蒽酮比色定糖法測定可溶性糖含量

實驗目的

1.了解蒽酮法測定可溶性糖含量的原理
2.學習求標準曲線方程—最小二乘法
3. 掌握分光光度計的使用

實驗原理

蒽酮比色定糖法是一個快速而方便的定糖方法，在強酸性條件下，蒽酮可以與游離的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（還原性和非還原性）作用生成藍綠色的糖醛衍生物，其顏色的深淺與糖的含量在一定范圍內成正比。蒽酮也可以和其他一些糖類發生反應，但顯現的顏色不同。當存在含有較多色氨酸的蛋白質時，反應不穩定，呈現紅色。上述特定的糖類物質，反應較穩定。
反應式：
該法特點：靈敏度高，測定量少，快速方便。

實驗步驟
1． 求標準曲線方程
取6只試管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）標準溶液，沸騰7分鐘取出，用自來水冷至室溫，用721分光光度計比色，波長620nm，1＃管作為參比(保留)，求標準曲線方程。（G濃度為 200μg／mL，蒽酮試劑：2克蒽酮／每升85%H2SO4）

2. 樣品含糖量的測定
（1）取菜葉（包菜和白菜兩個樣）準確稱取1.00克剪碎研細后，放入大試管，加入25mL蒸餾水，煮沸10分鐘，通過漏斗濾入250mL容量瓶中（可以抽濾），并用煮沸蒸餾水提取兩次，濾液并入容量瓶中，濾紙上的殘渣用水沖兩次，冷卻定容至刻度。
（2）吸取0.5mL 濾液于編號的三只試管中，以蒸餾水補足1.00mL；另吸取1.00mL濾液于另編號的三只試管中，加蒽酮試劑5.0mL（于冷水浴中操作），搖勻后于沸水浴中煮沸7分鐘，取出冷卻至室溫，以求標準曲線的1＃管作為參比，用721分光光度計在620nm處測吸光度或透過率。
最小二乘法求標準曲線方程的公式：

X：G 的濃度（μg／mL）Y：吸光度A＝－㏒T
本實驗要求相關系數r≥0.99