蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗（一）
一、化學法和酶法細胞裂解微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些機械的方法經常會遇到過度的產熱和樣品被氧化等問題。微量細胞裂解的簡化方面的重大進步是以去垢劑為基礎的試劑的發展，如 frPer(Chuetal.，1998) 和 BUgBUSter(GrabSkietaL，1999)。這些試劑的使用不需要昂貴的設備，并且作用非常快速和便于使用。是非常方便有效的髙通量的制備細胞提取物的方法。高活性的酶和酶的混合試劑已經被用來提髙裂解效率和降低提取物的由于消化不完全的基因組 DNA 所導致的高黏度。單獨使用或聯合使用這些商業上可獲得的裂解試劑和酶 (表 18.1) 能夠有效地裂解細菌、酵母、植物、昆蟲和高等真核生物的細胞，并從中提取蛋白質。以去垢劑為基礎的從真核細胞和......閱讀全文
蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗（一）
一、化學法和酶法細胞裂解微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些機械的方法經常會遇到過度的產熱和樣品被氧化等問題。微量細胞裂解的簡化方面的重大進
蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗
實驗步驟一、化學法和酶法細胞裂解微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些機械的方法經常會遇到過度的產熱和樣品被氧化等問題。微量細胞裂解的簡化方面的重大進
蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗
實驗步驟 一、化學法和酶法細胞裂解 微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些
蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗（二）
二、機械法裂解細胞超聲和高壓裂解已經被高效地應用于微生物、植物和動物細胞的裂解。這些方法已經采用了幾十年，其設備和原理已經被詳細闡明（Harrison,1991;Hopkins，1991;Mid-delberg，1995)。超聲裂解是通過調諧的探頭或機臂的共鳴（15~25kHz) 所引發的髙
蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗（三）
四、細胞裂解的流程、試劑和技巧下文所述的以細胞提取物的產品質量為出發點的各種策略和指導方針適用于大多數下游純化及分析過程。盡管介紹的重點是在小規模或較大的實驗室規模的大腸桿菌裂解上，但是一些技術還是可以用于其他來源的細胞裂解和細胞內蛋白質提取，并且是可以放大的。廣泛的蛋白質純化方面的文獻為這里列出的
蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗（四）
小規模大腸桿菌細胞裂解規程1.去垢劑為基礎的裂解試劑10 mL 裂解試劑溶液的配方：10 mLB-Per 或 BugBuster,20/iLLysonaseBioprocessingReagent。如果需要減少蛋白質水解和增加目標蛋白質可溶性及穩定性可以添加，如 EDTA、蛋白酶抑制劑、
核提取物的制備實驗（一）
從培養細胞中分離的細胞核制備成的提取物在體外轉錄和mRNA加工中具有精確的功能，（1）純化蛋白質（2）核提取物。實驗方法原理通過向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。對于特定的蛋白質，影響蛋白質鹽析的主要因素
核提取物的制備實驗
實驗材料?哺乳動物試劑、試劑盒?PBS低滲緩沖液低鹽緩沖液透析緩沖液儀器、耗材?轉子離心機電導計透析膜勻漿機離心管實驗步驟 1a.? 收集轉瓶培養的細胞：將濃度為5~10×108細胞/l 的培養液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min，將細胞收入50 ml 錐形離心管中（每管收2~3 L
酵母提取物的制備實驗
實驗方法原理酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨，是最簡便的方法之一。這對于小體積（如＜1mL的）和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測，細胞破碎率一般＞95%。實驗材料新鮮培養的酵母細胞
核提取物的制備實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。對于特定的蛋白質，影響蛋白質鹽析的主要因素：無機鹽的種類、濃度、溫度和PH值。
酵母提取物的制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論
酵母提取物的制備實驗
實驗方法原理 酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨，是最簡便的方法之一。這對于小體積（如＜1mL的）和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測，細胞破碎率一般＞95%。實驗材料 新鮮培養的酵母
蛋白質的純化實驗
實驗材料 Sephacryl S-300膠體試劑、試劑盒 緩沖液buffer A-150儀器、耗材 色析管柱鐵夾試管鐵架水平儀收集器濃縮用離心機 濃縮用離心管實驗步驟 一、儀器設備色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；部分收集器（frac
蛋白質的純化實驗
膠體過濾法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 Sephacryl S-300膠體 試劑、試劑盒
蛋白質的純化實驗
