BioTechniques：無細胞表達究竟哪家強？
無細胞表達系統讓研究人員能夠快速生成蛋白質，從而受到人們的青睞。來自真核細胞的裂解物能夠對蛋白質進行翻譯后修飾，但不同翻譯系統的細微差別也會導致蛋白生產的變化。無細胞表達究竟哪家強？亞利桑那州立大學的研究人員近日在《BioTechniques》上發表了他們的比較結果。 在目前的無細胞蛋白合成而言，大腸桿菌仍然是首選。不過，由于對人類和哺乳動物蛋白及其翻譯后修飾的興趣日益增加，真核系統也逐漸受到人們的歡迎。此外，對于某些技術，如mRNA展示和核酸可編程的蛋白芯片（NAPPA），研究人員傾向于使用真核表達系統來研究蛋白質互作。 在這項研究中，研究人員比較了市場上三種常用的真核無細胞表達系統：麥胚提取物（WGE，Promega）、兔網織紅細胞裂解物（RRL，Promega）和HeLa細胞裂解物（HCL、賽默飛世爾）。 對于每個系統，研究人員定量了環狀質粒和線性DNA所產生的螢光素酶蛋白的量。這些DNA模板的5’非翻譯區（UT......閱讀全文
網織紅細胞裂解物的概念
中文名稱網織紅細胞裂解物英文名稱reticulocyte lysate定 義用于測定信使核糖核酸(mRNA)活性的一種體外翻譯分析系統。通常由藥物致貧血而發育不完全的兔網織紅細胞制備，但須用RNA酶去除其中內源的mRNA。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
實驗材料?培養細胞試劑、試劑盒?DMEMHClTBSTris儀器、耗材?微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟 1.? 培養待標記的細胞至適當的生長期。?對于貼壁細胞：?2a.? 吸去培養液，用37℃的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽培養液，吸盡該培養液。?3a.
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 培養細胞 試劑、試劑盒
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 培養細胞 試劑、試劑盒
如何研究細胞關鍵蛋白
來自上海生科院生化與所的研究人員利用多種細胞手段發現了兩種關鍵細胞蛋白的作用機理，這兩種蛋白分別是C末端Src激酶(C-terminal Src kinase，Csk)和細胞極性封閉蛋白Occludin。研究論文分別發表在《Proteomic》和《Developmental Cell》上。
TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統問題與解答
1)什么是TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統？TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統為研究人員提供了一種可供選擇的真核體外翻譯系統，一種單管、偶聯轉錄/翻譯系統。將轉錄產物摻入到翻譯混合物中，TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統簡化了體外翻譯的過程，縮短了翻譯所需的時間。標準兔網織紅細胞裂解物翻譯系統所用的RNA來源
培養細胞標記和裂解物的制備實驗——溫和去污裂解法
實驗材料培養細胞試劑、試劑盒DMEMHClTBSTris儀器、耗材微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟1. ?培養待標記的細胞至適當的生長期。?對于貼壁細胞：?2a. ?吸去培養液，用37℃的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽培養液，吸盡該培養液。?3a. ?加入
培養細胞標記和裂解物的制備實驗——SDS煮沸法
實驗材料培養細胞試劑、試劑盒SDS裂解液RIPA校正液免疫沉淀洗液儀器、耗材離心機培養箱玻璃培養管實驗步驟1. ?標記和洗滌細胞（溫和去污裂解法，步驟1~7）。?2a. ?對于貼壁細胞：加入適量SDS裂解液至培養皿中。（35 mm 培養皿加0.1 ml，50 mm 培養皿0.25 ml，100 ml
BioTechniques：無細胞表達究竟哪家強？
無細胞表達系統讓研究人員能夠快速生成蛋白質，從而受到人們的青睞。來自真核細胞的裂解物能夠對蛋白質進行翻譯后修飾，但不同翻譯系統的細微差別也會導致蛋白生產的變化。無細胞表達究竟哪家強？亞利桑那州立大學的研究人員近日在《BioTechniques》上發表了他們的比較結果。 在目前的無細胞蛋白合成而
BioTechniques：無細胞表達究竟哪家強？
無細胞表達系統讓研究人員能夠快速生成蛋白質，從而受到人們的青睞。來自真核細胞的裂解物能夠對蛋白質進行翻譯后修飾，但不同翻譯系統的細微差別也會導致蛋白生產的變化。無細胞表達究竟哪家強？亞利桑那州立大學的研究人員近日在《BioTechniques》上發表了他們的比較結果。 在目前的無細胞蛋白合成而
研究T細胞刺激蛋白和白細胞介素
梅納德說：“總體而言，我們的數據確定了兩種與炎癥性腸病相關的途徑之間的協同作用-T細胞衍生的IL-10和ICOSL依賴性抗共生抗體-可以促進與腸道菌群的共生。”“此外，我們將ICOSL缺陷確定為探索抗共生抗體在宿主菌群共生中發揮作用的有效平臺。”阿拉巴馬州伯明翰-研究人員發現，T細胞刺激蛋白(ICO
簡述無細胞蛋白質合成系統的發展歷史
微生物學創始人巴斯德最早采用無細胞體系研究酵母酒精發酵中起作用的酶系問題。20世紀50年代生物學家首次采用兔網織紅細胞裂解物（rabbitreticulocytelysate）制備的無細胞系統實現了蛋白質的體外合成 [1]。到了20世紀80年代中期，前蘇聯學者Spirin等人通過在無細胞體系中連
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒
材料：緩沖液和溶液：氯仿NaCl（固體）聚乙二醇（PEG 8000）SM酶和緩沖液：胰Dnase I (1mg/ml)胰Dnase I (1mg/ml)于TE中（ph7.6）離心機和轉子：Sorvall? GSA 轉子或相當型號專用設備：量筒（2L）載體和菌株：大腸桿菌培養物，經λ噬菌體感染和裂解方
無細胞蛋白表達技術介紹
