Westernblot的基本流程
1.蛋白處理：此步驟是關鍵，蛋白處理的好否決定結果好壞。取細胞，3000rpm 3min離心，加入含蛋白酶抑制劑（現做現加）的細胞裂解液(本實驗室選擇RIPA，1×106/L細胞對應100ul)，槍尖反復吹吸裂解細胞（此步非常重要，容易出現鼻涕樣的液體，此為裂解不充分的緣故，所以應反復吹打或者置于振蕩器上，直**鼻涕狀液體消失）。冰上放置**少半小時。 2.煮蛋白：12000rpm，15min離心，吸取上清，加入Loading buffer后于沸水中煮5min后,放于-80保存。 3.清水洗玻璃板，無水酒精擦洗干凈，夾膠圈，防止漏膠。 4.配制10%分離膠，加入垂直板中，再加入1ml水液封（加入TEMED立即搖勻加入，加水液封時要緩慢些，防止把膠沖變形）。 5.20分鐘后，把上清水倒掉，用濾紙把剩余的水吸干。配制5%濃縮膠（按1.5倍體積配液，保證足量），立即加入分離膠上層（**不能出現空泡），立即插梳子。10-20......閱讀全文
Westernblot的基本流程
1.蛋白處理：此步驟是關鍵，蛋白處理的好否決定結果好壞。取細胞，3000rpm 3min離心，加入含蛋白酶抑制劑（現做現加）的細胞裂解液(本實驗室選擇RIPA，1×106/L細胞對應100ul)，槍尖反復吹吸裂解細胞（此步非常重要，容易出現鼻涕樣的液體，此為裂解不充分的緣故，所以應反復吹打或者置
Westernblot
實驗概要免疫印跡是一個用于蛋白質分析的常規技術，在電場的作用下將電泳分離的蛋白從凝膠轉移至一種固相支持物，然后利用抗原—抗體的特異性反應，從蛋白混合物中檢測出目標蛋白，從而定量或定性地確定正常或實驗條件下細胞或組織中目標蛋白的表達情況。Western blot還可用于蛋白—蛋白、蛋白—DNA
Westernblot法的應用
Westernblot法應用分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中時常會用到的一種實驗方法,并且是一種能對蛋白進行定性和半定量的分析方法。是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色,并且通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。蛋白質分析中應用的
什么是Westernblot法？
Westernblot法即是一種將電泳與KIJSA結合起來的技術,可分為電泳、轉印、酶免疫測定3個階段。Westernblot法結合了電泳的高分辨率和酶免疫測定的高敏感性和特異性,是一種能用于分析樣本組分的免疫學測定方法。
Westernblot法的起源和發展
生物大分子印跡法實際上是凝膠電泳技術、固定化技術及分子親和技術三者融為一體的綜合性技術,其核心在于把凝膠電泳已分離的區帶轉移并印跡于固定化紙上。生物大分子印跡法始創于1975年,內蘇格蘭愛丁堡大學E.M.Southern首先提出。他將限制酶切后的DNA片段先進行瓊脂糖凝膠電泳,把一張硝酸纖維素紙放在
分子診斷的基本流程
多年來，大部分分子診斷實驗室的核心技術都主要集中在檢測特異性、相對較短的DNA或RNA片段上。該技術能診斷傳染性疾病、鑒別影響藥物代謝的特殊基因變異型或檢測與疾病有關的基因，如與癌癥有關的基因。這些檢測的核心是實時定量聚合酶鏈反應（PCR）、轉錄調節擴增（TMA）、靶向擴增和信號擴增等類似技術的應用
WesternBlot目的帶很弱如何加強？
1）可以加大抗原上樣量，這是最主要的；2）也可以將一抗稀釋比例降低；3）還可以延長曝光時間。
Westernblot法實驗所需儀器
伯樂生命bio-rad-Trans-Blot 轉印槽是一種多功能儀器,適用于多種Westernblot法應用。功能和優點:能進行多膠轉印多組參數靈活可設,可調節的電壓設置(從30V的過夜轉印到到 200 V的1 小時快速實驗)。電極間距設置為8cm可用于標準轉印,設置為4cm用于高強度轉印。采用特級
氣相色譜的基本流程
從圖中可以看出，氣相色譜儀通常由以下五個部分組成：1)氣源和載氣的控制和測量(1)氣源氣源多采用高壓瓶(氫、氮、氬等)做高純氣的儲存器，并裝有減壓閥，使高壓氣體減壓 成低壓氣體(0．1-O．5MPa)以供使用。鋼瓶供給的氣體稱為流動相，又稱載氣。載氣的作用 主要是把樣品輸送到色譜柱和檢測器中
