃度蔗糖，維護核膜內外的滲透壓，以防止核膜破裂，通過離心等手段即可獲得白
鮭精擔體DNA制備實驗
實驗材料 鮭精DNA試劑、試劑盒 TE酚氯仿乙酸鈉儀器、耗材 離心機搖床超聲儀實驗步驟 1. ?將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后，用攪拌棒于4℃攪拌過夜，最終獲得一種均勻粘稠液體。?2. ?將一個較大的超聲波探頭插入燒杯
質粒DNA的大量制備實驗
實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制備也簡單易行，但得到的DNA比較粗制。高純度的質粒DNA可通過氯化銫/溴化乙錠平衡離心法或層析法進一步純化粗制DNA得到。實驗材料 培養基菌株試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇乙酸鉀異丙醇儀器、耗材 離心管實驗
制備DNA測序模板實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材 巴斯德吸管試管離心機實驗步驟 1. ?如果起始用M13復制型DNA或M13單鏈DNA，以0.5 ng 重組M13mp復制型DNA或5~10 ng 單鏈DNA轉化40 μl ?感受態大腸桿菌DH5αF'株
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 細菌克隆試劑、試劑盒 LB培養基抗生素葡
DNA熒光染色的樣品制備
試劑、試劑盒 PBS儀器、耗材 DNA熒光染料 流式細胞儀實驗步驟 DNA是細胞內含量比較恒定的參量，隨著細胞增殖周期的各時相而發生變化。熒光染料（如PI）可選擇性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的雙螺旋堿基之間，與細胞特異性結合，DNA含量與熒光染料的結合量成正比，因此通過測定熒光強度可獲知細胞的
DNA－親和介質的制備實驗
試劑、試劑盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸銨乙醇酚 氯仿氯仿 異戊醇NaOAcT4 DNA連接酶酚異丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸鉀KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶緩沖液TE接頭-激酶緩沖液乙醇胺-