無細胞蛋白表達技術是指用含有蛋白合成必需的組分（核糖體，轉運RNA，氨酰合成酶，啟動/延伸/終止因子，三磷酸鳥苷，ATP，Mg2+和K+）的細胞裂解物在體外進行蛋白合成。與傳統的基于細菌或真核細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的
重組人蛋白細胞因子的研究選擇—細胞因子
1．重組蛋白表達體系MCE 重組蛋白表達體系主要有：大腸桿菌，酵母細胞，昆蟲細胞和哺乳動物細胞。2．重組蛋白純度和濃度測定重組蛋白純度測定方法：a. SDS-PAGE 測定法；b. HPLC 測定法；c. 銀染測定法。重組蛋白濃度測定方法：a. Bradford 蛋白定量測定法；b. BCA 蛋白定
重組人蛋白細胞因子的研究選擇細胞因子
．重組蛋白表達體系??????? MCE 重組蛋白表達體系主要有：大腸桿菌，酵母細胞，昆蟲細胞和哺乳動物細胞。?2．重組蛋白純度和濃度測定?重組蛋白純度測定方法：a. SDS-PAGE 測定法；b. HPLC 測定法；c. 銀染測定法。重組蛋白濃度測定方法：a. Bradford 蛋白定量測定法；b
研究揭示蛋白RhsP靶向獵物細胞的分子機制
中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院與澳門大學合作，研究揭示細菌Ⅵ型分泌系統（Type VI secretion system, T6SS）分泌效應蛋白RhsP靶向獵物細胞的分子機制。相關研究在線發表于Cell Reports。 該研究發現，腸炎弧菌效應蛋白RhsP形成一個桶狀結構，通過自水解引發
單細胞蛋白質組學：讓細胞個體研究更加精細
????細胞是生命活動的基本單元。對細胞的精確認知是理解細胞在生理和病理過程中功能的先決條件。????在組織、器官或個體中，細胞具有非常大的異質性，而傳統的研究手段針對大量細胞進行分析，得到的是大量細胞的平均結果，無法區分不同細胞個體對于大量樣品結果的具體貢獻值，從而忽視或掩蓋了單細胞的個體差異，不
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗
實驗方法原理 從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。實驗材料 大腸桿菌培養物試劑、試劑盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ儀器、耗材 S
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗
從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存
無細胞蛋白表達系統的選擇
圖1.? 與細胞內蛋白表達相比，無細胞蛋白表達系統能夠顯著地節約時間。 與基于細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。本文介紹了根據模板類型、期望產率以及下游實驗等因素來選擇無細胞蛋白表達系統的標準。
《自然》：研究發現會“喚醒”癌細胞的蛋白質
這一發現有助于醫生了解并預防癌細胞在體內的擴散 美國科學家最近發現，有些癌細胞可以釋放一種叫“骨橋蛋白”的蛋白質，這種蛋白質會“喚醒”體內休眠的癌細胞。這一發現有助于醫生了解并預防癌細胞在體內的擴散。 據新一期英國《自然》雜志網絡版報道，美國懷特黑德生物醫學研究所的科學家給實驗鼠同時移植了兩種癌
活細胞蛋白質標記與成像研究獲進展
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/7/504935.shtm近日，華東理工大學光遺傳學與合成生物學交叉學科研究中心楊弋、朱麟勇、陳顯軍團隊在活細胞蛋白質標記與成像研究中取得重要進展，相關研究在《細胞發現》發表。 ???人造熒光蛋白及熒光
蛋白質泛素化調控細胞凋亡研究取得進展
細胞凋亡是維持機體組織平衡的重要生物學過程，腫瘤細胞的抗凋亡現象是目前癌癥治療領域中的主要障礙。在細胞凋亡過程中，caspase家族扮演著關鍵角色，其中caspase-8作為凋亡起始因子顯得尤為重要。HECTD3是近年來發現的一個新的E3泛素連接酶。中科院昆明動物研究所陳策實研究員課題組前期研究
免疫沉淀（IP）常見問題分析與解決辦法
免疫沉淀（IP）常見問題分析 問題 可能原因 解決辦法 高背景 吸取了不溶于去污劑中的蛋白（沉淀） 離心后立刻吸取上清，如果發生了重懸，則需要再次離心
免疫沉淀的實驗方法介紹
免疫沉淀的實驗過程比較簡單，一般分為3個階段；①抗原溶液的制備；②裂解物非特異性本底的預處理；③免疫復合物的形成與純化。 免疫沉淀的第一步是制備抗原溶液。任何抗原溶液均可作為免疫沉淀的材料來源，但免疫沉淀一般采用細胞或組織制備的裂解物。裂解物的制備可采用多種方法，其中首選用溫和的去污劑如非離子去污劑
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料?Sf細胞試劑、試劑盒?胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材?培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟 1.? 接種2.5×108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥ 2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料Sf細胞試劑、試劑盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟1. ?接種2.5x108?Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2?培養瓶中，27℃溫育≥2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml 病毒貯液中取0.5
研究揭示SAMHD1蛋白重要細胞學新功能
來自吉林大學第一醫院的聲音：讓我們再一次領先于世界! 吉林大學白求恩第一醫院艾滋病與病毒研究所再次傳來喜訊：該團隊在世界上首次證明人SAMHD1蛋白具有調控內源逆轉錄轉座子活性的能力，成功揭示了SAMHD1蛋白在人體內的一大重要細胞學功能。這一重大發現已于九月十二日以在線發表的形式刊登在世