紙電泳的基本操作流程
(1)?電泳緩沖液?枸櫞酸鹽緩沖液(pH3.0) 取枸櫞酸 (C6H8O7·H2O)39.04g與枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g，加水4000ml，使溶解。(2)?濾紙?取色譜濾紙置1mol/L甲酸溶液中浸泡過夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60℃烘箱烘干，備用。
射線探傷基本操作流程
透照操作應嚴格遵守工藝規定，操作程序、內容及有關要求簡述如下：試件檢查及清理試件上如有妨礙穿透或妨礙貼片的附加物，如設備附件、保溫材料等，應盡可能去除。事件表面質量應經外觀檢查合格，如表面不規則狀態可能在底片上產生掩蓋焊縫中缺陷的圖像時，應對表面進行打磨休整。???劃線按照工藝文件規定的檢查部位、比
WesternBlot有很多雜帶原因分析
1）目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小2) 樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作3）雜蛋白多，建議處理目的蛋白4）抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體5）抗體孵育
Westernblot實驗步驟及注意事項
Westernblot 實驗步驟?1. 組織塊稱重?2. 利用液氮、研缽粉碎組織塊?3. 加入RIPA緩沖液（每克組織3 ml RIPA），PMSF（每克組織30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron進一步勻漿（15,000轉/分*1分鐘）維持4℃4. 加入PMSF（每克組織30μ
水浴鍋的使用基本流程
（1） 水浴鍋使用時必須先加適量的潔凈自來水于鍋內，也可按需要的溫度加入熱水，以縮短加熱時間。 （2）接通電源，選擇溫度。 配備電子式恒溫器時，將“溫度旋鈕”順時針調節到所需要的溫度，此時為加熱狀態，綠色指示燈亮。當加熱到所需溫度時，紅色指示燈亮，此時為恒溫狀態。 配備數顯表頭時，計數器
濃縮蒸發器基本流程
濃縮蒸發器的蒸發過程需要有蒸發器、冷凝器、換熱器等組成。即兩個組成部分，加熱溶劑使水蒸氣汽化和不斷除去汽化的水蒸氣，前一部分在蒸發器內進行，后一部分在冷凝器完成。濃縮蒸發器實質上是一個換熱器，由加熱室的分離室兩部分組成。加熱室通常用飽和水蒸氣加熱，從溶液中蒸發出來的水蒸汽在分離室內分離后從蒸發器
WesternBlot實驗方法及注意事項
實驗原理：WesternBlot印跡方法，又稱為免疫印記，是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離，并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非標記抗體（一抗）與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合，再與經辣根過氧化
簡介活性污泥法的基本流程
典型的活性污泥法是由曝氣池、沉淀池、污泥回流系統和剩余污泥排除系統組成。污水和回流的活性污泥一起進入曝氣池形成混合液。從空氣壓縮機站送來的壓縮空氣，通過鋪設在曝氣池底部的空氣擴散裝置，以細小氣泡的形式進入污水中，目的是增加污水中的溶解氧含量，還使混合液處于劇烈攪動的狀態，呈懸浮狀態。溶解氧、活性
單克隆抗體技術的基本流程
單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇(PEG)作用下發生細胞融合;加入HAT選擇培養基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤細胞因其從頭合成途徑被氨基蝶呤阻斷,而又缺乏HGPRT不能利用補救途徑合成DNA,從而死亡;未融合的脾細胞難以在體外培養而死亡;融合細胞因從脾細胞獲得HGPRT,故
免疫吸附療法的基本操作流程
