限制性內切酶簡介
限制性內切酶（restriction endonuclease）全稱限制性核酸內切酶，是一種能將雙股DNA切開的酶。切割方法是將糖類分子與磷酸之間的鍵結切斷，進而于兩條DNA鏈上各產生一個切口，且不破壞核苷酸與堿基。限制酶在分子生物學與遺傳工程領域有廣泛的應用。......閱讀全文
限制性內切酶簡介
限制性內切酶（restriction endonuclease）全稱限制性核酸內切酶，是一種能將雙股DNA切開的酶。切割方法是將糖類分子與磷酸之間的鍵結切斷，進而于兩條DNA鏈上各產生一個切口，且不破壞核苷酸與堿基。限制酶在分子生物學與遺傳工程領域有廣泛的應用。
關于瓊脂糖凝膠塊中DNA的限制性內切酶消化的簡介
1．應使用消毒溶液及戴無菌手套以免DNA降解。 2．在Falcon試管中用1×TE溶液漂洗凝膠塊20min 3次，以去除EDTA。 3．混合：酶反應緩沖液（高、中或低鹽緩沖液），100mmol/L亞精胺（只用于高鹽緩沖液狀態），10～20單位的內切酶。20單位的內切酶就足以過夜完全消化10μ
限制性內切酶的用途
用于DNA基因組物理圖譜的組建；基因的定位和基因分離；DNA分子堿基序列分析；比較相關的DNA分子和遺傳工程。 限制性核酸內切酶是由細菌產生的， 限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。
限制性內切酶切割DNA
一、實驗目的1．通過對DNA的酶切，學會設計構建體外重組DNA分子；2．根據目的基因合理選擇載體與限制性內切酶；3．掌握DNA的酶切技術。 二、實驗原理 限制性內切酶是從細菌中分離出來的一種能在特異位點切割DNA分子的核酸內切酶，目前已從多種細菌中分離出超過400種，識別各自不同
限制性內切酶消化DNA實驗
實驗方法原理?進行限制酶切割反應只需簡單地將酶和DNA樣品放在合適的反應緩沖液溫育，其中DNA和酶的量、緩沖液的離子強度、溫育溫度和時間都依具體的反應而改變。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?TE酶切緩沖液EDTA儀器、耗材?電泳儀實驗步驟?1.? 混合下列溶液于一個無菌的微量離心管中（1）x μl?
限制性內切酶消化DNA實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 限制性內切酶種類雖然很多 , 但反應條件都十分相似 。一般需要較純的底物DNA、Mg2+、Tris-HCl 緩沖液, 通常在37℃保溫以酶解DNA 。 實驗材料
限制性內切酶的生理意義
限制作用實際就是限制酶降解外源DNA ，維護宿主遺傳穩定的保護機制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。所以，能產生防御病毒侵染的限制酶的細菌，其自身的基因組中可能有該酶識別的序列，只是該識別序列或酶切位點被甲基
限制性內切酶質量控制
單位定義 限制性內切酶的一個活性單位是指，在50μl 的反應體系里，采用隨酶提供的 NEBuffer，用1個小時的時間，徹底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反應應在帶蓋的Eppendorf 管中進行，選用技術數據卡上所標明的適宜溫度。在確定酶活性之前，濃縮的酶應該用推薦的貯存液稀
關于限制性內切酶的由來
一般是以微生物屬名的第一個字母和種名的前兩個字母組成，第四個字母表示菌株（品系）。例如，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內切酶稱為Bam H，在同一品系細菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI
限制性內切酶有哪些作用
不同限制性核酸內切酶識別和切割的特異性不同。DNA在限制性內切核酸酶的作用下，使多聚核苷酸鏈上磷酸二酯鍵斷開的位置被稱為酶切位點（或稱為靶序列），可用↓表示。絕大多數的Ⅱ型限制性核酸內切酶，都能識別48個核苷酸組成的特定酶切位點，并且一般是在識別序列內部，如C↓GATCC、AT↓CGAT、GTC↓G
限制性內切酶質量控制
?單位定義限制性內切酶的一個活性單位是指，在50μl 的反應體系里，采用隨酶提供的 NEBuffer，用1個小時的時間，徹底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反應應在帶蓋的Eppendorf 管中進行，選用技術數據卡上所標明的適宜溫度。在確定酶活性之前，濃縮的酶應該用推薦的貯存液稀釋成大約1,
DNA分子的限制性內切酶消化
限制性內切酶可特異地結合于一段被稱為限制酶識別序列的DNA序列位點上并在此切割雙鏈DNA。絕大多數限制性內切酶識別長度為4、5或6個核苷酸且呈二重對稱的特異序列，切割位點相對于二重對稱軸的位置因酶而異。一些酶恰在對稱軸處同時切割DNA雙鏈而產生帶平端的DNA片段，另一些酶則在對稱軸兩側相對的位置上分
簡述Ⅱ型限制性內切酶的由來
一般是以微生物屬名的第一個字母和種名的前兩個字母組成，第四個字母表示菌株（品系）。例如，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內切酶稱為Bam H，在同一品系細菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI
關于限制性內切酶類型的介紹
根據限制酶的結構，輔因子的需求切位與作用方式，可將限制酶分為三種類型，分別是第一型（Type I）、第二型（Type Ⅱ）及第三型（Type Ⅲ）。 第一型限制酶 同時具有修飾（modification）及認知切割（restriction）的作用；另有認知（recognize)DNA上特定堿
簡述Ⅱ型限制性內切酶的用途
用于DNA基因組物理圖譜的組建；基因的定位和基因分離；DNA分子堿基序列分析；比較相關的DNA分子和遺傳工程；進行基因工程編輯。 限制性核酸內切酶是由細菌產生的，其生理意義是提高自身的防御能力. 限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。