不發生電泳現象，蛋白質粒子帶負電荷，在電場中向負極移動，蛋白質粒子帶正電荷；在等電點偏堿性溶液中，在電場中向正極移動，可以將蛋白質進行分離純化。這種現象稱為蛋白質電泳(Electrophoresis).蛋白質的分離純化的一般原則①高回收率②高純度③高活性④方便與快捷⑤經濟蛋白質的分離純化的一般步驟①
蛋白質印跡法所需樣本的制備方法
1、單層貼壁細胞總蛋白的提取：（1）倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。（2）每瓶細胞加3ml 4℃預冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動1min洗滌細胞，然后棄去洗液。重復以上操作兩次，共洗細胞
核提取物的制備實驗（二）
從培養細胞中分離的細胞核制備成的提取物在體外轉錄和mRNA加工中具有精確的功能，（1）純化蛋白質（2）核提取物。實驗材料細胞核試劑、試劑盒KCl高鹽緩沖液儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?按基本方案中歩驟1~7操作。?2. ?將細胞核懸液分成5等份。在冷室內不斷攪拌，按如下方法在每份懸液中加入1
蛋白質的分離純化（一）
蛋白質的分離純化是生物化學技術中的重要內容，在科研和生產中都有重要作用。蛋白質純化的流程大致包括選材及預處理、細胞破碎及抽提、初步提取和精制純化等部分，根據具體的純化目的和要求可以有所不同。 選材的主要原則是原料易得，蛋白含量高，最好便于純化。蛋白質的主要來源包括動物、植物和微生物。由于種屬差
卵黃抗體制備的所需實驗材料介紹
1.健康產蛋雞（最好是SPF雞）、免疫抗原（如雞新城疫滅活疫苗）、弗氏佐劑。?[3]?2.滅菌生理鹽水或0.01mol/L pH7.2 PBS、海藻酸鈉、飽和硫酸銨等。?[3]?3.毛細滴管、注射器、碘酊棉、酒精棉、燒杯、玻璃棒、離心管、pH試紙等。?[3]?4.微量振蕩器、離心機、分光光度計等。
蛋白質的表達、分離、純化實驗
實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸（NTA）使鎳離子（Ni2+）固相化的層析介質加以提純，實為金屬熬合親和層析（MCAC）。蛋白質的純化程
蛋白質的表達、分離、純化實驗
基因重組—層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉
蛋白質純化的方法選擇（一）
摘要 :?隨著分子生物學的發展，越來越多的科研人員熟練掌握了分子生物學的各種試驗技術，并研制成套試劑盒，使基因克隆表達變得越來越容易。但分子生物學的上游工作往往并非是最終目的，分子克隆與表達的關鍵是要拿到純的表達產物，以研究其生物學作用，或者大量生產出可用于疾病治療的生物制品。相對與上游工作來說，分
水的純化與超純水的制備（一）
摘要?????? 這是一篇關于水的純化和超純水制備的綜述。介紹了各種純化水的技術與某些新近的進展。包括蒸餾法、離子交換法、電滲析法、反滲透法和紫外線照射法等。關鍵部分?? 水的純化?? 超純水?? 離子交換?? 電滲析?? 反滲透?? ?一、??????????? 前言關于高純水的制備在聞瑞梅先生等
細胞和亞細胞提取物的制備實驗
方案1 哺乳動物組織的勻漿實驗 方案2 用于免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗 方案3 用于免疫印跡的動物培養細胞、酵母和細菌的裂解實驗 方案4 氮艙減壓法裂解培養細胞實驗 方案5 細菌中重組蛋白的小量提取實驗 方案6 細菌中重組蛋白的
細胞和亞細胞提取物的制備實驗
從組織和細胞中提取蛋白可能是蛋白質組研究中最關鍵的一步，因為這一步影響了蛋白的產率、生物活性和特定目的蛋白結構的完整性。因此，我們要注意蛋白提取條件的選擇。主要目標是在破壞力最小、保持蛋白結構完整性的前提下，可重復地使細胞最大程度地裂解。方案1 哺乳動物組織的勻漿實驗實驗方法原理對于細胞內蛋白的純化
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
試劑、試劑盒?甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS) 緩沖液 G緩沖液 H 緩沖液 DTM 緩沖液+0.1 ml L KCl實驗步驟 材料HeLa 細胞（培養和保存條件見下文。我們也成功地使用過 CellexBiosciences 公司制備并冷凍的 HeLa 細胞
細胞和亞細胞提取物的制備實驗
實驗方法原理 對于細胞內蛋白的純化和特性分析，重要的是選擇一種有效的方法來破碎細胞或組織，使蛋白迅速地從胞內相對隔離的空間中釋放到緩沖液中，而該緩沖液應對所研究的蛋白的生物活性沒有影響。廣泛使用的破碎軟組織的方法之一是勻漿。在本方案中，討論了使用機械力勻漿組織：在 Potter-Elvehjem
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
在本實驗中，基本上是按Dignam等（1983)所述的方法從HeLa細胞制備核提取物的。這一基本方法大概是制備體外轉錄和DNA結合實驗用因子的最常用的方法。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS)緩沖液
蛋白質的生物合成標記實驗（一）
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞生物按照從脫氧核糖核酸 (DNA)轉錄得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遺傳信息合成蛋白質的過程。由于mRNA上的遺傳信息是以密碼（見遺傳密碼）形式存在的，只有合成為蛋白質才能表達出生物性狀，因此將蛋白質生物合成比擬為轉譯或翻譯。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒甲硫氨酸PBS
膜蛋白的純化實驗（一）
一、膜的制備從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能高表達目的膜蛋白的組織或細胞系就很重要。最近，人們對于將細胞表面蛋白質作為鑒定不同