免疫吸附療法的基本操作流程是將患者血液引出體外,建立體外循環并抗凝,血液流經血漿分離器分離出血漿,將血漿引入免疫吸附器與免疫吸附劑接觸,以選擇性吸附的方式清除致病物質,然后將凈化的血漿回輸患者體內,達到治療目的。有的免疫吸附裝置不需要分離血漿,而可直接進行血液灌流式免疫吸附治療。
液相色譜儀的基本操作流程
液相色譜儀操作流程1、開機：依次打開脫氣機、色譜泵、檢測器、計算機電源；待各設備自檢正常后，啟動色譜管理系統。2、流動相準備：過濾，脫氣。3、色譜泵排氣4、安裝色譜柱5、平衡流動相（有機溶劑與緩沖鹽溶液切換時等易產生沉淀，需先使用90%超純水/10%甲醇作為流動相沖洗系統）6、數據采集、進樣7、沖洗
加壓溶氣氣浮法的基本流程
加壓溶氣氣浮分三種流程：全溶氣流程、部分溶氣流程和回流加壓溶氣流程。全溶氣流程是將被處理的廢水全部進行加壓溶氣，然后再經釋放器進入氣浮池，進行固液分離，如圖1（a）所示。部分溶氣流程是將被處理廢水的一部分進行加壓溶氣，其余廢水直接進入浮選池。由于是部分水加壓溶氣，所以相對于全溶氣流程，氣泡量較少。如
PCR的基本原理是什么？其基本流程如何？
一、基本原理：PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可
實驗室檢測業務基本流程
1.檢測申請人負責填寫《化學檢測申請單》并提供檢測用的樣品和相關的技術資料、信息。實驗室樣品管理員進行收樣并有技術負責人進行復核確認。2檢測受理本實驗室受理檢測業務，均由實驗室樣品管理員統一接收，其它人員不得擅自接收檢測樣品。樣品的檢查和管理應按照《樣品管理程序》執行。對于例行、重復性和其它簡單的檢
WesternBlot為啥條帶形狀不好看原因分析
1）膠凝的不均勻或聚合不好，建議灌膠前將溶液充分混勻2）某些樣品鹽濃度較高，建議除鹽或將樣品鹽濃度調成一致3) 緩沖液陳舊，成分改變,可以重配4) 凝膠下面有氣泡,電泳前要先將氣泡趕走5）電泳時溫度過高，可以降低電流或電壓6）樣品中含有不溶性顆粒，建議樣品充分攪拌混勻
WesternBlot蛋白條帶位置（大小）不對如何整？
膠濃度不對，不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差，可以調整濃度。抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度，延長孵育時間。1）酶失活，建議直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物。2）目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體，建議查詢相關文獻確定。3）標本中不含靶蛋白或靶
全自動數字熔點儀的基本操作流程
全自動數字熔點儀工作原理是物質在潔凈狀態時反射光線，在熔化狀態時透射光線。因此物質在熔化過程中隨著溫度的升高會產生透光度的約變。熔點測定儀采用光電方式自動檢測熔化過程。當溫度達到初熔點和終容點時，顯示初熔溫度和終容溫度，并保存到檢測下一樣品。 ? ?1.開啟電源開關，屏幕顯示“歡迎使用****”等內
全自動數字熔點儀的基本操作流程
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全自動數字熔點儀的基本操作流程
?全自動數字熔點儀工作原理是物質在潔凈狀態時反射光線，在熔化狀態時透射光線。因此物質在熔化過程中隨著溫度的升高會產生透光度的約變。熔點測定儀采用光電方式自動檢測熔化過程。當溫度達到初熔點和終容點時，顯示初熔溫度和終容溫度，并保存到檢測下一樣品。? ? 1.開啟電源開關，屏幕顯示“歡迎使用****”等
基因組DNA文庫構建的基本流程
基因組 ?DNA文庫有十分廣泛的用途，如用于分析、分離特定的基因片段，用以基因表達調控、人類及動植物基因組工程的研究。通常情況下，基因組文庫構建的基本流程可以歸為4大步驟：分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。 一、分離基因組DN
離子交換色譜實驗的基本流程介紹
預處理和裝柱 1. 將超純水與沉降膠按1:3 比例懸浮，輕輕攪勻； 2. 將色譜柱固定到設備支架上，鏈接出口管道，從柱底端進口反向泵入超純水，排除管道及篩板中的氣泡，停泵，然后從出口端放出部分超純水，保留1~2cm 高度超純水，封死出口端，然后正向沖洗進口端管道和適配器，排除篩板和管道中氣泡