常見限制性內切酶識別序列(酶切位點)
常見限制性內切酶識別序列(酶切位點)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等）在分子克隆實驗中，限制性內切酶是必不可少的工具酶。無論是構建克隆載體還是表達載體，要根據載體選擇合適的內切酶（當然，使用T載就不必考慮了）。先將引物設計好，然后添加酶切識別序列到引物5' 端。
DNA限制性內切酶酶切分析
一、原理限制性內切酶和基因載體是DNA重組技術中的兩個極其重要的方面。限制性內切酶是首先在大腸桿菌中發現的能夠分解外來DNA的核酸酶。與核酸外切酶相比，該酶可從DNA雙鏈內部特異的核苷酸序列處將DNA雙鏈切斷，產生帶有粘性或平頭末端的DNA片段。把要克隆的外來DNA和載體DNA用同一種限制性內切酶切
影響限制性內切酶活性的因素
1、DNA純度在DNA樣品中若含有蛋白質,或沒有去除干凈制備過程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高濃度金屬離子,均會降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用.2、核酸內切限制酶的緩沖液核酸內切限制酶的標準緩沖液包括氯化鎂、氯化鈉或氯化鉀、Tris-HCL、巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT
常見限制性內切酶識別序列(酶切位點)
常見限制性內切酶識別序列(酶切位點)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等）在分子克隆實驗中，限制性內切酶是必不可少的工具酶。無論是構建克隆載體還是表達載體，要根據載體選擇合適的內切酶（當然，使用T載就不必考慮了）。先將引物設計好，然后添加酶切識別序列到引物5' 端。
簡述限制性內切酶的分布區域
限制性核酸內切酶分布極廣，幾乎在所有細菌的屬、種中都發現至少一種限制性內切酶，多者在一屬中就有幾十種，例如在嗜血桿菌屬中（Haemophilus）現已發現的就有22種。有的菌株含酶量極低，很難分離定性；然而在有的菌株中，酶含量極高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegypti
限制性內切酶酶切反應實驗原理
限制性內切酶已有百余種，每種酶有其特定的核苷酸序列識別特異性，酶的活性需Mg2+來激活。不同的酶也有許多差別：有些酶除需Mg2+外，還需ATP等其他輔助因子的激活；切割位點和識別序列間的距離不同；某些內切酶同時具有甲基化作用。根據這些差別，可將限制性內切酶分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。Ⅱ型限制性內切酶只需要
限制性內切酶消化DNA實驗——部分消化
實驗方法原理有時需要得到僅在DNA片段的內部存在的部分限制性位點切割產生DNA，這在用待克隆片段內部存在的限制酶切位點進行克隆和構建酶切圖譜時特別有用。實驗材料DNA試劑、試劑盒限制性內切酶緩沖液儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?配制100 ul 含DNA和1x限制酶緩沖液的反應混合物。?2. ?將反
簡述Ⅱ型限制性內切酶的生理意義
限制作用實際就是限制酶降解外源DNA [1] ，維護宿主遺傳穩定的保護機制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。所以，能產生防御病毒侵染的限制酶的細菌，其自身的基因組中可能有該酶識別的序列，只是該識別序列或酶切位
DNA的限制性內切酶酶切反應
[實驗目的] 通過本實驗學習DNA的限制性內切酶酶切反應的基本原理與實驗技術。 [實驗原理] 1.限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA 序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作
限制性內切酶的分類性質的介紹
根據酶的功能特性、大小及反應時所需的輔助因子，限制性內切酶可分為兩大類，即I類酶和Ⅱ酶。最早從大腸桿菌中發現的EcoK、EcoB就屬于I類酶。其分子量較大；反應過程中除需Mg2+外，還需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上沒有特異性的酶解片斷，這是I、Ⅱ類酶之間最明顯的差異。因此，I類
關于Ⅱ型限制性內切酶的基本介紹
限制性核酸內切酶是可以識別并附著特定的核苷酸序列，并對每條鏈中特定部位的兩個脫氧核糖核苷酸之間的磷酸二酯鍵進行切割的一類酶，簡稱限制酶。根據限制酶的結構，輔因子的需求切位與作用方式，可將限制酶分為三種類型，分別是第一型（Type I）、第二型（Type II）及第三型（Type III）。Ⅰ型限
DNA的限制性內切酶酶切分析
限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處的DNA，而Ⅲ類酶在識別位點上切割 DNA分子，
限制性內切酶（restriction－enzyme）酶譜分析
一、實驗目的在DNA上以限制性內切酶的酶切位點作為標記所繪制的物理圖譜就是限制性內切酶圖譜，限制性內切酶圖譜與其他相關資料聯合使用，可用于基因克隆、分離和基因功能研究。二、實驗原理（一）酶切圖譜的構建限制性內切酶在DNA上有特異的識別和切割位點，可將DNA切開而得到兩個或兩個以上的大小不同的片段，這
關于DNA的限制性內切酶酶切分析
限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處的DNA，而Ⅲ類酶在識別位點上切割DNA分子,然
選擇多種限制性內切酶的基本準則
是選擇不能在非酶切位點切斷靶DNA的酶。裂解核心區的內切酶使反向PCR只能擴增引物所定模板(依賴于引物)的上游或下游區，而不裂解核心區的酶則使兩側序列都擴增。Southern雜交來確定內切酶用以產生大小適于環化及反向PCR的片段的末端片段。