質粒DNA大量制備實驗

大腸桿菌

葡萄糖 Tris EDTA TE NaOH SDS 異丙醇 乙醇 乙酸甲

離心機 漩渦混合器 水浴鍋

1.  往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的LB培養基，然后加入5 ml 過夜培養的。

2.  帶有所需質粒的大腸桿菌培養物，再于37℃培養至飽和狀態（OD₆₀₀≈4）。
 

3.  于4℃，6 000 g 離心10 min，用4 ml GTE。

4.  溶液重懸沉淀，并轉移到一個容積≥20 ml  的高速離心管中。（細菌沉淀可以在-20℃或-70℃無限期保存。）

5.  加入1 ml 新配的含25 mg/ml 溶菌酶的GTE溶液，重懸沉淀，于室溫放置10 min。

6.  加入10 ml 新配的NaOH/SDS溶液，并且輕輕混勻直至液體變得均一、清亮而粘稠。于冰上放置10 min。

7.  加入7.5 ml 乙酸鉀溶液，用吸管輕輕攪拌直至粘稠度下降并形成大的沉淀，于冰上放置 10 min。

8.  于4℃，20 000 g 離心10 min 將上清輕輕倒入至另一個干凈的離心管中，如果有可見的飄浮物可用數層紗布過濾。

9.  加入0.6倍體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫放置5~10 min。

10.  于室溫1500 g 離心10 min。

11.  加入2 ml 70%乙酵輕輕洗滌沉淀，然后短暫快速離心，吸去乙醇，并真空干燥。

12.  沉淀可以在4℃無限期保存。